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生長(zhǎng)因子在細(xì)胞培養(yǎng)基中起到什么作用2023/02/24: 細(xì)胞培養(yǎng)是生命科學(xué)的主要技術(shù)之一。它是指從動(dòng)物或植物中取出細(xì)胞、組織或器官，然后將其置于有利于其生存和/或增殖的人工環(huán)境中的總稱。細(xì)胞最佳生長(zhǎng)的基本環(huán)境要求是：控制溫度，細(xì)胞附著的底物，適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)介質(zhì)和培養(yǎng)箱，保持正確的pH值和滲透壓。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中最重要也是最關(guān)鍵的一步是選擇合適的培養(yǎng)基進(jìn)行體外培養(yǎng)。生長(zhǎng)培養(yǎng)基是一種液體或凝膠，用來(lái)支持微生物、細(xì)胞或小型植物的生長(zhǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)基一般包括適當(dāng)?shù)哪芰縼?lái)源和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的化合物。典型的培養(yǎng)基由氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖和生長(zhǎng)因子、激素和輔助因子等組

核糖核酸酶A(RNase A)的主要用途介紹2023/02/23: 核糖核酸酶A（RNaseA）來(lái)源于牛胰臟，是一種內(nèi)切核糖核酸酶，可特異攻擊RNA上嘧啶殘基的3’端，切割胞嘧啶或尿嘧啶與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵，反應(yīng)終產(chǎn)物是3’嘧啶核苷酸和末端帶3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。無(wú)輔助因子及二價(jià)陽(yáng)離子存在時(shí)，核糖核酸酶A的作用可以被胎盤RNA酶抑制劑（RNasin）或氧釩一核糖核苷復(fù)合物（vanadyl—ribonuclosidecomplex，VRC）所抑制。RNaseA的反應(yīng)條件極廣，且極難失活。在低鹽濃度（0～100mmol/lNaCl）下，RNaseA切割單

簡(jiǎn)述一些常見(jiàn)連接酶的作用機(jī)制2023/02/23: 常見(jiàn)種類和作用機(jī)制1、T4DNA連接酶T4DNA連接酶是目前應(yīng)用比較多的病毒基因組編碼的DNA連接酶，在基因重組中廣泛使用。噬菌體類型較多，目前研究發(fā)現(xiàn)T4噬菌體能夠合成T4DNA連接酶，并且已經(jīng)能夠從被T4嗜菌體感染的大腸桿菌中提取該酶，此外科學(xué)家也已經(jīng)定位該酶的合成基因，即噬菌體T4的30基因。T4DNA連接酶具有連接黏性末端和平末端的作用，研究人員總結(jié)DNA片段的連接過(guò)程，認(rèn)為整個(gè)DNA連接反應(yīng)可以通過(guò)三個(gè)連續(xù)步驟來(lái)完成：（1）ATP通過(guò)斷裂最后一個(gè)高能磷酸鍵釋放能量，同時(shí)產(chǎn)生的AMP和T

關(guān)于不同種類的曲霉介紹2023/02/23: 1、黃曲霉黃曲霉，半知菌類，一種常見(jiàn)腐生真菌。多見(jiàn)于發(fā)霉的糧食、糧制品及其它霉腐的有機(jī)物上。菌落生長(zhǎng)較快，結(jié)構(gòu)疏松，表面灰綠色，背面無(wú)色或略呈褐色。菌體有許多復(fù)雜的分枝菌絲構(gòu)成。營(yíng)養(yǎng)菌絲具有分隔；氣生菌絲的一部分形成長(zhǎng)而粗糙的分生孢子梗，頂端產(chǎn)生燒瓶形或近球形頂囊，表面產(chǎn)生許多小梗（一般為雙層），小梗上著生成串的表面粗糙的球形分生孢子。分生孢子梗、頂囊、小梗和分生孢子合成孢子頭，可用于產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶和磷酸二酯酶等，也是釀造工業(yè)中的常見(jiàn)菌種。2、黑曲霉黑曲霉，半知菌亞門，絲孢綱，絲孢目，叢梗孢

原核細(xì)胞生物種類的介紹2023/02/23: 原核生物（prokaryote）是以原核細(xì)胞構(gòu)成的，均為單細(xì)胞生物，通常稱為細(xì)菌（bacterium）。根據(jù)外表特征，可把原核生物粗分為“三菌三體”6種類型，即細(xì)菌（狹義的）、放線菌、藍(lán)細(xì)菌、支原體、立克次氏體和衣原體。1、細(xì)菌是在自然界分布zui廣、個(gè)體數(shù)量最多的有機(jī)體，是大自然物質(zhì)循環(huán)的主要參與者。細(xì)菌主要由細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)體等部分組成，有的細(xì)菌還有莢膜、鞭毛、菌毛等特殊結(jié)構(gòu)。絕大多數(shù)細(xì)菌的直徑大小在0.5-5微米之間?？筛鶕?jù)形狀分成三類：球菌、桿菌和螺旋菌。2、放線菌微米放線菌

關(guān)于封閉液不得不說(shuō)的這些事兒2023/02/22: 最早的有關(guān)封閉的概念來(lái)源于免疫組化，1941年AlbertCoons發(fā)表文章，采用一種封閉液可以消除抗體的非特異性結(jié)合。原來(lái)，在免疫組化染色的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)有一些內(nèi)源性的生物素，酶等非特異性物質(zhì)干擾信號(hào)和增加背景，必須進(jìn)行阻斷才能達(dá)到好的效果，這里有幾個(gè)英文詞來(lái)形容它的功能（blocking或quench）。所謂的好的視覺(jué)效果就是指高的信噪比（S/N），也就是降低背景信號(hào)。常用的封閉液一般有正常血清，脫脂奶粉，BSA，明膠等。進(jìn)入分子生物學(xué)時(shí)代，出現(xiàn)了好幾個(gè)BLOT實(shí)驗(yàn)，如westernblot，

簡(jiǎn)述免疫熒光（IF）染色及優(yōu)化技巧2023/02/22: 什么是IF（免疫熒光）染色？免疫熒光（IF）是一種用于檢測(cè)以及識(shí)別細(xì)胞和組織中蛋白質(zhì)和其他分子的亞細(xì)胞分布和遷移的強(qiáng)大檢測(cè)技術(shù)。IF可用作免疫組織化學(xué)(IHC)或免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)中使用的傳統(tǒng)顯色標(biāo)記的替代物。通過(guò)使用多種標(biāo)記物的二級(jí)抗體，可以研究感興趣蛋白的共定位，這是不能通過(guò)常規(guī)IHC或ICC實(shí)現(xiàn)。這是同時(shí)分析許多目標(biāo)蛋白時(shí)的一個(gè)優(yōu)勢(shì)，可同時(shí)生成大量亞細(xì)胞定位的準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。什么時(shí)候使用IF？1.IF是一個(gè)很好的檢測(cè)技術(shù)工具，用于研究感興趣的產(chǎn)物如分子、蛋白質(zhì)或糖蛋白的表達(dá)、定位、分布和遷移

免疫球蛋白提取技術(shù)：IgG的分離與提純2023/02/22: 免疫球蛋白（ImmunoglobulinIg）的含量代表著機(jī)體體液免疫的水平，并進(jìn)一步代表著B(niǎo)細(xì)胞的功能，因此測(cè)定血清Ig含量可以推知機(jī)體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過(guò)高和過(guò)低。隨著免疫學(xué)的發(fā)展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為bi不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數(shù)采用二步法以上相結(jié)合的方法，特別是以硫酸銨提純?yōu)榛A(chǔ)，再經(jīng)過(guò)層析柱的方法來(lái)提高免疫球蛋白及其各成分的純度最為常用。硫酸銨溶液能使蛋白質(zhì)膠體脫水并中和其電荷而使之沉淀下來(lái)（稱為鹽析）。不同濃度的硫酸銨鹽

細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染類型分析2023/02/22: 培養(yǎng)基變渾濁的原因可能有如下幾點(diǎn)：1、細(xì)胞存在污染，污染早期可以見(jiàn)到細(xì)胞生長(zhǎng)；2、不排除傳代時(shí)細(xì)胞密度過(guò)大，或者操作不當(dāng)導(dǎo)致多數(shù)細(xì)胞不貼壁，大量細(xì)胞漂浮。3、細(xì)胞破碎。細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲(chóng)污染、黑膠蟲(chóng)污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染.他們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)中污染的特點(diǎn)如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯.2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)

細(xì)胞裂解液各成分的作用與制備2023/02/21: 細(xì)胞裂解液各成分的作用：1、第一種50mmol/LTris-HCl是緩沖液，保證細(xì)胞裂解時(shí)PH值也能穩(wěn)定，Tris是一種有機(jī)堿。2、第二種1.0mmol/LEDTA是一種金屬螯合劑。3、第三種150mmol/LNaCl是等滲體系電解質(zhì)，用于協(xié)調(diào)細(xì)胞膜內(nèi)外離子平衡。4、第四種0.1%SDS是十二烷基硫酸鈉，是一種表面活性劑和還原劑，有增溶作用。細(xì)胞裂解液的制備：一、試劑準(zhǔn)備1、新鮮配制冷的RIPA裂解緩沖液:150mMNaCL1%NP-40(去垢劑)0.1%SDS(去垢劑)2ug/mlAproti

遠(yuǎn)慕簡(jiǎn)述化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞的規(guī)范操作方法2023/02/21: 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是常規(guī)克隆和亞克隆實(shí)驗(yàn)應(yīng)用較為合適的解決方案。經(jīng)氯化鈣處理，促進(jìn)質(zhì)粒DNA黏附于感受態(tài)細(xì)胞膜上。將感受態(tài)細(xì)胞通過(guò)水浴熱激，使細(xì)胞膜孔打開(kāi)，從而質(zhì)粒可以進(jìn)入。操作方法：（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）1、取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。以下實(shí)驗(yàn)以100μl感受態(tài)細(xì)胞為例。2、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入

大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取及轉(zhuǎn)化2023/02/21: 實(shí)驗(yàn)概要本實(shí)驗(yàn)包括大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取，質(zhì)粒DNA瓊脂糖凝膠電泳鑒定，大腸稈菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及質(zhì)粒DNA高頻轉(zhuǎn)化大腸桿菌。實(shí)驗(yàn)步驟1.大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取堿裂解法：此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取，提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴(kuò)增、銀染序列分析。方法如下：1)接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞于2mlLB培養(yǎng)基。2)37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。3)取1.5ml菌體于Ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液。4)加0.lml溶液I(1％葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/L

如何評(píng)估質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量？2023/02/21: 質(zhì)粒抽提過(guò)程中有很多步驟會(huì)影響最后的產(chǎn)量和質(zhì)量，那么如何評(píng)估質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量呢？目前使用分光光度法定量質(zhì)粒DNA和通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行質(zhì)粒DNA產(chǎn)率和質(zhì)量的分析是兩種常用的方法。溶液中的核酸濃度可通過(guò)260nm的吸光度方便地進(jìn)行計(jì)算。A260的數(shù)值處于0.1至1.0之間時(shí)測(cè)量結(jié)果具有良好的重復(fù)性，但當(dāng)A260數(shù)值小于0.1或大于1.0的時(shí)候，結(jié)果的可重復(fù)性將顯著下降。而且，3.0以上的讀值是無(wú)法使用的，它可能會(huì)潛在導(dǎo)致對(duì)DNA質(zhì)量的低估。因此，為了獲得可靠的DNA分光光度定量結(jié)果，A26

細(xì)菌表達(dá)蛋白質(zhì)和樣本制備操作2023/02/20: 一般直接用SDS凝膠加樣緩沖液裂解，具體方法如下：試劑與設(shè)備（1）表達(dá)待檢測(cè)蛋白質(zhì)的細(xì)菌。（2）50mmoL／LTris-HCl（pH7.4）。（3）2xSDS凝膠加樣緩沖液：100mmol／LTris—HCl（pH6.8）200mmol／L二硫蘇糖醇（DTT）4％SDS（電泳級(jí)）0.2％溴酚藍(lán)20％甘油不含有二硫蘇糖醇（DTT）的2XSDS凝膠加樣緩沖液可保存于室溫，臨用前須從1mol／L二硫蘇糖醇儲(chǔ)存液現(xiàn)用現(xiàn)加于上述緩沖液中。（4）臺(tái)式離心機(jī)。（5）超聲破碎儀。（6）水浴箱。（7）渦漩振蕩器

DNA凝膠加樣緩沖液(6×DNA Loading Buffer)簡(jiǎn)介2023/02/20: DNA凝膠加樣緩沖液(6×DNALoadingBuffer)簡(jiǎn)介：電泳是一種常用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，可鑒定、定量和純化核酸片段。將樣品上樣到瓊脂糖或丙烯酰胺凝膠的孔內(nèi)并放入電場(chǎng)，使帶負(fù)電荷的核酸向正極移動(dòng)。較短的DNA片段遷移較快，而最長(zhǎng)的片段將與起點(diǎn)距離最近，從而實(shí)現(xiàn)基于DNA片段大小的分離。DNA凝膠加樣緩沖液(6×DNALoadingBuffer)是一種經(jīng)過(guò)改良的六倍濃縮的DNA上樣緩沖液，主要用于DNA電泳。該試劑以二甲苯腈藍(lán)為指示劑，稀釋至1×后比重仍然較大，加樣后易下沉，且顏色清晰可見(jiàn)，起

RNA生物合成的抑制劑相關(guān)介紹2023/02/20: RNA生物合成的抑制劑相關(guān)介紹一、堿基類似物有些人工合成的堿基類似物能干擾和抑制核酸的合成。作用方式有以下兩類：（一）作為代謝拮抗物，直接抑制核苷酸生物合成有關(guān)酶類。如6-巰基嘌呤進(jìn)入體內(nèi)后可轉(zhuǎn)變?yōu)閹€基嘌呤核苷酸，抑制嘌呤核苷酸的合成?？勺鳛榭拱┧幬铮委熂毙园籽〉?。此類物質(zhì)一般需轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的核苷酸才能表現(xiàn)出抑制作用。（二）進(jìn)入核酸分子，形成異常RNA或DNA，影響核酸的功能并導(dǎo)致突變。5-氟尿嘧啶類似尿嘧啶，可進(jìn)入RNA，與腺嘌呤配對(duì)或異構(gòu)成烯醇式與鳥(niǎo)嘌呤配對(duì)，使A-T對(duì)轉(zhuǎn)變?yōu)镚-C對(duì)。因?yàn)?

DEAE-Sephadex A-50提取法純化多克隆抗體2023/02/17: DEAE-SephadexA-50（簡(jiǎn)稱A-50）為弱堿性陰離子交換劑，經(jīng)過(guò)NaOH處理將Cl-型轉(zhuǎn)為OH-型后，可吸附酸性蛋白。γ1球蛋白屬中性蛋白，等電點(diǎn)為pH6.85～7.5，其余均屬酸性蛋白。在溶液為pH8.0時(shí)，酸性蛋白均被A-50吸附。從而可分離純化IgG。1.批量吸附法此法可在1天內(nèi)完成提取過(guò)程，純化前后樣品體積變化不大，所得IgG無(wú)變性現(xiàn)象，抗體效價(jià)亦無(wú)明顯降低。制品可達(dá)PAGE及免疫電泳純。適用于提純?nèi)?、羊、兔等血清中的IgG?！静牧虾驮噭浚?）DEAE-SephadexA

DEAE-纖維素提取法純化多克隆抗體2023/02/17: DEAE-纖維素提取法純化多克隆抗體：該法提取IgG簡(jiǎn)便，既可小量提取，也可大量制備。1．批量提取法稱取DEAE-纖維素（DE32或DE52）50g，置于1000ml燒杯中，先以蒸餾水漂浮除去細(xì)顆粒，再經(jīng)酸堿處理后，用0.01～0.05mol/L，pH8.0左右的磷酸鹽緩沖液（PB）平衡。將水分抽干，或用布氏濾斗（內(nèi)放兩層濾紙）過(guò)濾，收集濕纖維素，以降低其離子強(qiáng)度。按1ml血清加濕重5gDEAE纖維素，經(jīng)過(guò)充分?jǐn)嚢?，?℃吸附1h。上清液可再如此處理一次，即獲得較純的IgG。該法提取I

遠(yuǎn)慕簡(jiǎn)述色素試劑-指示劑、顯色劑和染色劑2023/02/17: 在化學(xué)試劑中，把帶有顏色或可改變顏色的一類試劑統(tǒng)稱為色素試劑，它包括了指示劑、顯色劑和染色劑。酸堿指示劑是遇到酸、堿能改變?cè)噭╊伾闹甘緞?，主要用?lái)指示溶液的PH值，指示酸堿滴定的終點(diǎn)，如：甲基橙、酚酞、甲基紅等。這些酸堿指示劑也是一種染料，但一般染料并不能直接作為酸堿指示劑，一般要進(jìn)行提純，嚴(yán)格控制試劑中的雜質(zhì)含量，否則可造成PH值變色范圍的遷移，影響滴定分析的結(jié)果。氧化還原指示劑是指遇到氧化劑或還原劑能改變顏色的試劑，主要指示溶液中的氧化劑或還原劑的存在、用于指示氧化還原滴定分析的終點(diǎn)，如二

革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)！2023/02/17: 革蘭氏染色是一項(xiàng)經(jīng)典的細(xì)菌鑒別手段，自19世紀(jì)80年代丹麥的醫(yī)師GRAM創(chuàng)立起，至今已經(jīng)近一個(gè)半世紀(jì)，仍舊在細(xì)菌的檢測(cè)和鑒定分類上被廣泛應(yīng)用著。在我國(guó)，GB4789系列的國(guó)標(biāo)中很多致病菌的檢測(cè)也都需要進(jìn)行革蘭氏染色，可見(jiàn)其重要性。甚至可以說(shuō)沒(méi)有精準(zhǔn)掌握革蘭氏染色的微生物檢驗(yàn)員，不會(huì)是一個(gè)合格的檢驗(yàn)員。革蘭氏染色的原理：細(xì)菌細(xì)胞通過(guò)結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽(yáng)性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)

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