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蛋白磷酸化檢測方法優(yōu)缺點(diǎn)分述2025/03/11: 蛋白激酶將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到蛋白多肽底物上的絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基，直接影響目標(biāo)的活性和功能。放射性研究表明，真核細(xì)胞中大約30%的蛋白經(jīng)過磷酸化修飾。這一關(guān)鍵的翻譯后修飾調(diào)控了廣泛的細(xì)胞活性，包括細(xì)胞周期、分化、代謝和神經(jīng)元通訊。此外，異常的磷酸化事件與許多疾病狀態(tài)相關(guān)。在評估磷酸化時，選擇的方法可能會有所不同，這取決于多個因素，包括提出的具體問題以及特殊儀器或試劑的可用性。如何檢測蛋白磷酸化，本文簡要介紹了幾種常用方法，并提出了每種方法的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。激酶活性分析蛋白激酶通常是多個信號

免疫學(xué)工具酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、免疫組化、WB講解2025/03/03: 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色，待測的樣品多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒有用到組織包埋、切片等技術(shù)，這是與免疫組化的主要區(qū)別，操作上開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上，這就是“吸附"的含義。免疫組化和elisa所用到的原理大致相同，只是因為所檢測的樣品不同，從而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析，其靈敏度非常高。免疫組化：是融合了免疫學(xué)原理（抗原抗體特異性結(jié)合）和組織學(xué)技術(shù)

qPCR反應(yīng)中的Ct值是什么？2025/02/25: 閾值循環(huán)數(shù)Thresholdcycle(Ct)也寫作Cq值，熒光信號大于熒光閾值時PCR循環(huán)數(shù)。儀器軟件通常將第3-15個循環(huán)的熒光值設(shè)為基線（baseline），是由于測量的偶然誤差引起的。閾值（threshold）一般是基線的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。在實(shí)際操作中也可以手動調(diào)節(jié)。高于閾值的熒光信號被認(rèn)為是真實(shí)的信號，用于定義Ct值。Ct會受到閾值的影響，每次試驗由于樣品和儀器的不同會導(dǎo)致基線不同，進(jìn)而影響閾值和Ct值。模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在一定線性關(guān)系,起始模板量濃度越高，Ct值

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試驗非特異性問題分析2025/02/18: 酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）是一種使用酶標(biāo)儀進(jìn)行測定的免疫測定法，用于檢測和定量生物分子，其它免疫診斷方法一樣酶免試劑在它的研究、生產(chǎn)及使用中常常會碰到非特異性問題。1、試劑盒特異性因素1、1固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種，以微量滴定板最為常見。它具有良好的吸附性能，孔底透明度高，空白值低，各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯y(tǒng)i烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別，各產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此，在選擇試劑盒同時要對其使用的微孔板型號進(jìn)行認(rèn)證，

ELISA酶聯(lián)接免疫吸附劑測定實(shí)驗標(biāo)準(zhǔn)品溶解稀釋流程2025/02/14: ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱，是一種檢測方法，標(biāo)準(zhǔn)品是相對于具體的物質(zhì)有具體的標(biāo)準(zhǔn)品。ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線是結(jié)果計算的尺子，標(biāo)準(zhǔn)品是ELISA實(shí)驗成功與否的關(guān)鍵點(diǎn)。ELISA實(shí)驗標(biāo)準(zhǔn)品溶解稀釋流程：1、粉末標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心，讓因運(yùn)輸沾到管蓋、管壁的標(biāo)準(zhǔn)品沉到管底。2、根據(jù)瓶標(biāo)簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末全溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方式及過程2025/02/10: 標(biāo)準(zhǔn)溶液指的是具有準(zhǔn)確已知濃度的試劑溶液，在滴定分析中常用滴定劑。在其他的分析方法中用標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制工作曲線或作計算標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度標(biāo)定：標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度標(biāo)定因配置溶液不同而有所不同。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法有兩種：1、直接配制法在分析天平上準(zhǔn)確稱取一定量已干燥的基準(zhǔn)物溶于水后，轉(zhuǎn)入已校正的容量瓶中用水稀釋至刻度，搖勻，即可算出其準(zhǔn)確濃度。2、標(biāo)定法很多物質(zhì)不符合基準(zhǔn)物生物條件，不能直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。一般先將這些物質(zhì)配成近似所需濃度溶液，再用基準(zhǔn)物測定其準(zhǔn)確濃度。標(biāo)定的方法有直接標(biāo)定和間接標(biāo)定兩種，間

PCR反應(yīng)DNA 復(fù)制過程解讀2025/01/21: PCR全稱多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerasechainreaction），是一種非常強(qiáng)大的技術(shù)，可以通過一種非常簡單但是高效的方法來復(fù)制DNA，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。復(fù)制DNA必要性：DNA復(fù)制是很多研究的基礎(chǔ)，例如，當(dāng)我們對RNA進(jìn)行測序時，必須先將RNA轉(zhuǎn)化為DNA，并進(jìn)行大量復(fù)制。在對于某個人進(jìn)行基因組測序時，我們不能對于某個細(xì)胞或者單個分子進(jìn)行測序。測序的基礎(chǔ)要求擁有大量的相同的DNA分子拷貝，因此，DNA復(fù)制是做生物研究中的基

微生物實(shí)驗室培養(yǎng)基應(yīng)用技巧匯集2025/01/14: 培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實(shí)驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當(dāng)、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。一、培養(yǎng)基的購置與驗收1.購置從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來看，不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品，甚至同一廠家不同批號的產(chǎn)品都會存在差異。依據(jù)ISO/IEC17025《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗室能力的通用要求》，對培養(yǎng)基的供應(yīng)企業(yè)進(jìn)行評價后選擇合格的供應(yīng)商，這是培養(yǎng)基購買過程中重要的步驟。應(yīng)選擇產(chǎn)品市場信譽(yù)

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）實(shí)驗操作重點(diǎn)之一加樣解讀2025/01/07: 酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實(shí)驗室技術(shù)。免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理，對待測抗體或者抗原進(jìn)行分析測定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數(shù)據(jù)處理。ELISA實(shí)驗測定操作簡單，一般涉及到樣本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色、結(jié)果判斷和結(jié)果報告及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會影響

ELISA酶聯(lián)吸附試驗標(biāo)本引起結(jié)果問題分析2025/01/03: ELISA（enzymelinkedimmunosorbentassay）即酶聯(lián)吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。血清是常用的ELISA試劑盒試驗常用的標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。1、內(nèi)源性物質(zhì)有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。（

免疫熒光技術(shù)實(shí)驗步驟與優(yōu)缺點(diǎn)2024/12/24: 免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence，IF）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光基團(tuán)，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位。原理：免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測組織或細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在組織或細(xì)胞內(nèi)形

ELISA檢測試驗雙抗體夾心法和競爭法比較2024/12/17: 酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。它是應(yīng)用最多的一種免疫酶技術(shù)。ELISA試劑盒（ELISAKits）已成為藥物和植物病理學(xué)研究中的常用診斷工具，是檢測組織提取液、血清和細(xì)胞培養(yǎng)液中目標(biāo)抗體/抗原的理想工具，也是重要的質(zhì)量控制手段。ELISA檢測試驗雙抗體夾心法和競爭法有以下幾個方面的比較：原理:雙抗體夾心法：利用兩種針對抗原不同表位

PCR反應(yīng)的主要物質(zhì)探究2024/12/09: PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要包括模板DNA、引物、dNTPs、TaqDNA聚合酶和Mg2+濃度。這些物質(zhì)在PCR反應(yīng)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。1.引物引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：①引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。②引物擴(kuò)增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。③引物堿基

細(xì)胞冷凍實(shí)驗重點(diǎn)事項2024/12/03: 細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi)，而且細(xì)胞一旦離開活體開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要。細(xì)胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細(xì)胞儲存在液氮中，溫度達(dá)-196℃，理論上儲存時間是無限的。一、實(shí)驗原理：隨著溫度降低，細(xì)胞內(nèi)的酶活性會逐漸降低，到-70℃左右，酶活性幾乎為0，代謝活動停止，可以實(shí)現(xiàn)長期保存。然而，隨著溫度降低，細(xì)胞內(nèi)外的水分也會

逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗操作重點(diǎn)干貨分享2024/11/25: 逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導(dǎo)下的DNA合成，逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗包括3大要素，分別是引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA模板：1.引物：逆轉(zhuǎn)錄引物主要有3種，包括Oligo（dT）、RandomPrimers和基因特異性引物（GSP）。其中Oligo（dT）具有12-20個T堿基，并且與真核生物mRNA的3’PolyA尾配對，可合成全長的cDNA，但僅擴(kuò)增有polyA尾的mRNA，對模板質(zhì)量要求高，較適合克隆實(shí)驗。而RandomPrimers具有6-9

化學(xué)試劑的穩(wěn)定性論述2024/11/18: 化學(xué)試劑比較容易受潮、揮發(fā)、變質(zhì)，在使用化學(xué)試劑的時候必須確保化學(xué)試劑有效期，才能使實(shí)驗順利進(jìn)行，獲得精確的數(shù)據(jù)，但是很多情況下，化學(xué)試劑的性質(zhì)決定了化學(xué)試劑的有效期，對待不同類別的化學(xué)試劑可以通過化學(xué)試劑的穩(wěn)定性來判斷化學(xué)試劑的有效期。化學(xué)性質(zhì)越穩(wěn)定的化學(xué)試劑，其可以保存的有效期就會越長，反之則短。而確定化學(xué)試劑的穩(wěn)定性可以通過以下幾個方面的判斷：一個物質(zhì)的穩(wěn)定性,可遵循以下幾個原則:1、無機(jī)化合物,只要妥善保管,包裝完好無損,可以長期使用。但是,那些容易氧化、容易潮解的物質(zhì),在避光、蔭涼、干

ELISA試驗假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果解析2024/11/13: ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗是目前臨床上常用的免疫學(xué)檢驗方法，由于其試劑穩(wěn)定，易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀，既適宜于大規(guī)模篩查試驗，又可用于少量標(biāo)本的檢測，既可以做定性試驗也可以做定量分析，目前已廣泛用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子檢測等領(lǐng)域。ELISA有敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的特點(diǎn)，但其同時存在影響因素多的不足，現(xiàn)就實(shí)驗操作中常見的影響因素進(jìn)行分析實(shí)驗，以提高的實(shí)驗質(zhì)量。ELISA試驗假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果解析1、標(biāo)本的采集與保存ELISA試劑盒當(dāng)標(biāo)本采集保存不當(dāng)產(chǎn)生溶血時，紅

不同性質(zhì)的培養(yǎng)基類型分述2024/10/28: 培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質(zhì)。那么,培養(yǎng)基根據(jù)不同性質(zhì)可以分類型如下：一、化學(xué)分類1、天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等。常用的天然有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低，除在實(shí)驗室經(jīng)常使用外，也適于用來進(jìn)行工

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）實(shí)驗詳解2024/10/21: 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而獲得目的基因或檢測基因表達(dá)。實(shí)驗步驟:一、總RNA的提取總RNA提取可以：（1）獲得高純度、高質(zhì)量的總RNA；（2）可以滿足生物學(xué)下游實(shí)驗NorthernBlot、核酸酶保護(hù)實(shí)驗、RT-PCR、qRT-PCR和陣

細(xì)胞冷凍過程注意事項2024/10/14: 一個實(shí)驗室得到一個新的細(xì)胞株后，首先要把該細(xì)胞株培養(yǎng)擴(kuò)增后凍存起來。細(xì)胞凍存首先可以在由于污染等情況丟失細(xì)胞時有備份可用，另外幾乎所有細(xì)胞在培養(yǎng)傳代的過程中發(fā)生一定程度的變異，為了保持實(shí)驗結(jié)果的一致，一般細(xì)胞在培養(yǎng)幾十代以后就不能再使用了，需要將凍存的，傳代較少的細(xì)胞化凍培養(yǎng)再使用。細(xì)胞冷凍過程有四個要點(diǎn)：細(xì)胞的收獲、保護(hù)劑的使用、冷凍速率和儲存環(huán)境。1、細(xì)胞的收獲用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿90%的時候，這時細(xì)胞生長狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前24小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存

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