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2020
03-25

細(xì)胞培養(yǎng)，血清VS無(wú)血清！
細(xì)胞在體外能夠成功生長(zhǎng)，培養(yǎng)基的選擇及培養(yǎng)方法的優(yōu)化十分關(guān)鍵。細(xì)胞在單純的培養(yǎng)基中不能存活，各種類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)中必須提供某些生長(zhǎng)因子、黏附和伸展因子、微量元素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。傳統(tǒng)培養(yǎng)基中一般會(huì)添加動(dòng)物血清如牛血清等。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。其中胎牛血清是品質(zhì)較高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分少。血清培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)與局限采用天然來(lái)源的血清作為細(xì)胞培養(yǎng)添加物，優(yōu)勢(shì)在于提供豐富全面的細(xì)胞生長(zhǎng)必需的
2020
03-24

拯救選擇困難——胎牛血清好壞知多少
生物學(xué)科作為實(shí)驗(yàn)學(xué)科，嚴(yán)謹(jǐn)是很重要的品質(zhì)，相信很多小伙伴經(jīng)過(guò)長(zhǎng)年實(shí)驗(yàn)的熏陶，已經(jīng)形成了一定程度的選擇困難。胎牛血清現(xiàn)在種類(lèi)眾多，很多人都很難分辨出質(zhì)量的好壞，這就讓人們購(gòu)買(mǎi)有難度了。畢竟買(mǎi)到劣質(zhì)的胎牛血清會(huì)很吃虧，這點(diǎn)必須注意。那么要怎樣分辨胎牛血清質(zhì)量的好壞？拿到血清，先接觸的是血清外觀，對(duì)于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來(lái)說(shuō)，外觀的判斷尤為重要1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無(wú)直接影響，這個(gè)指
2020
03-23

ELISA實(shí)驗(yàn)做不好？我們?yōu)槟鷧R總了常見(jiàn)的30個(gè)問(wèn)題?。ǘ?/a>
上一期我們?yōu)榇蠹覅R總了ELISA實(shí)驗(yàn)原理、樣本準(zhǔn)備和預(yù)實(shí)驗(yàn)相關(guān)的十個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題及解答，可能有心急的小伙伴早就想要了解更多后續(xù)關(guān)于ELISA實(shí)驗(yàn)方面的問(wèn)題了，不要走開(kāi)，接下來(lái)將給您帶來(lái)相關(guān)解答~Q：invivo實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，不太好做預(yù)實(shí)驗(yàn)，對(duì)ELISA結(jié)果會(huì)有影響么？怎么辦？A：如果您實(shí)驗(yàn)室之前建立的invivo實(shí)驗(yàn)protocol經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，可以保證有效性，那么，可以不用再進(jìn)行相關(guān)的預(yù)實(shí)驗(yàn)；并且，如果實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)，樣本獲取不易，同時(shí)又需要檢測(cè)較多指標(biāo)，建議將樣品分裝凍存，避免反復(fù)凍融。ELISA實(shí)驗(yàn)還

2020
03-23

脂多糖LPS——針對(duì)革蘭陰性菌的藥物靶標(biāo)
脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是所有革蘭陰性細(xì)菌外膜的主要組成部分,維持了細(xì)菌的結(jié)構(gòu)完整性,并保護(hù)細(xì)菌膜免受某些化學(xué)物質(zhì)的攻擊。LPS被稱為內(nèi)毒素,是革蘭陰性菌主要致病成分,可引起強(qiáng)烈免疫反應(yīng),導(dǎo)致幾乎所有的真核細(xì)胞發(fā)生形態(tài)、代謝和基因表達(dá)變化,刺激宿主細(xì)胞因子失控性表達(dá),發(fā)生嚴(yán)重感染。敗血癥就是由LPS引發(fā)的重要疾病之一,敗血癥發(fā)作時(shí),患者體內(nèi)LPS濃度將極大提高,以至于身體出現(xiàn)災(zāi)難性的炎癥反應(yīng)。大量實(shí)驗(yàn)證實(shí),LPS、LPS結(jié)合蛋白(lipopo-lysaccharid
2020
03-23

植物血凝素（PHA）知多少
植物血凝素（Phytohaemagglutinin,PHA）是一種發(fā)現(xiàn)于植物特別是豆科植物中的凝集素（lectin），屬于高分子糖蛋白類(lèi)，是低聚糖（由半乳糖，N-乙酰葡糖胺和甘露糖所構(gòu)成）和蛋白質(zhì)的復(fù)合物，具有促進(jìn)外周血淋巴細(xì)胞（PBMC）有絲分裂和誘導(dǎo)干擾素分泌的活性。在生命科學(xué)領(lǐng)域，植物血凝素被應(yīng)用為一種促細(xì)胞分裂原（mitogen），在體外能刺激小淋細(xì)胞轉(zhuǎn)化成具有免疫活性的淋細(xì)胞，并促進(jìn)其分裂。轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞能分泌各種淋巴因子。主要應(yīng)用如下：1、PHA對(duì)外周周血淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用。外周血淋
2020
03-23

白細(xì)胞介素族譜——IL4
白細(xì)胞介素4（interleutin-4，IL-4），屬于紅細(xì)胞生成素超家族成員，位于活化T細(xì)胞，在Th2亞群產(chǎn)生，此外，肥大細(xì)胞、IL2刺激小鼠T細(xì)胞系2.19、ConA刺激人Th克隆2F1、小鼠胸腺瘤EL-4細(xì)胞以及B細(xì)胞系CH2均能分泌IL-4，IL4分子量為140kDa，胞膜外區(qū)209氨基酸，跨膜區(qū)24氨基酸，胞漿區(qū)569氨基酸。IL可促使抗原活化的B細(xì)胞分裂增殖，但其作用較IL-2稍弱，而IL-4能促使靜止的B細(xì)胞表達(dá)MHCⅡ類(lèi)分子、FcεRⅡ/CD23和CD40的表達(dá)，亦可增強(qiáng)B細(xì)胞
2020
03-20

骨形態(tài)發(fā)生蛋白
二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，二抗上通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點(diǎn)使得其在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中得以廣泛應(yīng)用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對(duì)某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用特定標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每一個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記，大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用；此外，一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)二抗分子，從而使信號(hào)大大增強(qiáng)，提高了實(shí)驗(yàn)靈敏度。二抗，廣義上是指專(zhuān)門(mén)和一抗進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體。檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同樣的，在
2020
03-20

細(xì)胞因子之骨形態(tài)發(fā)生蛋白
【細(xì)胞因子】細(xì)胞因子是細(xì)胞分泌的一種小的信號(hào)蛋白，對(duì)細(xì)胞間的相互作用和通訊有特殊的影響。細(xì)胞因子調(diào)節(jié)體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)之間的平衡，調(diào)節(jié)特定細(xì)胞群的成熟、生長(zhǎng)和反應(yīng)。一些細(xì)胞因子以復(fù)雜的方式增強(qiáng)或抑制其他細(xì)胞因子的作用。細(xì)胞因子通過(guò)與特定的細(xì)胞表面受體結(jié)合并激活下游的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)，從而導(dǎo)致功能或表型的改變。細(xì)胞因子主要通過(guò)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)多種生物功能，包括先天和后天免疫、造血、炎癥和修復(fù)以及增殖。細(xì)胞因子可能作用于分泌它們的細(xì)胞（自分泌作用）、鄰近細(xì)胞（旁分泌作用）或在某些情況下作用于遠(yuǎn)處的細(xì)胞（內(nèi)分
2020
03-20

愛(ài)必信cGMP級(jí)無(wú)血清細(xì)胞凍存液
細(xì)胞培養(yǎng)是個(gè)辛苦活，根本離不了人。新冠病毒肺炎疫情之下，不知道您實(shí)驗(yàn)室里養(yǎng)的細(xì)胞可還好？當(dāng)然，合理運(yùn)用細(xì)胞凍存和復(fù)蘇技術(shù)可以幫助您省心度過(guò)假期。不過(guò)也有不少小伙伴向小愛(ài)哭訴，自己辛辛苦苦養(yǎng)的細(xì)胞凍存復(fù)蘇后失活，復(fù)蘇出來(lái)后活著的細(xì)胞就沒(méi)幾個(gè)了……辛辛苦苦好一陣、一夜回到解放前的感覺(jué)不好受，那么細(xì)胞凍存復(fù)蘇后失活的原因?yàn)楹文?？我們又該如何去?guī)避呢？其實(shí)目前實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)胞凍存大多采用10%DMSO或甘油+10%到20%牛血清+培養(yǎng)基作為細(xì)胞凍存液，這種非玻璃化凍存的方式，操作中我們常規(guī)會(huì)注意慢凍快融以
2020
03-20

免疫組化染色全是一片紅原因分析
我們做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，會(huì)發(fā)現(xiàn)做免疫組化整張片子染的臟臟的一片紅的情況，而這其中有很多原因。以下是對(duì)免疫組化一片紅的總結(jié)：抗體用了多抗?一抗用多抗很容易出現(xiàn)非特異性染色，建議用高純度的針對(duì)更具特異性抗原決定簇的單抗來(lái)解決。單抗很貴，不過(guò)效果很好。尤其是背景非特異性染色不會(huì)太深。真是一分價(jià)錢(qián)一分貨。一抗過(guò)期也會(huì)造成悲劇，所以要注意抗體的有效期?？贵w濃度過(guò)高/孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)一抗?jié)舛忍咭彩浅霈F(xiàn)非特異性染色的常見(jiàn)原因。解決的辦法就是預(yù)實(shí)驗(yàn)。每次使用新抗體前應(yīng)該多做預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索出理想的工作濃度，不能簡(jiǎn)單地按照說(shuō)
2020
03-20

距離畢業(yè)答辯還有_天，組化實(shí)驗(yàn)做不完，小愛(ài)過(guò)來(lái)想辦法
一眨眼已經(jīng)到了三月中旬了，想必各位老師渡過(guò)了一個(gè)學(xué)生時(shí)代長(zhǎng)的寒假，假是放舒服了，可這實(shí)驗(yàn)可怎么辦呢，怎么樣才能快速結(jié)束自己的實(shí)驗(yàn)并有一個(gè)好的結(jié)果呢，小愛(ài)不忍大家在家里著急上火，獻(xiàn)給大家小愛(ài)六字真言：多色組化服務(wù)！多重?zé)晒饷庖呓M化(mIHC)實(shí)驗(yàn)原理TSA技術(shù)(TyramideSignalAmplification™，酪胺信號(hào)放大技術(shù)):簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，用該方法做多重免疫熒光是利用二抗上帶有的HRP(而不是直接偶聯(lián)熒光素)，來(lái)催化后續(xù)添加入體系的非活性熒光素。熒光素在HRP和過(guò)氧化氫的作用下被活化，跟臨
2020
03-19

白介素8，真真假假的免疫因子
白細(xì)胞介素8（interleutin-8，IL-8）是一種趨化性細(xì)胞因子（chemokinechenmotacticcytokine，CKC），屬于CXC-alpha亞家族，在正常人體內(nèi)，主要是由單核細(xì)胞、免疫細(xì)胞、上皮細(xì)胞等分泌，參與炎癥和體內(nèi)免疫防御，其受體（CXCR）是由59和67kDa兩個(gè)亞單位組成的二聚體糖蛋白，屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族，分別由CXCR1,CXCR2兩個(gè)亞型，然而有研究表明，腫瘤細(xì)胞本身也可分泌IL-8，IL-8也可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，目前的研究證明在鼻咽癌、肺癌、乳腺癌、
2020
03-19

PD-1 PD-L1信號(hào)通路在不同來(lái)源的MSCs中的免疫調(diào)節(jié)作用
間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）是一類(lèi)具有自我更新、多向分化、免疫調(diào)節(jié)功能的干細(xì)胞，能夠從骨髓、脂肪、臍血等組織中分離得到。程序性死亡分子1（PD-1）/程序性死亡分子1配體（PD-L1）信號(hào)通路在免疫反應(yīng)的負(fù)性調(diào)控和維持外周免疫耐受中發(fā)揮著重要作用。近年來(lái)，PD-1/PD-L1信號(hào)通路在MSCs中的作用逐漸受到重視。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstemcells，MSCs）是非造血基質(zhì)起源的罕見(jiàn)細(xì)胞，位于骨髓（bonemarrow，BM）和多種其他組織中，能夠分化成中胚層來(lái)源的細(xì)胞，如成骨細(xì)胞
2020
03-19

炎癥造模少不了的好幫手——脂多糖（LPS）
脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁外壁的組成成分，主要由脂質(zhì)和多糖構(gòu)成。LPS的結(jié)構(gòu)如下圖所示:左面為O抗原，中間為核心多糖，右面為類(lèi)脂A.圖1.脂多糖結(jié)構(gòu)示意圖脂多糖是一種常見(jiàn)的內(nèi)毒素(Endotoxin)，在體內(nèi)可以通過(guò)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)激活單核巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞等，合成和釋放多種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)，進(jìn)而引起機(jī)體一系列的反應(yīng)。其主要作用機(jī)理已研究的較為透徹，如圖2所示，當(dāng)LPS進(jìn)入機(jī)體入血后，脂多糖結(jié)合蛋白LBP可以識(shí)別LPS，與LPS單體結(jié)
2020
03-19

免疫共沉淀Co-IP的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化
免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation，Co-IP）是以抗體和抗原之間的專(zhuān)一性作用為基礎(chǔ)的，用于研究蛋白質(zhì)間相互作用的經(jīng)典方法，是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。如下圖所示，如果用蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A，那么與A在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能沉淀下來(lái)。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。愛(ài)必信生物爆款熱賣(mài)產(chǎn)品abs955
2020
03-19

愛(ài)必信多色免疫組化服務(wù)
【技術(shù)原理】多重免疫組化，主要的技術(shù)原理來(lái)自TSA技術(shù)，TSA即酪酰胺信號(hào)放大(Tyramidesignalamplification)是一類(lèi)利用辣根過(guò)氧化酶（HRP）對(duì)靶蛋白或核酸進(jìn)行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測(cè)方法。該技術(shù)可與高性能染料AlexaFluor®、傳統(tǒng)熒光染料和比色檢測(cè)系統(tǒng)相兼容。TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的過(guò)氧化物酶反應(yīng)(酪胺鹽在HRP催化H202下形成共價(jià)鍵結(jié)合位點(diǎn))，產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物，該產(chǎn)物能與周?chē)牡鞍讱埢?包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基)結(jié)合，這樣在抗原-抗
2020
03-18

產(chǎn)品推薦：胰島素Insulin
胰島素（Insulin）是由胰島β細(xì)胞分泌的一種A和B雙鏈構(gòu)成的多肽激素，由51個(gè)氨基酸組成，分子量約5800Da。兩條鏈由兩對(duì)鏈間二硫鍵連接，另外A鏈自身還含有一對(duì)鏈內(nèi)二硫鍵。胰島素是目前已知的機(jī)體內(nèi)能降低血糖的激素，不僅負(fù)責(zé)調(diào)控細(xì)胞對(duì)葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝入、利用和儲(chǔ)存，而且抑制糖原、蛋白質(zhì)和脂肪的降解發(fā)生。不同物種胰島素的功能大體相同，只是在氨基酸組成上有細(xì)微差異。人胰島素分子結(jié)構(gòu)示意圖胰島素在許多細(xì)胞活動(dòng)中發(fā)揮重要作用，如促進(jìn)糖和氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)，提高合成代謝降低分解代謝，以及用于刺激細(xì)胞
2020
03-18

免疫小分子抑制劑
免疫抑制劑系能降低免疫反應(yīng)的藥物。能選擇性地作用于所需抑制的某一免疫反應(yīng)環(huán)節(jié)和免疫細(xì)胞。免疫是指機(jī)體對(duì)各種致病性物質(zhì)的反應(yīng)，此種反應(yīng)有的對(duì)機(jī)體有利，可增強(qiáng)機(jī)體的抗病能力；有的對(duì)機(jī)體不利，可造成生理機(jī)能的紊亂或組織損傷，故對(duì)因發(fā)生有害于機(jī)體的反應(yīng)者應(yīng)用免疫抑制劑以影響免疫過(guò)程的有關(guān)環(huán)節(jié)而降低機(jī)體的免疫反應(yīng)性。為了治療各種免疫性疾病以及減弱組織不相容性，已發(fā)展了多種免疫抑制劑，其中一些已廣泛應(yīng)用于臨床。免疫抑制劑種類(lèi)繁多，常用的免疫抑制劑有糖皮質(zhì)激素類(lèi)(潑尼松、氫化潑尼松等)、烴化劑(氧化氮芥、環(huán)磷
2020
03-18

ELISA實(shí)驗(yàn)做不好？我們?yōu)槟鷧R總了常見(jiàn)的30個(gè)問(wèn)題?。ㄒ唬?/a>
ELISA（免疫酶聯(lián)吸附實(shí)驗(yàn)）是免疫學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)之一，大部分生命科學(xué)領(lǐng)域的科研工作者對(duì)其都不陌生。因?yàn)槠涮禺愋詮?qiáng)，靈敏度高，可精確定量的特性，在基礎(chǔ)科研和臨床診斷中，ELISA技術(shù)都應(yīng)用廣泛，相信很多關(guān)注我們的小伙伴也都做過(guò)ELISA。ELISA實(shí)驗(yàn)步驟少，流程短，購(gòu)買(mǎi)的即用型試劑盒也都有指導(dǎo)性很強(qiáng)的操作說(shuō)明書(shū)，單次實(shí)驗(yàn)3-6小時(shí)即可得到結(jié)果，實(shí)驗(yàn)小白也可以很快的上手。但是，各位同學(xué)可不要輕視哦，ELISA和WB、IHC等基礎(chǔ)免疫實(shí)驗(yàn)一樣，都是易學(xué)難精，上手容易，但想要得到穩(wěn)定的結(jié)果，還是要花一點(diǎn)

2020
03-18

OGG1，DNA氧化損傷修復(fù)者
活性氧自由基ROS造成的DNA損傷是腫瘤發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵因素，DNA分子的主要氧化產(chǎn)物8-氧-鳥(niǎo)嘌呤（8-oxo-7,8-dihydroguanine；8-oxo-Gua）被認(rèn)為是DNA氧化損傷的生物標(biāo)志物。8-oxo-Gua具有高度致突變性，在通過(guò)DNA聚合酶進(jìn)行復(fù)制時(shí)，產(chǎn)生G：C—T：A顛換突變，而在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，主要通過(guò)OGG1介導(dǎo)的堿基切除修復(fù)(baseexcisionrepair，BER)通路清除8-oxo-Gua。OGG1蛋白功能缺陷可使機(jī)體罹患癌癥的易感性增高，OGG1基因位于人

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