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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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合成多肽與重組蛋白作為抗原的分別作用2023/04/03
重組蛋白質(zhì)抗原上往往帶有多個(gè)不同的抗原決定簇,其中有些是順序決定簇,有些為結(jié)構(gòu)決定簇。利用變性的抗原免疫動(dòng)物獲得多克隆抗體是針對(duì)各個(gè)抗原決定簇的抗體的混合物,在一般應(yīng)用中能夠用于檢測(cè)天然結(jié)構(gòu)或變性的目標(biāo)蛋白。利用變性蛋白做為免疫原的一個(gè)附帶的好處是變性蛋白往往有更強(qiáng)的免疫原性,能夠刺激動(dòng)物產(chǎn)生強(qiáng)的免疫應(yīng)答。用做抗原目的的蛋白質(zhì)一般選擇使用大腸桿菌表達(dá)體系,因?yàn)樵擉w系時(shí)間與金錢(qián)成本最di。為了提高目標(biāo)蛋白質(zhì)表達(dá)的可能性與純化的方便性,人們有時(shí)只表達(dá)目標(biāo)蛋白的一個(gè)小的片段,如特定的結(jié)構(gòu)域。蛋白質(zhì)特定
蛋白質(zhì)的分離純化方法以及注意事項(xiàng)2023/04/03
蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣泛,是一項(xiàng)重要的操作技術(shù)。一個(gè)典型的真核細(xì)胞可以包含數(shù)以千計(jì)的不同蛋白質(zhì),一些含量十分豐富,一些僅含有幾個(gè)拷貝。為了研究某一個(gè)蛋白質(zhì),必須首先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來(lái)。一、主要方法1.蛋白質(zhì)的選擇吸附分離(利用顆粒不同程度的顆粒吸附力來(lái)使分離的目的達(dá)到)。2.按照配體特性的分離-親和層析(利用蛋白質(zhì)分子與另一種稱為配體的分子能夠特異結(jié)合這一生物性質(zhì))3.低溫有機(jī)溶劑沉淀法,使用如甲醇,乙醇等與水可混溶的有機(jī)溶劑,降低多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解
關(guān)于原核生物的轉(zhuǎn)錄終止形式介紹2023/03/31
原核生物的轉(zhuǎn)錄終止有兩種形式,一種是依賴ρ(Rho)因子的終止,一種是不依賴ρ因子的終止。原核生物DNA沒(méi)有共有的終止序列,而是轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物序列指導(dǎo)終止過(guò)程。轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)存在于RNA產(chǎn)物3’端而不是在DNA模板。1、依賴ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止Rho因子是rho基因的產(chǎn)物,廣泛存在于原核和真核細(xì)胞中,由6個(gè)亞基組成,分子量300KD。Rho因子結(jié)合在新生的RNA鏈上,借助水解ATP獲得能量推動(dòng)其沿著RNA鏈移動(dòng),但移動(dòng)速度比RNA聚合酶慢,當(dāng)RNA聚合酶遇到終止子時(shí)便發(fā)生暫停,Rho因子得以趕上酶。Rho因
PCR技術(shù)中常用的耐熱DNA聚合酶介紹2023/03/31
耐熱DNA聚合酶多應(yīng)用在PCR技術(shù)中。各種耐熱DNA聚合酶均具有5'-3'聚合酶活性,但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除錯(cuò)配,切平末端;5'-3'外切酶活性可以消除合成障礙。由于上述這些不同,可以將耐熱DNA聚合酶分為三類,下面遠(yuǎn)慕生物簡(jiǎn)單介紹一下。一、普通耐熱DNA聚合酶TaqDNA聚合酶由一種水生棲熱菌yT1株分離提取出,是發(fā)現(xiàn)的耐熱DNA聚合酶中活性最高的一種,達(dá)200,000單位/mg。具有5'-3'外切酶活性,但不具有3'-5'外切酶活性,因而
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)液渾濁原因分析2023/03/31
培養(yǎng)基變渾濁的原因可能有如下幾點(diǎn):1、細(xì)胞存在污染,污染早期可以見(jiàn)到細(xì)胞生長(zhǎng);2、不排除傳代時(shí)細(xì)胞密度過(guò)大,或者操作不當(dāng)導(dǎo)致多數(shù)細(xì)胞不貼壁,大量細(xì)胞漂浮。3、細(xì)胞破碎。細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲(chóng)污染、黑膠蟲(chóng)污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染.他們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)中污染的特點(diǎn)如下:1、細(xì)菌:細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯.2、支原體:黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)
細(xì)胞培養(yǎng)液中幾種蛋白的提取方法介紹2023/03/31
蛋白質(zhì)濃縮技術(shù)是免疫學(xué)中常用的手段,現(xiàn)遠(yuǎn)慕為科研小伙伴們介紹幾種常用的濃縮技術(shù)1、透析袋濃縮法利用透析袋濃縮蛋白質(zhì)溶液是應(yīng)用最guang的一種.將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋(無(wú)透析袋可用玻璃紙代替),結(jié)扎,把高分子(6000-12000)聚合物如聚乙二醇(碳蠟)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可將吸水劑配成30%-40%濃度的溶液,將裝有蛋白液的透析袋放入即可.吸水劑用過(guò)后,可放入溫箱中烘干或自然干燥后,仍可再用.2、冷凍干燥濃縮法這是濃縮蛋白質(zhì)的一種較好的辦法,它既使蛋白質(zhì)不易變
高氏1號(hào)培養(yǎng)基制備的操作步驟2023/03/30
高氏1號(hào)培養(yǎng)基制備的操作步驟1、稱量和溶化按配方先稱取可溶性淀粉,放入小燒杯中,并用少量冷水將淀粉調(diào)成糊狀,再加入少于所需水量的沸水中,繼續(xù)加熱,使可溶性淀粉wan全溶化。然后再稱取其他各成分,并依次溶化,對(duì)微量成分FeSO4.7H2O可先配成高濃度的貯備液,按比例換算后再加入。待所有試劑wan全溶解后,補(bǔ)充水分到所需的總體積。配制固體培養(yǎng)基時(shí),將稱好的瓊脂放入已溶的試劑中,在加熱融化,最后補(bǔ)充所損失的水分。2、調(diào)pH用試紙測(cè)培養(yǎng)基的原始PH,如果偏酸,用滴管向培養(yǎng)基中加入1mol/LNaOH,
血液瓊脂培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)2023/03/30
實(shí)驗(yàn)方法原理血液培養(yǎng)基是一種含有脫纖維動(dòng)物血(一般用兔血或羊血)的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,因此除培養(yǎng)細(xì)菌所需要的各種營(yíng)養(yǎng)外,還能提供輔酶(如V因子),血紅素(X因子)等特殊生長(zhǎng)因子。因此血液培養(yǎng)基常用于培養(yǎng),分離和保存對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求苛刻的某些病原微生物。此外,這種培養(yǎng)基還可用來(lái)測(cè)定細(xì)菌的溶血作用。實(shí)驗(yàn)材料兔羊試劑、試劑盒牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基儀器、耗材三角瓶平皿注射器實(shí)驗(yàn)步驟一、血液培養(yǎng)基配方二、器材1.培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。2.儀器或其他用具裝有5~10粒玻璃珠的無(wú)菌三角瓶,無(wú)菌注射器,無(wú)血平皿等。3
石蠟切片的酶免疫組化注意事項(xiàng)2023/03/30
一.石蠟切片在染色過(guò)程中出現(xiàn)脫片現(xiàn)象?一般來(lái)說(shuō),如果用多聚賴氨酸包被過(guò)的片子做正常免疫組織化學(xué)染色的話是不會(huì)掉片子的。但如果要做抗原修復(fù)的話,如果片子處理不好的話是有可能掉片子的。你可以試試一下的方法:1.一般用APES:丙酮=1:50的處理液來(lái)處理片子,處理5min左右,然后水洗,烘干既可用于貼片。如果把水滴再處理好的片子上,水比較聚的話說(shuō)明片子處理的好。2.貼片子的時(shí)候,展片的時(shí)間要把握好,不要太長(zhǎng),否則不利于貼牢。3.烤片子也很重要,切好的片子最好先不要馬上收起來(lái),而是水平至于烘片臺(tái)上37
大腸桿菌的生化特性簡(jiǎn)介以及在生物技術(shù)中的應(yīng)用2023/03/30
大腸桿菌作為外源基因表達(dá)的宿主,遺傳背景清楚,技術(shù)操作簡(jiǎn)單,培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單,大規(guī)模發(fā)酵經(jīng)濟(jì),倍受遺傳工程專家的重視.目前大腸桿菌是應(yīng)用蕞廣泛,最成功的表達(dá)體系,常做高效表達(dá)的shou選體系。真核基因在大腸桿菌中表達(dá),必須有合適的表達(dá)載體(Vector),常用載體:pBV220,pET系統(tǒng)目的基因在大腸桿菌中表達(dá)的情況:大腸桿菌更適合原核基因的表達(dá),外源基因表達(dá)產(chǎn)量與單位體積產(chǎn)量是正相相關(guān)的,而單位體積產(chǎn)量與細(xì)胞濃度和每個(gè)細(xì)胞平均表達(dá)產(chǎn)量呈正相相關(guān).細(xì)胞濃度與生長(zhǎng)速率,外源基因拷貝數(shù)和表達(dá)產(chǎn)物產(chǎn)量之
實(shí)驗(yàn)人如何正確制備細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)樣品2023/03/29
細(xì)胞周期分析是分子生物學(xué)常用的實(shí)驗(yàn)方法,尤其在抗腫瘤藥物研究上使用普遍。但細(xì)節(jié)若是處理不好,做得再多也做不出正確的、好看的分布圖。今天遠(yuǎn)慕生物來(lái)測(cè)下如何準(zhǔn)確制備細(xì)胞周期測(cè)試的樣品,科研實(shí)驗(yàn)的小伙伴們一起來(lái)了解下!先簡(jiǎn)單介紹下實(shí)驗(yàn)原理碘化丙啶(PI)是一種核酸染料,可以與DNA和RNA結(jié)合,但其不能透過(guò)正常的細(xì)胞膜,所以對(duì)活細(xì)胞無(wú)染色作用??赏ㄟ^(guò)冷乙醇或其他破膜劑的作用,使細(xì)胞膜通透性增加。PI進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后,選擇性地與核酸結(jié)合,RNase裂解RNA后,細(xì)胞內(nèi)染料的熒光量與細(xì)胞核內(nèi)的DNA含量成正比
【核酸染料選擇】遠(yuǎn)慕教您選擇符合實(shí)驗(yàn)要求的核酸染料2023/03/29
核酸染料是一種靈敏、穩(wěn)定和相對(duì)安全的熒光核酸染色試劑,是生物實(shí)驗(yàn)中不ke或缺的一分子,尤其是在核酸檢測(cè)相關(guān)試驗(yàn)中,所以核酸染料對(duì)于分子生物學(xué)相關(guān)專業(yè)的學(xué)生來(lái)說(shuō)并不陌生,該如何選擇適合自己使用的核酸染料呢?以下從幾個(gè)方面來(lái)說(shuō)明:1、安全性:如果選擇EB替代染料,那么染料的安全性就是一個(gè)非常重要的指標(biāo)。安全性評(píng)估主要的檢測(cè)有Ames測(cè)試、細(xì)胞滲透性實(shí)驗(yàn)、染色體畸變和正向突變分析、口服毒性分析等。在安全性方面,具有較多檢測(cè)項(xiàng)目和機(jī)構(gòu)出具檢測(cè)報(bào)告的核酸染料,安全性可能會(huì)更高;另外在一些報(bào)道或?qū)Ρ葦?shù)據(jù)中,
實(shí)時(shí)熒光定量PCR與普通PCR的差異2023/03/29
實(shí)時(shí)熒光定量PCR與普通PCR的區(qū)別你知道嗎?已知二者結(jié)果相同。都能說(shuō)明生物體外的特殊DNA復(fù)制的整個(gè)過(guò)程的擴(kuò)增效率和溶解溫度情況。實(shí)時(shí)熒光定量PCR與普通PCR的區(qū)別:1、二者系統(tǒng)組成不同熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)。2、二者原理不同熒光定量PCR實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)與DNA結(jié)合的熒光染料激發(fā)的熒光,普通OCR通過(guò)檢測(cè)插入DNA中核算染料的量來(lái)測(cè)定PCR最終產(chǎn)物量。3、二者反應(yīng)要求不同熒光定量PCR對(duì)擴(kuò)增片段有較高的要求,一般為100-300bp,普通PCR可以
實(shí)驗(yàn)室PCR產(chǎn)物的電泳和純化分析2023/03/29
實(shí)驗(yàn)室PCR產(chǎn)物的電泳及純化一、目的(1)了解PCR產(chǎn)物電泳與純化的原理。(2)熟悉和掌握PCR產(chǎn)物電泳與純化的操作。二、原理在PCR過(guò)程中,部分引物和dNTPs在Taq酶等因子的作用下以DNA模板為指導(dǎo)合成新的DNA分子,當(dāng)然還有一部分的引物和dNTPs沒(méi)有完成所期望的任務(wù),以小分子的形式存在于PCR產(chǎn)物混合液中,為了后續(xù)分子克隆的工作能夠順利進(jìn)行,PCR產(chǎn)物就需要進(jìn)行純化,以去除PCR產(chǎn)物混合液中殘留的Taq酶、BSA、Mgt+、引物dNTPs.buffer中的小分子以及非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。通
遠(yuǎn)慕教你正確提取胎牛血清白蛋白2023/03/28
胎牛血清白蛋白(BSA),又稱第五組分,是牛血清中的一種白蛋白,包含583個(gè)氨基酸殘基,分子量為66.430kDa,等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,例如在westernblot中作為Blockingagent;在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA,通過(guò)提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度,對(duì)酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附,能減輕有些酶的變性,能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱,表面張力及化學(xué)因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋白,一般獲取胎牛血清白蛋白,常常運(yùn)用的方法是加熱法。下面跟著遠(yuǎn)慕
胎牛血清與小牛血清有哪些不同?2023/03/28
在細(xì)胞培養(yǎng)之中最不ke或缺的便是細(xì)胞培養(yǎng)基,而現(xiàn)如今隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步,發(fā)現(xiàn)以胎牛血清和小牛血清為主的兩種細(xì)胞培養(yǎng)器效果最hao。相關(guān)的科研工作者在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),首先需要購(gòu)買相關(guān)的血清培養(yǎng)基,那么便會(huì)面臨胎牛血清和小牛血清之間的選擇,以下遠(yuǎn)慕生物為大家介紹一下胎牛血清和小牛血清之間的區(qū)別都有哪些,來(lái)幫助各類科研工作者進(jìn)行更快速的辨別與選擇。一:采集方式不同據(jù)調(diào)查得知,胎牛血清是在對(duì)懷孕八個(gè)月的母牛直接進(jìn)行心臟穿刺取血得出的血清,而小牛血清是在小牛出生后一天之內(nèi)通過(guò)靜脈采血所得到的血清。這兩
怎么預(yù)防胎牛血清培養(yǎng)中出現(xiàn)小黑點(diǎn)?2023/03/28
為什么胎牛血清培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)?經(jīng)過(guò)詳細(xì)分解,遠(yuǎn)慕生物得出以下結(jié)論,為防止客戶由于操作方面而使黑點(diǎn)生成的辦法。對(duì)此一定要做好以下幾點(diǎn)。方可使細(xì)胞培養(yǎng)順利。(1)盡可能地減少血清凍融次數(shù)。(2)培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴。(3)培養(yǎng)基保持PH值7.0-7.2。(4)嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。(5)掌握細(xì)胞傳代的時(shí)機(jī),細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。1、化凍將血清從-20度冰箱中取出,室溫(或浸于自來(lái)水中)化凍(約需要30分鐘至2小時(shí),也可放于4度冰箱化凍過(guò)夜;化凍后若不馬上滅活,可以放入4度冰箱中暫時(shí)保存
遠(yuǎn)慕教你怎么把菌種培養(yǎng)成菌液2023/03/28
把菌種培養(yǎng)成菌液的處理方法⒈光合菌群:EM菌液中的光合菌群(好氧性和厭氧性)屬于獨(dú)立營(yíng)養(yǎng)微生物,它能利用土壤接受太陽(yáng)熱能或以紫外線為能源,將土壤中的硫化氫和碳?xì)浠衔镏械臍浞蛛x出來(lái),變有害物質(zhì)為無(wú)害物質(zhì),并以植物根部的分泌物、有機(jī)物、有害氣體(硫化氫等)及二氧化碳、氮等為基質(zhì),合成糖類、氨基酸、維生素類、氮素化合物和生理活性物質(zhì)等,是肥沃土壤和促進(jìn)動(dòng)植物生長(zhǎng)的主力部隊(duì)。光合菌的代謝物質(zhì)或者被植物直接吸收,或者成為其它微生物繁殖的養(yǎng)分,光合細(xì)菌如果能夠增殖,其它的有益微生物也會(huì)增殖。⒉乳酸菌群:乳
【生化檢測(cè)】膠原蛋白提取與檢測(cè)方法2023/03/27
膠原蛋白是一種天然高分子化合物,具有一定的凝膠強(qiáng)度,乳化性、低黏度性、生物相容性、吸水和保濕性等,廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥保健品、化妝品等行業(yè)中。膠原蛋白主要存在于動(dòng)物皮、骨、軟骨、牙齒、肌腱、韌和血管中。原料檢測(cè)及膠原蛋白提取方法:1、原料成分基礎(chǔ)檢測(cè)水分測(cè)定--直接干燥法灰分測(cè)定--550℃灰分法粗蛋白檢測(cè)--凱氏定氮法脂肪測(cè)定--索氏抽提法2、魚(yú)尾預(yù)處理,去除殘肉、硬骨、脂肪,等誰(shuí)清洗,有機(jī)溶劑去除脂溶性色素,脫鈣、除蛋白后,冷凍備用。3、膠原蛋白提取4℃下膠原蛋白提取最佳工藝為鹽酸胍濃度3m
膠原纖維的膠原蛋白的染色簡(jiǎn)介2023/03/27
膠原纖維在HE染色法被染成粉紅色,除此之外,它還可以用一些陰離子的染料來(lái)進(jìn)行染色,如用淡綠可把它們?nèi)緸榫G色,用甲苯胺藍(lán)可將其染為藍(lán)色,在網(wǎng)狀纖維染色中,如不加以處理,它又可被染為棕黃色。常用的特殊染色法有VanGieson.Masson和Mallary等方法。在免疫細(xì)胞化學(xué)染色中,膠原纖維由于含的負(fù)電荷過(guò)多,常導(dǎo)致某些非特異性的染色,應(yīng)特別注意。(一).VanGieson(V.G)染色法I.試劑的配制:weigert氏蘇木素A液:蘇木素1g(haematoxylin)*100mlB液:30%三氯
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