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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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細(xì)胞常見的促貼壁物質(zhì)和包被方法2023/03/27
大部分來自實(shí)體組織器官的細(xì)胞都會貼壁，但不是所有的細(xì)胞在體外培養(yǎng)的情況下都會貼壁。下面一起來看下細(xì)胞常見的促貼壁物質(zhì)和包被方法。密度大于培養(yǎng)基的細(xì)胞（絕大部分細(xì)胞）通過重力作用會沉降在底面上，這是種自然屬性，那么細(xì)胞要生存必定得改善這個(gè)環(huán)境，也是貼壁的主要原因-分泌細(xì)胞外基質(zhì)和黏附因子（Extracellularmatrix&CellAdhesionMolecules，ECM&CAM），改善底面的結(jié)構(gòu)，然后很自然就貼附在底面上了。細(xì)胞粘附分子：是眾多介導(dǎo)細(xì)胞間或細(xì)胞與細(xì)胞之間相互接觸和結(jié)合分子的
抗體和重組蛋白的使用方法及保存介紹2023/03/27
無論是保存還是運(yùn)輸，請避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融，冰晶會破壞抗體和重組蛋白的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構(gòu)象改變，從而降低抗體的結(jié)合能力，也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度?？贵w和重組蛋白保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果，如果保存得當(dāng)，抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。1.收到抗體和重組蛋白后的操作收到抗體和重組蛋白后（大部分抗體和重組蛋白是溶液態(tài)），請務(wù)必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，再打開管蓋進(jìn)行分裝、溶解和保存（如果抗體和重組蛋白體積小于50
單糖、二糖、多糖的區(qū)別與鑒定2023/03/24
單糖、二糖、多糖的區(qū)別1、作用不一樣單糖，通過分解為人體提供能力，血糖就是存在于血液中的葡萄糖。二糖，天然存在的游離態(tài)和具有機(jī)能的糖類以哺乳類的乳糖、細(xì)菌和昆蟲血液等的海藻糖、植物的蔗糖為代表。這些是作為各種生物體的能量來源，或者作為生物體組成的物質(zhì)原料，承擔(dān)著所必需的糖類的貯藏或運(yùn)輸?shù)闹匾饔?。多糖，免疫調(diào)節(jié)方面，能減少通常使用的免疫抑制劑的諸如細(xì)胞毒性、機(jī)體抗感染能力下降、對骨髓造血細(xì)胞的繁殖抑制等副作用。2、分類不一樣單糖可分為丙糖、丁糖、戊糖、己糖等。二糖，蔗糖、麥芽糖、乳糖等。多糖的廣
遠(yuǎn)慕分享斜面培養(yǎng)基的制作方法2023/03/24
斜面培養(yǎng)基的制作方法1、配制溶液向容器內(nèi)加入所需水量的一部分，按照培養(yǎng)基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶解，最后補(bǔ)足所需水分。對蛋白胨、肉膏等物質(zhì)，需加熱溶解，加熱過程所蒸發(fā)的水分，應(yīng)在全部原料溶解后加水補(bǔ)足。配制固體培養(yǎng)基時(shí)，先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至wan全融化。并不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦。2、調(diào)節(jié)pH值用pH試紙（或pH電位計(jì)、氫離子濃度比色計(jì)）測試培養(yǎng)基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進(jìn)行調(diào)節(jié)，直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為
PCR反應(yīng)技術(shù)的反應(yīng)基本步驟2023/03/24
PCR全過程包括三個(gè)基本步驟,即雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈(變性);在低溫下引物與單鏈DNA互補(bǔ)配對(退火);在適宜溫度下TaqDNA聚合酶以單鏈DNA為模板,利用4種脫氧核苷三磷酸(dNTP)催化引物引導(dǎo)的DNA合成(延伸)。這三個(gè)基本步驟構(gòu)成的循環(huán)重復(fù)進(jìn)行,可使特異性DNA擴(kuò)增達(dá)到數(shù)百萬倍。1、變性90～94℃的高溫處理可使模板DNA雙鏈間氫鍵斷裂,解離成單鏈但不改變其化學(xué)性質(zhì),變性的時(shí)間一般為30s,如果模板的G+C含量較高,變性時(shí)間可能延長。2、退火退火的溫度一般降低至25～65℃。在
遠(yuǎn)慕介紹自然菌種選育的步驟2023/03/24
自然選育的步驟主要是：采樣，增長培養(yǎng)，培養(yǎng)分離和篩選等。采樣篩選的菌種采集的對象以土壤為主，也可以是植物、fu敗物品和某些水域等。土壤是微生物的匯集地，從土壤中幾乎可以分離到任何所需的微生物，故土壤往往是shou選的采集目標(biāo)。微生物的營養(yǎng)需求和代謝類型與生長環(huán)境有很大關(guān)系。富集培養(yǎng)由于采集樣品中各種微生物數(shù)量有很大差異，若估計(jì)到要分離的菌種數(shù)量不多時(shí)，就要人為增加分離的概率，增加該菌種的數(shù)量，稱為富集培養(yǎng)。純種培養(yǎng)盡管通過增長培養(yǎng)的效果很好，但是得到的微生物還是處于混雜狀態(tài)，因?yàn)闃悠分斜旧砗性S
微生物污染，如何快速鑒定污染源？2023/03/23
無菌藥品的要求在制藥行業(yè)中算是最為嚴(yán)格的。近些年，藥品質(zhì)量控制的觀念也在不斷發(fā)生改變，從“檢驗(yàn)控制藥品質(zhì)量”到“通過生產(chǎn)過程控制”，繼而又到“質(zhì)量源于設(shè)計(jì)”理念。質(zhì)量控制，特別無菌檢查的可信度很低，憑無菌檢查結(jié)果來判斷批次是否無菌并不能確保無菌藥品的質(zhì)量。最終產(chǎn)品的無菌絕不能只參考質(zhì)量檢測下定論。藥品生產(chǎn)過程必須嚴(yán)格遵守工藝流程，藥品生產(chǎn)所需的潔凈區(qū)是無菌生產(chǎn)的基本要求。潔凈室內(nèi)的微生物種類和數(shù)量是無菌藥品質(zhì)量控制中重要參考內(nèi)容。潔凈室監(jiān)控參數(shù)主要有：溫濕度、壓差、換氣次數(shù)、風(fēng)速、氣流流型、懸浮
常規(guī)培養(yǎng)基的配制流程介紹2023/03/23
1、計(jì)算稱量根據(jù)待檢樣品屬性計(jì)算出所需的不同培養(yǎng)基的體積，根據(jù)說明書進(jìn)行準(zhǔn)確稱量；電子天平需開機(jī)預(yù)熱30min后使用，稱量過程中手要穩(wěn)，避免將培養(yǎng)基灑落在天平稱量盤中，若灑落，應(yīng)立即停止稱量，使用潔凈布擦干粉末，重新調(diào)“0”后稱量。2、溶化對于可溶性淀粉,先用少量冷水調(diào)成糊狀,再放入沸水中；不易溶解的培養(yǎng)基，先加入少量純化水振搖溶解后，二次加水配制；需分裝的培養(yǎng)基，需wan全溶解，含瓊脂的培養(yǎng)基需加熱融化，wan全溶解后，分裝至不同容器中進(jìn)行滅菌。3、分裝如果要制作斜面培養(yǎng)基，須將培養(yǎng)基分裝于試
遠(yuǎn)慕生物總結(jié)滅菌方法的要點(diǎn)！2023/03/23
滅菌的定義滅菌（sterilization）系指用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的過程。無菌物品無菌物品是指物品中不含任何活的微生物。非無菌概率對于任何一批無菌物品而言，絕對無菌既無法保證也無法用試驗(yàn)來證實(shí)。一批物品的無菌特性只能通過物品中活微生物的概率來表述，即非無菌概率（ProbabilityofaNonsterileUnit，PNSU）或無菌保證水平（SterilityAssuranceLevel，SAL）。已滅菌物品達(dá)到的非無菌概率可通過驗(yàn)證確定。無菌物品的無菌保證不能
關(guān)于“微生物”的含義及分類2023/03/23
我們一直說“微生物”、“微生物檢測”但是微生物到底是什么，有哪些是微生物？你真的能夠回答全面嗎？下面遠(yuǎn)慕為大家介紹下微生物的定義及分類：微生物是指那些個(gè)體體積直徑一般小于1mm的生物群體，它們結(jié)構(gòu)簡單，大多是單細(xì)胞，還有些甚至連細(xì)胞結(jié)構(gòu)也沒有。人們通常會借助顯微鏡或者電子顯微鏡才能看清它們的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。需要說明的是微生物是一個(gè)比較籠統(tǒng)的概念，界線有時(shí)會非常模糊。如單細(xì)胞藻類和一些原生動物也應(yīng)算是微生物，但通常它們并不放在微生物中進(jìn)行研究。按我國學(xué)者提出的分類法將生物分成六界：病毒界、原核生物界、
遇到酶切不動或切不完的處理辦法2023/03/22
遇到這種問題常常需要了解酶活性單位是如何確定，我們多次接到這樣的問題：1個(gè)單位的酶能在60分鐘內(nèi)切1ug的DNA,為什么我們的DNA那么少切那么長時(shí)間也不能切開或切wan完quan？從下面幾個(gè)因素去考慮：1)酶是否有活性：酶的活性單位通常是在60分鐘酶切1uglambdaDNA或特定線狀DNA所需要的酶量。鑒定酶的活性高低不是用您待切的DNA模板，也不是別的公司的酶來判定。因?yàn)椴煌久缚赡苁菑牟煌到y(tǒng)中純化的，雖然識別位點(diǎn)相同，但是酶的特性可能是有差異的。鑒定酶必須使用使用說明書上認(rèn)定的酶活確
【生物酶學(xué)基礎(chǔ)】酶的提取和分離純化2023/03/22
許多酶都存在于細(xì)胞內(nèi)。為了提取這些胞內(nèi)酶，首先需要對細(xì)胞進(jìn)行破碎處理。細(xì)胞破碎的方法很多，主要包括機(jī)械破碎法、物理破碎法、化學(xué)破碎法和酶學(xué)破碎法等。機(jī)械破碎法是指利用搗碎機(jī)、研磨器或勻漿器等將細(xì)胞破碎開來。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細(xì)胞破碎開來?；瘜W(xué)破碎法是指利用甲醛、丙酮等有機(jī)溶劑或表面活性劑作用于細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變。酶學(xué)破碎法是指選用合適的酶，使細(xì)胞壁遭到破壞，進(jìn)而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎開來。酶的提取是指在一定條件下，用適當(dāng)?shù)娜軇┨幚砑?xì)胞破碎后
過氧化氫酶與過氧化物酶的區(qū)別2023/03/22
過氧化氫酶又稱觸酶與過氧化物酶，這兩種酶都含有血紅素輔基，其底物中都含有過氧化物，如過氧化氫，因而經(jīng)常被有些人混為一談，甚至在論述其機(jī)理時(shí)說：“過氧化物酶作用于過氧化氫，使過氧化氫放出新生氧，氧化聯(lián)苯胺，使之呈藍(lán)色……”，這顯然是不對的，我們可以從下列反應(yīng)式中看出。在這一反應(yīng)中，實(shí)際上底物只有一種—H2O2，只不過一分子的H2O2作為氫（電子）的供體，它被氧化（脫氫）成O2，而另一個(gè)分子的H2O2則為氫的受體，在接受氫原子后被還原成水（H2O）。在這個(gè)反應(yīng)中，底物有兩個(gè)，除了H2O2外，還有一個(gè)
過氧化氫酶探究pH值對酶活性的影響實(shí)驗(yàn)步驟2023/03/22
①實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖翘骄縫H對過氧化氫酶活性的影響，故先在1號、2號、3號試管中各加入2mL新配制的體積分?jǐn)?shù)為3%的過氧化氫溶液，再向l號試管內(nèi)加入lmL蒸餾水，向2號試管內(nèi)加入1mL（等量）氫氧化鈉溶液，向3號試管內(nèi)加入1mL（等量）鹽酸溶液，并振蕩試管。②據(jù)題分析可知，向1號、2號、3號試管內(nèi)各滴入2滴雞肝研磨液。③氣泡的多少反應(yīng)了過氧化氫酶活性的高低。仔細(xì)觀察各試管內(nèi)產(chǎn)生氣泡的多少，并記錄。在最適pH時(shí)，酶的活性最高；當(dāng)高于或低于最適pH時(shí)，酶的活性都會降低．故實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：1號試管內(nèi)產(chǎn)生的氣泡較多
瓊脂糖凝膠電泳 Marker條帶不直原因2023/03/21
瓊脂糖凝膠電泳Marker條帶不直原因1.首先要排除瓊脂糖凝膠配制的是否正確，如果齒孔不規(guī)則或殘余凝膠顆粒則會使條帶不規(guī)則；2.檢查電泳槽的電極是否出現(xiàn)移位、歪斜；3.考慮更換電泳緩沖液；4.電壓不要太高，否則凝膠會受熱。此外，跑出漂亮的瓊脂糖電泳照片遠(yuǎn)慕有2個(gè)經(jīng)驗(yàn)供參考：1.瓊脂糖凝膠配好后在在槽子里先空跑十幾分鐘然后斷電放置備用；2.老式槽子放凝膠位置的下方有一水箱，往里充入涼水，電泳時(shí)可降低凝膠的溫度放置DNA條帶變形。瓊脂糖凝膠電泳Marker條帶不直原因1.首先要排除瓊脂糖凝膠配制的是
遠(yuǎn)慕總結(jié)：質(zhì)粒DNA的提取方法2023/03/21
(一)堿裂解法提取質(zhì)粒[實(shí)驗(yàn)原理]堿裂解法提取質(zhì)粒是根據(jù)共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA與線性染色體DNA在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來分離它們。在pH值介于12.0~12.5這個(gè)狹窄的范圍內(nèi),線性的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而被變性,盡管在這樣的條件下,共價(jià)閉環(huán)質(zhì)粒DNA的氫鍵會被斷裂,但兩條互補(bǔ)鏈彼此相互盤繞,仍會緊密地結(jié)合在一起。當(dāng)加入pH4.8的乙酸鉀高鹽緩沖液恢復(fù)Ph至中性時(shí)，共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA的兩條互補(bǔ)鏈仍保持在一起，因此復(fù)性迅速而準(zhǔn)確，在而線性的染色體DNA的兩條互補(bǔ)鏈彼此已wan全分開，復(fù)性就不會那么迅
【酶切知識】酶切原理和實(shí)驗(yàn)過程分享2023/03/21
酶切的原理：DNA酶切一般分為質(zhì)粒直接酶切和PCR產(chǎn)物酶切。限制性內(nèi)切酶能特異地結(jié)合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內(nèi)或其附近的特異位點(diǎn)上，并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類、Ⅱ類、Ⅲ類。Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質(zhì)分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴于ATP的存在。Ⅰ類酶結(jié)合于識別位點(diǎn)并隨機(jī)的切割識別位點(diǎn)不遠(yuǎn)處的DNA，而Ⅲ類酶在識別位點(diǎn)上切割DNA分子，然后從底物上解離。Ⅱ類由兩種酶組成:一種為限制性內(nèi)切核酸酶(限制酶)，它切割某一特異的核苷酸序列;另一種為獨(dú)立的甲基化酶，它修飾
常見限制性內(nèi)切酶識別序列(酶切位點(diǎn))2023/03/21
常見限制性內(nèi)切酶識別序列(酶切位點(diǎn))（BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等）在分子克隆實(shí)驗(yàn)中，限制性內(nèi)切酶是bu不可少的工具酶。無論是構(gòu)建克隆載體還是表達(dá)載體，要根據(jù)載體選擇合適的內(nèi)切酶（當(dāng)然，使用T載就不必考慮了）。先將引物設(shè)計(jì)好，然后添加酶切識別序列到引物5'端。常用的內(nèi)切酶比如BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等可能你都已經(jīng)記住了它們的識別序列，不過為了保險(xiǎn)起見，還是得查證一下。下面是一些常用的II型內(nèi)切酶的識別序列，僅供參考。遠(yuǎn)慕先介紹一下
層析法的原理、分類以及應(yīng)用介紹2023/03/20
層析法利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)間的差異（溶解度、分子極性、分子大小、分子形狀、吸附能力、分子親合力等），使各組分在支持物上集中分布在不同區(qū)域，借此將各組分分離。層析法進(jìn)行時(shí)有兩個(gè)相，一個(gè)相稱為固定相，另一相稱為流動相。由于各組分所受固定相的阻力和流動相的推力影響不同，各組分移動速度也各異，從而使各組分得到分離。層析技術(shù)與待分離混合物中各組分的理化性質(zhì)（分子自然形狀、大小、獲電狀態(tài)、溶解度與選擇性吸附劑或載體物的吸附能力，分配系數(shù)、酸堿環(huán)境、溫度、極性以及分子的親和能力等）有著直接關(guān)系。除
遠(yuǎn)慕解析：膠原纖維的結(jié)構(gòu)組成2023/03/20
Ⅰ型膠原的原纖維平行排列成較粗大的束，成為光鏡下可見的膠原纖維，抗張強(qiáng)度超過鋼筋。其三股螺旋由二條α1（Ⅰ）鏈及一條α2（Ⅰ）鏈構(gòu)成。每條α鏈約含1050個(gè)氨基酸殘基，由重復(fù)的Gly-X-Y序列構(gòu)成。X常為Pro（脯氨酸），Y常為羥脯氨酸或羥賴氨酸殘基。重復(fù)的Gly-X-Y序列使α鏈卷曲為左手螺旋，每圈含3個(gè)氨基酸殘基。三股這樣的螺旋再相互盤繞成右手超螺旋，即原膠原。原膠原分子間通過側(cè)向共價(jià)交聯(lián)，相互呈階梯式有序排列聚合成直徑50~200nm、長150nm至數(shù)微米的原纖維，在電鏡下可見間隔67n
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