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DMEM高糖，含谷氨酰胺和丙酮酸鈉的特點2022/11/30

背景及概述培養(yǎng)基是為適合生物生長所需要的人工配制的混合物質(zhì)養(yǎng)料。常指培養(yǎng)微生物或生物細胞組織的養(yǎng)料，主要用于微生物的分離、培養(yǎng)、鑒定、保藏和釀造、發(fā)酵等方面。具體成分根據(jù)生物營養(yǎng)需要而不同。一般含有水、碳水化合物、含氨物質(zhì)和礦質(zhì)鹽類等。按所用原料不同可分為兩類：應(yīng)用化學(xué)藥品配成并標明成分的，稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基，應(yīng)用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配成，稱為天然培養(yǎng)基。又因加入或不加入賦形劑可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。特點DMEM（Dulbecco'sModifiedEagleMe

胎牛血清的生產(chǎn)工藝流程2022/11/28

胎牛血清是母牛在懷孕五至八月齡胎時，將胎牛取出并進行心臟穿刺取血。穿刺取血可較大程度的避免外界的污染。而新生牛血清是從剛出生到2周內(nèi)的新生牛靜脈采血。和新生牛血清相比，胎牛血清顯然產(chǎn)量低，成本高。胎牛血清應(yīng)用在哺乳動物細胞培養(yǎng)中；因此，胎牛血清應(yīng)用很廣泛。比如，胎牛血清能夠用在科研、工業(yè)生產(chǎn)、人獸疫苗生產(chǎn)的質(zhì)量控制及生物技術(shù)藥物的質(zhì)量控制領(lǐng)域。真正胎牛血清的生產(chǎn)工藝流程有哪些呢？胎牛血清主要步驟：1.固定和麻醉胎牛原血清采集的關(guān)鍵技術(shù)主要是懷孕母牛的剖腹產(chǎn)和太牛的全封閉無菌心臟穿刺采血，對懷孕8

牛血清蛋白的BSA結(jié)構(gòu)與配制方法2022/11/23

血清蛋白(BSA）成分結(jié)構(gòu)牛血清中的簡單蛋白，是血液的主要成分（38g/100ml），分子量68kD。等電點4.8。含氮量16%，含糖量0.08%。僅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581個氨基酸殘基組成，其中35個半胱氨酸組成17個二硫鍵，在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結(jié)合。血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用。在動物細胞無血清培養(yǎng)中，添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。牛血清白蛋白（BSA），又

蛋白質(zhì)的沉淀方法中哪些可以用于酶的制備過程2022/11/21

蛋白質(zhì)的沉淀方法中只有鹽析法可以用于酶的制備過程。蛋白質(zhì)沉淀的概念：蛋白質(zhì)分子凝聚從溶液中析出的現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)沉淀(precipitation)，變性蛋白質(zhì)一般易于沉淀，但也可不變性而使蛋白質(zhì)沉淀，在一定條件下，變性的蛋白質(zhì)也可不發(fā)生沉淀。定性分析：蛋白質(zhì)所形成的親水膠體顆粒具有兩種穩(wěn)定因素，即顆粒表面的水化層和電荷。若無外加條件，不致互相凝集。然而除掉這兩個穩(wěn)定因素(如調(diào)節(jié)溶液pH至等電點和加入脫水劑)蛋白質(zhì)便容易凝集析出。如將蛋白質(zhì)溶液pH調(diào)節(jié)到等電點，蛋白質(zhì)分子呈等電狀態(tài)，雖然分子間同性電

細菌在液體培養(yǎng)基中的三種生長現(xiàn)象2022/11/18

細菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象有三種：混濁生長、沉淀生長、菌膜生長（表面生長）1、混濁生長：大多數(shù)細菌在液體培養(yǎng)基中生長繁殖后均勻渾濁。如大腸埃希菌、志賀菌等。2、沉淀生長：少數(shù)鏈狀排列的細菌如鏈球菌，炭疽芽孢桿菌等則呈沉淀生長。3、菌膜生長（表面生長）：枯草芽孢桿菌、結(jié)核分歧桿菌和銅綠假單胞菌等專性需氧菌一般呈表面生長，常形成菌膜。細菌培養(yǎng)常見的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法（一）培養(yǎng)基培養(yǎng)基是供細菌生長用的，由人工方法將多種營養(yǎng)物質(zhì)根據(jù)各種細菌的需要而組合成的混合營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基的基本成分有營養(yǎng)物質(zhì)、凝固物

細胞系的建立要求2022/11/15

細胞系細胞系（cellline）指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。（由此便引申出了后來的有限細胞系（FiniteCellLine）、無限細胞系（InfiniteCellLine）），因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞（特定環(huán)境下口語和書面語都使用），廣義是指可傳代的細胞。也有認為細胞系(cellline）指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系(FiniteCellLine)無限細胞系

動物細胞培養(yǎng)的原理2022/11/14

動物細胞培養(yǎng)是指細胞在體外條件下的生長，動物細胞在培養(yǎng)的過程中不再形成組織。從動物機體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。用途指動物、(包括哺乳動物、昆蟲、魚類、禽類等)細胞在體外的培養(yǎng)技術(shù)，即在無菌條件下，從機體中取出組織或細胞，模擬體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)器皿中繼續(xù)生存、生長和繁殖的方法。體外培養(yǎng)的細胞可分為原代細胞和傳代細胞。動物細胞培養(yǎng)給細胞生物學(xué)的研究帶來了極大的方便，解決了以人的活細胞材料作為研究對象或研究工具的問題

胎牛血清和新生牛血清的區(qū)別2022/11/11

先來看看牛血清大體的分類：胎牛血清、新生牛血清和小牛血清，而劃分三者之間的是根據(jù)對不同年齡段的牛采血所得到的不同的血清產(chǎn)品。胎牛血清（FetalBovineSerum）是在母牛懷孕5-8個月時，通過胎牛心臟穿刺采血獲取的血清。新生牛血清（NewbornCalfSerum）是來自剛出生~出生后2周內(nèi)的新生牛靜脈取血。小牛血清（CalfSerum）采自出生后2周至1年內(nèi)的小牛靜脈取血。牛血清作為實驗室廣泛推崇的天然培養(yǎng)被應(yīng)用于細胞培養(yǎng)。但這三種牛血清由于取血時間不同，其成分存在著一些差異。胎牛血清含

什么是PBS緩沖液？2022/11/10

PBS是磷酸緩沖鹽溶液一般作為溶劑，起溶解保護試劑的作用。它是生物化學(xué)研究中使用廣泛的一種緩沖液，主要成分為Na?HPO?、KH?PO?、NaCl和KCl。PBS緩沖液不僅偽狂犬病毒要用它稀釋，一般的有活性的生物制劑都要用它來稀釋。由于Na?HPO?和KH?PO?它們有二級解離，緩沖的pH值范圍很廣；而NaCl和KCl主要作用為增加鹽離子濃度。如有需要PBS還可以補加1mmol/LCaCl?和0.5mmol/LMgCl?，以提供雙價陽離子。pbs緩沖液的配制方法含0.05%吐溫－20的pH7.4

標準品標準溶液配制常見問題2022/11/09

標準溶液配制常見問題1、能否直接將溶劑加入標準品的瓶子中進行溶解，再轉(zhuǎn)移到容量瓶中定容?不能。一般除非特別指明，所有標準品廠商給出的產(chǎn)品質(zhì)量和體積都不是精確數(shù)值，比如10mg的標準品，其瓶中的產(chǎn)品重量可能大于10mg，如10.5mg或11mg。如果產(chǎn)品的重量為精確數(shù)值，廠家一般會特別注明。2、溶劑選擇：根據(jù)已有的方法或者物質(zhì)的相關(guān)理化性質(zhì)選擇合適溶劑。不適當?shù)娜軇┛赡茉斐蔁o法溶解或者產(chǎn)品降解。3、稱量方法：請根據(jù)您需要稱量的重量和容許誤差選擇合適的天平。如使用十萬分之一的天平，建議稱量值不小于1

細胞培養(yǎng)生長減慢和死亡的原因2022/11/07

培養(yǎng)細胞生長減慢這種情況可能的原因包括：1．由于更換了不同培養(yǎng)液或血清，細胞需要重新適應(yīng)。2．試劑保存不當，培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。3．培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染。4．接種細胞起始濃度太低。5．細胞已老化。6．支原體污染。建議解決方法：1．比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗。讓細胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液。2換入新鮮配制培養(yǎng)液，或補加谷氨酰胺及生長因子。3．用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，更換培養(yǎng)物。4．培養(yǎng)液需在2-8℃避光

細胞培養(yǎng)中血清能起到什么作用？2022/11/04

血清主要作用：提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質(zhì)。提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可*松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞

細胞培養(yǎng)為何需要在CO2培養(yǎng)箱中？2022/11/03

細胞培養(yǎng)為何需要在CO2培養(yǎng)箱中？二氧化碳不僅是細胞生長的必需成分，還與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。細胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境，氧氣、二氧化碳是細胞生存的必要條件。氧氣參與細胞的三羧酸循環(huán)，為細胞生存、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細胞的代謝產(chǎn)物，是細胞生長的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳氣體比例為宜。細胞污染的預(yù)防①實驗用品防止污染。細胞培養(yǎng)所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要che底，各種溶液滅菌要仔細，并在

蛋白酶抑制劑作用原理分享2022/11/01

蛋白酶抑制劑是什么？首先我們來了解蛋白酶：蛋白酶是人類免疫缺陷病毒基因編碼中的一種特異天冬酰蛋白酶，其作用是將基因和基因表達所產(chǎn)生的蛋白裂解，成為具有活性的病毒結(jié)構(gòu)蛋白和酶。蛋白酶抑制劑：蛋白酶抑制劑，外文名（proteaseinhibitor），多肽類化合物。是基于肽類的化合物，它們或競爭性抑制蛋白酶活性或作為互補蛋白酶活性點的抑制劑。蛋白酶抑制劑是90年代中后期的新產(chǎn)品，藥物合成工藝難度大。蛋白酶抑制劑作用原理是什么？蛋白酶抑制劑(proteaseinhibitor)從廣義上指與蛋白酶分子活

緩沖溶液有什么作用你知道嗎？2022/10/31

緩沖溶液是無機化學(xué)及分析化學(xué)中的重要概念，緩沖溶液是指具有能夠維持PH相對穩(wěn)定性能的溶液。pH值在一定的范圍內(nèi)不因稀釋或外加少量的酸或堿而發(fā)生顯著的變化，緩沖溶液依據(jù)共軛酸堿對及其物質(zhì)的量不同而具有不同的pH值和緩沖容量。只要知道緩沖對的PH值，和要配制的緩沖液的pH值（及要求的緩沖液總濃度），就能按公式計算[鹽]和[酸]的量。這個算法涉及對數(shù)換算，較麻煩，前人為減少后人的計算麻煩，已為我們總結(jié)出pH值與緩沖液對離子用量的關(guān)系并列出了表格。只要我們知道要配制的緩沖液的pH，經(jīng)查表便可計算出所用緩

血清在科研實驗中起到什么作用？2022/10/27

鑒別方法：血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應(yīng)被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。凝xue塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿zui大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血

你了解抗體的基礎(chǔ)知識嗎？2022/10/25

抗體(英語:antibody)，(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細胞(效應(yīng)B細胞)分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面?？贵w能識別特定外來物的一個du特特征，該外來目標被稱為抗原。抗體的分類：1.可將其分為抗毒素、抗菌抗體、抗病毒抗體和親細胞抗體（能與細胞結(jié)合的免疫球蛋白，如1型變tai反應(yīng)中的lgE反應(yīng)素抗體，能吸附在靶細胞膜上）2.按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能，可將其分為IgM、IgG、IgA、Ig

緩沖溶液在實驗中起到什么作用2022/10/24

緩沖溶液（BufferSolution）是一種能在加入少量酸或堿和水時大大減低pH變動的溶液。pH緩沖系統(tǒng)對維持生物的正常pH值和正常生理環(huán)境起到重要作用。多數(shù)細胞僅能在很窄的pH范圍內(nèi)進行活動，而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現(xiàn)的pH變化。在生物體中有三種主要的pH緩沖體系，它們是蛋白質(zhì)緩沖系統(tǒng)、重碳酸鹽緩沖系統(tǒng)以及磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。每種緩沖體系所占的分量在各類細胞和器官中是不同的。在生化研究工作中，常常需要使用緩沖溶液來維持實驗體系的酸堿度。研究工作的溶液體系pH值的變化往往直接影響到研

細胞培育有哪些基本條件？2022/10/19

1.溫度細胞溫度過低時細胞成長緩慢甚至不成長。利用冷凍保藏細胞可保持細胞的原有割裂分解能力。溫度過高導(dǎo)致細胞。這主要是由酶和蛋白質(zhì)所需求的適溫度決定的。大都生物大分子遇到高溫后簡單導(dǎo)致空間結(jié)構(gòu)改動或者喪失（變性）。細胞膜遇到高溫后簡單變化。2.pH過酸或過堿可導(dǎo)致細胞。這主要與蛋白質(zhì)的變性和細胞膜的結(jié)構(gòu)受損有關(guān)。3.透壓細胞內(nèi)外可溶于水的物質(zhì)份額和品種決定細胞的脹大與收縮程度，因為細胞膜是半透膜，只允許對自己有利的物質(zhì)經(jīng)過。4.細胞養(yǎng)物養(yǎng)分物和水一同，又名細胞培育液，培育液中含有細胞增殖和成長所

細胞復(fù)蘇的步驟及注意事項2022/10/17

一、主要步驟①將冷凍管從液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，細胞融化后要盡快(約1min)移出37℃水浴。37℃水浴時間延長會提高細胞死亡率，復(fù)蘇過程中一般細胞死亡率在20%～25%之間。②迅速用酒精棉球擦拭冷凍管外部殺菌消毒，然后放置在冰浴上。③小心開啟瓶蓋，把細胞轉(zhuǎn)入含有4mL培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，然后把培養(yǎng)瓶移至培養(yǎng)箱，36℃～38℃培養(yǎng)1h，讓細胞貼壁。④細胞貼壁后，小心移棄培養(yǎng)基，主要是去掉DMSO(懸浮生長細胞要通過離心沉淀除去DMSO)、死細胞及其碎片，加5mL新鮮培養(yǎng)基，36℃～38