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2020
03-26

珍貴細胞污染防不勝防？即使亡羊也需補牢
各位老師們培養(yǎng)細胞時想必頭疼的就是各種污染問題，尤其是一些珍貴細胞，發(fā)現(xiàn)污染后更是欲哭無淚，有時候出現(xiàn)污染但是沒有留心則會影響整個實驗進度，所以小愛為大家掙了一下細胞培養(yǎng)出現(xiàn)的問題和處理方法，爭取讓老師們少走些彎路。一、黑膠蟲污染因為小愛近期收到客戶反饋實驗細胞被黑膠蟲污染導致實驗無法進行，所以這邊首先解一下黑膠蟲污染，黑膠蟲屬于一種爭議生物，有人認為是從血清中來的一種原蟲，也有人認為是細菌，或是真菌，也有人認為是血清中的蛋白的結晶。"黑膠蟲"可寄生于動物細胞，也可以生存于中，依靠細胞和培養(yǎng)基中
2020
03-25

細胞培養(yǎng)，血清VS無血清！
細胞在體外能夠成功生長，培養(yǎng)基的選擇及培養(yǎng)方法的優(yōu)化十分關鍵。細胞在單純的培養(yǎng)基中不能存活，各種類型的細胞培養(yǎng)中必須提供某些生長因子、黏附和伸展因子、微量元素等營養(yǎng)物質。傳統(tǒng)培養(yǎng)基中一般會添加動物血清如牛血清等。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛；新牛血清取自出生24小時之內的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。其中胎牛血清是品質較高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分少。血清培養(yǎng)的優(yōu)勢與局限采用天然來源的血清作為細胞培養(yǎng)添加物，優(yōu)勢在于提供豐富全面的細胞生長必需的
2020
03-24

拯救選擇困難——胎牛血清好壞知多少
生物學科作為實驗學科，嚴謹是很重要的品質，相信很多小伙伴經過長年實驗的熏陶，已經形成了一定程度的選擇困難。胎牛血清現(xiàn)在種類眾多，很多人都很難分辨出質量的好壞，這就讓人們購買有難度了。畢竟買到劣質的胎牛血清會很吃虧，這點必須注意。那么要怎樣分辨胎牛血清質量的好壞？拿到血清，先接觸的是血清外觀，對于缺少細胞培養(yǎng)經驗的人來說，外觀的判斷尤為重要1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細胞培養(yǎng)用血清標準是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指
2020
03-23

ELISA實驗做不好？我們?yōu)槟鷧R總了常見的30個問題?。ǘ?/a>
上一期我們?yōu)榇蠹覅R總了ELISA實驗原理、樣本準備和預實驗相關的十個常見問題及解答，可能有心急的小伙伴早就想要了解更多后續(xù)關于ELISA實驗方面的問題了，不要走開，接下來將給您帶來相關解答~Q：invivo實驗周期長，不太好做預實驗，對ELISA結果會有影響么？怎么辦？A：如果您實驗室之前建立的invivo實驗protocol經過驗證，可以保證有效性，那么，可以不用再進行相關的預實驗；并且，如果實驗周期較長，樣本獲取不易，同時又需要檢測較多指標，建議將樣品分裝凍存，避免反復凍融。ELISA實驗還

2020
03-23

脂多糖LPS——針對革蘭陰性菌的藥物靶標
脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是所有革蘭陰性細菌外膜的主要組成部分,維持了細菌的結構完整性,并保護細菌膜免受某些化學物質的攻擊。LPS被稱為內毒素,是革蘭陰性菌主要致病成分,可引起強烈免疫反應,導致幾乎所有的真核細胞發(fā)生形態(tài)、代謝和基因表達變化,刺激宿主細胞因子失控性表達,發(fā)生嚴重感染。敗血癥就是由LPS引發(fā)的重要疾病之一,敗血癥發(fā)作時,患者體內LPS濃度將極大提高,以至于身體出現(xiàn)災難性的炎癥反應。大量實驗證實,LPS、LPS結合蛋白(lipopo-lysaccharid
2020
03-23

植物血凝素（PHA）知多少
植物血凝素（Phytohaemagglutinin,PHA）是一種發(fā)現(xiàn)于植物特別是豆科植物中的凝集素（lectin），屬于高分子糖蛋白類，是低聚糖（由半乳糖，N-乙酰葡糖胺和甘露糖所構成）和蛋白質的復合物，具有促進外周血淋巴細胞（PBMC）有絲分裂和誘導干擾素分泌的活性。在生命科學領域，植物血凝素被應用為一種促細胞分裂原（mitogen），在體外能刺激小淋細胞轉化成具有免疫活性的淋細胞，并促進其分裂。轉化的淋巴細胞能分泌各種淋巴因子。主要應用如下：1、PHA對外周周血淋巴細胞的轉化作用。外周血淋
2020
03-23

白細胞介素族譜——IL4
白細胞介素4（interleutin-4，IL-4），屬于紅細胞生成素超家族成員，位于活化T細胞，在Th2亞群產生，此外，肥大細胞、IL2刺激小鼠T細胞系2.19、ConA刺激人Th克隆2F1、小鼠胸腺瘤EL-4細胞以及B細胞系CH2均能分泌IL-4，IL4分子量為140kDa，胞膜外區(qū)209氨基酸，跨膜區(qū)24氨基酸，胞漿區(qū)569氨基酸。IL可促使抗原活化的B細胞分裂增殖，但其作用較IL-2稍弱，而IL-4能促使靜止的B細胞表達MHCⅡ類分子、FcεRⅡ/CD23和CD40的表達，亦可增強B細胞
2020
03-20

骨形態(tài)發(fā)生蛋白
二抗是在其它宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體，根據(jù)實驗需求，二抗上通常連有酶或熒光素等標簽。由于二抗所具備的優(yōu)點使得其在免疫學實驗中得以廣泛應用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用特定標記的二抗可以免去對每一個一抗進行標記，大大節(jié)省了時間和費用；此外，一個一抗分子可以同時結合幾個二抗分子，從而使信號大大增強，提高了實驗靈敏度。二抗，廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同樣的，在
2020
03-20

細胞因子之骨形態(tài)發(fā)生蛋白
【細胞因子】細胞因子是細胞分泌的一種小的信號蛋白，對細胞間的相互作用和通訊有特殊的影響。細胞因子調節(jié)體液和細胞免疫反應之間的平衡，調節(jié)特定細胞群的成熟、生長和反應。一些細胞因子以復雜的方式增強或抑制其他細胞因子的作用。細胞因子通過與特定的細胞表面受體結合并激活下游的細胞內信號，從而導致功能或表型的改變。細胞因子主要通過細胞外信號調節(jié)多種生物功能，包括先天和后天免疫、造血、炎癥和修復以及增殖。細胞因子可能作用于分泌它們的細胞（自分泌作用）、鄰近細胞（旁分泌作用）或在某些情況下作用于遠處的細胞（內分
2020
03-20

愛必信cGMP級無血清細胞凍存液
細胞培養(yǎng)是個辛苦活，根本離不了人。新冠病毒肺炎疫情之下，不知道您實驗室里養(yǎng)的細胞可還好？當然，合理運用細胞凍存和復蘇技術可以幫助您省心度過假期。不過也有不少小伙伴向小愛哭訴，自己辛辛苦苦養(yǎng)的細胞凍存復蘇后失活，復蘇出來后活著的細胞就沒幾個了……辛辛苦苦好一陣、一夜回到解放前的感覺不好受，那么細胞凍存復蘇后失活的原因為何呢？我們又該如何去規(guī)避呢？其實目前實驗室進行細胞凍存大多采用10%DMSO或甘油+10%到20%牛血清+培養(yǎng)基作為細胞凍存液，這種非玻璃化凍存的方式，操作中我們常規(guī)會注意慢凍快融以
2020
03-20

免疫組化染色全是一片紅原因分析
我們做實驗的時候，會發(fā)現(xiàn)做免疫組化整張片子染的臟臟的一片紅的情況，而這其中有很多原因。以下是對免疫組化一片紅的總結：抗體用了多抗?一抗用多抗很容易出現(xiàn)非特異性染色，建議用高純度的針對更具特異性抗原決定簇的單抗來解決。單抗很貴，不過效果很好。尤其是背景非特異性染色不會太深。真是一分價錢一分貨。一抗過期也會造成悲劇，所以要注意抗體的有效期?？贵w濃度過高/孵育時間過長一抗?jié)舛忍咭彩浅霈F(xiàn)非特異性染色的常見原因。解決的辦法就是預實驗。每次使用新抗體前應該多做預實驗，摸索出理想的工作濃度，不能簡單地按照說
2020
03-20

距離畢業(yè)答辯還有_天，組化實驗做不完，小愛過來想辦法
一眨眼已經到了三月中旬了，想必各位老師渡過了一個學生時代長的寒假，假是放舒服了，可這實驗可怎么辦呢，怎么樣才能快速結束自己的實驗并有一個好的結果呢，小愛不忍大家在家里著急上火，獻給大家小愛六字真言：多色組化服務！多重熒光免疫組化(mIHC)實驗原理TSA技術(TyramideSignalAmplification™，酪胺信號放大技術):簡單來說，用該方法做多重免疫熒光是利用二抗上帶有的HRP(而不是直接偶聯(lián)熒光素)，來催化后續(xù)添加入體系的非活性熒光素。熒光素在HRP和過氧化氫的作用下被活化，跟臨
2020
03-19

白介素8，真真假假的免疫因子
白細胞介素8（interleutin-8，IL-8）是一種趨化性細胞因子（chemokinechenmotacticcytokine，CKC），屬于CXC-alpha亞家族，在正常人體內，主要是由單核細胞、免疫細胞、上皮細胞等分泌，參與炎癥和體內免疫防御，其受體（CXCR）是由59和67kDa兩個亞單位組成的二聚體糖蛋白，屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族，分別由CXCR1,CXCR2兩個亞型，然而有研究表明，腫瘤細胞本身也可分泌IL-8，IL-8也可促進腫瘤的發(fā)生，目前的研究證明在鼻咽癌、肺癌、乳腺癌、
2020
03-19

PD-1 PD-L1信號通路在不同來源的MSCs中的免疫調節(jié)作用
間充質干細胞（MSCs）是一類具有自我更新、多向分化、免疫調節(jié)功能的干細胞，能夠從骨髓、脂肪、臍血等組織中分離得到。程序性死亡分子1（PD-1）/程序性死亡分子1配體（PD-L1）信號通路在免疫反應的負性調控和維持外周免疫耐受中發(fā)揮著重要作用。近年來，PD-1/PD-L1信號通路在MSCs中的作用逐漸受到重視。間充質干細胞（mesenchymalstemcells，MSCs）是非造血基質起源的罕見細胞，位于骨髓（bonemarrow，BM）和多種其他組織中，能夠分化成中胚層來源的細胞，如成骨細胞
2020
03-19

炎癥造模少不了的好幫手——脂多糖（LPS）
脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)是革蘭氏陰性細菌細胞壁外壁的組成成分，主要由脂質和多糖構成。LPS的結構如下圖所示:左面為O抗原，中間為核心多糖，右面為類脂A.圖1.脂多糖結構示意圖脂多糖是一種常見的內毒素(Endotoxin)，在體內可以通過細胞信號轉導系統(tǒng)激活單核巨噬細胞、內皮細胞、上皮細胞等，合成和釋放多種細胞因子和炎性介質，進而引起機體一系列的反應。其主要作用機理已研究的較為透徹，如圖2所示，當LPS進入機體入血后，脂多糖結合蛋白LBP可以識別LPS，與LPS單體結
2020
03-19

免疫共沉淀Co-IP的實驗優(yōu)化
免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation，Co-IP）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的，用于研究蛋白質間相互作用的經典方法，是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。如下圖所示，如果用蛋白質A的抗體免疫沉淀A，那么與A在體內結合的蛋白質B也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。愛必信生物爆款熱賣產品abs955
2020
03-19

愛必信多色免疫組化服務
【技術原理】多重免疫組化，主要的技術原理來自TSA技術，TSA即酪酰胺信號放大(Tyramidesignalamplification)是一類利用辣根過氧化酶（HRP）對靶蛋白或核酸進行高密度原位標記的酶學檢測方法。該技術可與高性能染料AlexaFluor®、傳統(tǒng)熒光染料和比色檢測系統(tǒng)相兼容。TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(酪胺鹽在HRP催化H202下形成共價鍵結合位點)，產生大量的酶促產物，該產物能與周圍的蛋白殘基(包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基)結合，這樣在抗原-抗
2020
03-18

產品推薦：胰島素Insulin
胰島素（Insulin）是由胰島β細胞分泌的一種A和B雙鏈構成的多肽激素，由51個氨基酸組成，分子量約5800Da。兩條鏈由兩對鏈間二硫鍵連接，另外A鏈自身還含有一對鏈內二硫鍵。胰島素是目前已知的機體內能降低血糖的激素，不僅負責調控細胞對葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝入、利用和儲存，而且抑制糖原、蛋白質和脂肪的降解發(fā)生。不同物種胰島素的功能大體相同，只是在氨基酸組成上有細微差異。人胰島素分子結構示意圖胰島素在許多細胞活動中發(fā)揮重要作用，如促進糖和氨基酸轉運，提高合成代謝降低分解代謝，以及用于刺激細胞
2020
03-18

免疫小分子抑制劑
免疫抑制劑系能降低免疫反應的藥物。能選擇性地作用于所需抑制的某一免疫反應環(huán)節(jié)和免疫細胞。免疫是指機體對各種致病性物質的反應，此種反應有的對機體有利，可增強機體的抗病能力；有的對機體不利，可造成生理機能的紊亂或組織損傷，故對因發(fā)生有害于機體的反應者應用免疫抑制劑以影響免疫過程的有關環(huán)節(jié)而降低機體的免疫反應性。為了治療各種免疫性疾病以及減弱組織不相容性，已發(fā)展了多種免疫抑制劑，其中一些已廣泛應用于臨床。免疫抑制劑種類繁多，常用的免疫抑制劑有糖皮質激素類(潑尼松、氫化潑尼松等)、烴化劑(氧化氮芥、環(huán)磷
2020
03-18

ELISA實驗做不好？我們?yōu)槟鷧R總了常見的30個問題?。ㄒ唬?/a>
ELISA（免疫酶聯(lián)吸附實驗）是免疫學基礎實驗之一，大部分生命科學領域的科研工作者對其都不陌生。因為其特異性強，靈敏度高，可精確定量的特性，在基礎科研和臨床診斷中，ELISA技術都應用廣泛，相信很多關注我們的小伙伴也都做過ELISA。ELISA實驗步驟少，流程短，購買的即用型試劑盒也都有指導性很強的操作說明書，單次實驗3-6小時即可得到結果，實驗小白也可以很快的上手。但是，各位同學可不要輕視哦，ELISA和WB、IHC等基礎免疫實驗一樣，都是易學難精，上手容易，但想要得到穩(wěn)定的結果，還是要花一點

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