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RNA的提取方法總匯2024/05/13: 獲得高質(zhì)量的RNA是進(jìn)行很多分子實(shí)驗(yàn)（RT-qPCR，二代測(cè)序轉(zhuǎn)錄組分析，芯片分析，數(shù)字PCR，northem分析及cDNA文庫(kù)構(gòu)建等）的第一步，往往也是最關(guān)鍵的一步，下面主要講解的是RNA的八種提取方法。1、熱酚法本法主要用于少量細(xì)胞樣品RNA提取，其產(chǎn)量不高，但簡(jiǎn)單易行。2、快速提取法本法主要用于培養(yǎng)細(xì)胞，通過(guò)0.5%SDS裂解細(xì)胞，酚抽提去除蛋白質(zhì)和DNA沉淀，快速純化RNA。3、鹽酸胍-有機(jī)溶劑法本法由MacDonald1987年在Strohman報(bào)道的方法基礎(chǔ)上改進(jìn)而成的，適用于沒(méi)有超

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理使用規(guī)范2024/05/06: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一般是指一種確定了具有一個(gè)或多個(gè)足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料，作為分析測(cè)量行業(yè)中的“量具'，在校準(zhǔn)測(cè)量?jī)x器和裝置、評(píng)價(jià)測(cè)量分析方法、測(cè)量物質(zhì)或材料特性值和考核分析人員的操作技術(shù)水平，以及在過(guò)程中產(chǎn)品的質(zhì)量控制等領(lǐng)域起著*的作用。企業(yè)或?qū)嶒?yàn)室應(yīng)當(dāng)建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的科學(xué)管理制度，以保證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)全流程的可追溯性、使信息傳遞正確有效，保證流轉(zhuǎn)過(guò)程數(shù)量和貯存準(zhǔn)確、讓使用更規(guī)范與合理。一、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來(lái)源合法，可追溯對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的原材料選擇、制備方法、標(biāo)定方法、標(biāo)定結(jié)果、定值準(zhǔn)確性、量值溯源、穩(wěn)定性等過(guò)程進(jìn)行

QR-PCR探針?lè)夹g(shù)原理講解2024/04/28: 目前主流的實(shí)時(shí)熒光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR）方法分為染料法和探針?lè)ǎ玖戏ㄒ許YBRGreen法為代表，SYBRGreen染料游離時(shí)熒光微弱，但但一旦與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光大大增強(qiáng)，反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度與反應(yīng)管中雙鏈DNA的數(shù)量成正比例關(guān)系，因此熒光定量pcr實(shí)驗(yàn)步驟可以通過(guò)檢測(cè)熒光計(jì)算反應(yīng)管中產(chǎn)生的雙鏈DNA（PCR產(chǎn)物）的量，但該方法沒(méi)有特異性，非特異性擴(kuò)增的產(chǎn)物也會(huì)被計(jì)入。對(duì)于探針?lè)▉?lái)說(shuō)，反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度也是檢測(cè)PCR產(chǎn)物量的依據(jù)。但其發(fā)光機(jī)制卻與染料

ELISA酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定呈色反應(yīng)色彩分析2024/04/22: ELISA又稱(chēng)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，是定量檢測(cè)體液中各種靶標(biāo)蛋白含量的常用方法。其呈色反應(yīng)可進(jìn)行定性或定量分析，利用HRP酶催化TMB，反應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)色亞胺溶液，加入終止液后，使藍(lán)色陽(yáng)離子轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌。除了常見(jiàn)的藍(lán)色和黃色，ELISA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，也會(huì)出現(xiàn)一些不同尋常的多樣色彩。一、墨綠色/深藍(lán)色例：加入底物溶液孵育后，酶標(biāo)板孔溶液變成墨綠色或深藍(lán)色。在正常的ELISA實(shí)驗(yàn)中，加入底物溶液孵育后，標(biāo)曲前四孔出現(xiàn)明顯藍(lán)色梯度，即可終止反應(yīng)。但是，當(dāng)孵育的HRP酶結(jié)合物工作液濃度過(guò)高，或樣本濃度遠(yuǎn)高于檢

實(shí)驗(yàn)室ELISA封閉劑特性介紹2024/04/16: 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法。封閉（blocking）是繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過(guò)程?？乖蚩贵w包被時(shí)所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙，封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥在ELISA試劑盒其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。在免疫學(xué)實(shí)

細(xì)胞不貼壁的原因及解決方案參考2024/04/08: 細(xì)胞貼壁是細(xì)胞（除腫瘤細(xì)胞外）在體外培養(yǎng)條件下，完成貼壁后均為單層生長(zhǎng)，原因是貼壁細(xì)胞有接觸性抑制的特點(diǎn)。一般認(rèn)為接觸抑制是細(xì)胞間的一種識(shí)別作用，對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)形成與穩(wěn)定具有重要性的作用。由于貼壁細(xì)胞的一面是緊貼在培養(yǎng)瓶上的，如果其上方存在細(xì)胞與其相粘附，那么下方的細(xì)胞很快就會(huì)缺乏營(yíng)養(yǎng)餓死。不貼壁的一些原因：1.胰酶消化時(shí)間把控不當(dāng)：消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的；若胰酶處理太久，容易造成細(xì)胞膜蛋白損傷，使細(xì)胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng)，嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。2.缺少貼壁因子：血清

抗體特異性選擇參考要素2024/04/01: 抗體(antibody)免疫細(xì)胞分泌免疫物質(zhì)，是哺乳動(dòng)物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對(duì)抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識(shí)別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過(guò)介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細(xì)胞殺傷等來(lái)清除病原體。隨著抗體制備與改造技術(shù)的飛速發(fā)展，抗體已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個(gè)領(lǐng)域，包括科學(xué)研究、診斷、治療等。特異性（specificity）的本質(zhì)含義是“Connectedwithoneparticularthingonly"即只與唯yi的特定事物相關(guān)，具有專(zhuān)一性

RNA提取方法全面解說(shuō)2024/03/25: 探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒技術(shù)是一種基于實(shí)時(shí)熒光標(biāo)記的定量PCR技術(shù)，可以精確地測(cè)定目標(biāo)RNA的表達(dá)量。而要正確地進(jìn)行探針?lè)晒舛縍T-PCR實(shí)驗(yàn)，首先需要提取高質(zhì)量的RNA。下文將詳細(xì)介紹探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒的RNA提取方法的分類(lèi)、原理、操作流程和注意事項(xiàng)。一、RNA提取方法的分類(lèi)與原理:RNA提取方法可以根據(jù)提取液的種類(lèi)、提取步驟的數(shù)量和提取原理等方面進(jìn)行分類(lèi)。根據(jù)提取液的種類(lèi)，RNA提取方法可分為有機(jī)溶劑法和離子交換法。有機(jī)溶劑法是利用有機(jī)溶劑，如異丙醇、乙醇等，沉淀核

逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)必看重難點(diǎn)分享2024/03/18: 逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription），是以RNA為模板合成DNA的過(guò)程，合成的DNA稱(chēng)為cDNA。逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程遺傳信息的流動(dòng)方向?yàn)镽NA到DNA，與轉(zhuǎn)錄過(guò)程DNA到RNA的方向相反，故稱(chēng)為逆轉(zhuǎn)錄。一、實(shí)驗(yàn)原理要素：酶促催化使RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA第一鏈。一條寡聚脫氧核苷酸引物先與RNA雜交，然后由RNA依賴(lài)的DNA聚合酶催化合成相應(yīng)互補(bǔ)的cDNA拷貝，后者能進(jìn)一步用于PCR擴(kuò)增。依據(jù)實(shí)驗(yàn)的不同目的，針對(duì)cDNA第一鏈合成的引物可根據(jù)特殊的靶基因設(shè)計(jì)，或可用隨機(jī)引物與所有mRNA雜交。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值及常見(jiàn)問(wèn)題解答2024/03/11: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(RM)referencematerial(RM)：是一種已經(jīng)確定了具有一個(gè)或多個(gè)足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料，作為分析測(cè)量行業(yè)中的“量具"，在校準(zhǔn)測(cè)量?jī)x器和裝置、評(píng)價(jià)測(cè)量分析方法、測(cè)量物質(zhì)或材料特性值和考核分析人員的操作技術(shù)水平，以及在過(guò)程中產(chǎn)品的質(zhì)量控制等領(lǐng)域起著重要的作用。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基本要求有以下三點(diǎn)：第一是穩(wěn)定性，即標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在使用期間，其量值應(yīng)該是穩(wěn)定不變的；第二，均勻性，即物質(zhì)各部分之間特性量值的差異不能用實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)出來(lái)；第三，量值準(zhǔn)確性，即標(biāo)準(zhǔn)值與真值的偏離不超過(guò)不確定度。

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制主要需主要方面闡述2024/03/04: 為了確保檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠，以保證檢測(cè)報(bào)告的質(zhì)量，在檢驗(yàn)檢測(cè)工作中必須有一個(gè)質(zhì)量控制的過(guò)程，必須明確質(zhì)量控制各階段可能影響檢測(cè)報(bào)告的各項(xiàng)因素。從而對(duì)這些因素采取相應(yīng)的措施加以管理和控制，以使其過(guò)程處于受控狀態(tài)。主要從實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、設(shè)備、樣品等方面進(jìn)行質(zhì)量控制。一、環(huán)境質(zhì)量的控制1.檢測(cè)場(chǎng)所的環(huán)境條件應(yīng)滿(mǎn)足檢測(cè)工作的需要，應(yīng)采取措施確保實(shí)驗(yàn)室的內(nèi)務(wù)良好，必要時(shí)制定專(zhuān)門(mén)的工作程序。對(duì)影響分析檢測(cè)質(zhì)量的區(qū)域加以控制，限制進(jìn)入或使用該區(qū)域，并根據(jù)其特定的情況確定控制的程度。將不相容活動(dòng)的相鄰區(qū)域進(jìn)行有效隔

培養(yǎng)基的制備和性能測(cè)試分述2024/02/26: 培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當(dāng)、配制使用是否正確等都直接影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。公司對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)基購(gòu)置、貯存、制備、使用等方面應(yīng)采取的質(zhì)量控制措施進(jìn)行討論，提一些建議。希望有助于微生物檢測(cè)工作的同行們更好的開(kāi)展工作。干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處，要避免陽(yáng)光直射;未開(kāi)瓶的培養(yǎng)基在室溫下的最長(zhǎng)保存2年，開(kāi)瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應(yīng)注意防潮并在6個(gè)月

ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌優(yōu)化關(guān)鍵點(diǎn)小結(jié)2024/02/19: 優(yōu)化ELISA的重點(diǎn)之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號(hào)，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在最后一步產(chǎn)生信號(hào)。而不充分的洗滌會(huì)導(dǎo)致差異和高背景，從而帶來(lái)不理想的結(jié)果。下面將為你介紹一些利用自動(dòng)洗板機(jī)來(lái)洗滌ELISA平板的技巧。免疫分析，比如ELISA，一般包含兩個(gè)或以上的孵育步驟，中間以洗滌隔開(kāi)。ELISA通常在96孔板中開(kāi)展，其上包被了結(jié)合抗原或抗體。在封閉步驟后，包被后的平板首先與一抗或抗原孵育。隨后通過(guò)一些洗滌步驟去除未結(jié)合（低親和力）

免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟及問(wèn)題解答2024/02/05: 免疫組化基本原理是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究。1、脫蠟和水化：脫蠟前應(yīng)將組織芯片在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘。a、組織芯片置于二甲苯中浸泡10分鐘,更換二甲苯后在浸泡10分鐘b、無(wú)水乙醇中浸泡五分鐘c、95%乙醇中浸泡五分鐘d、75%乙醇中浸泡五分鐘2、抗原修復(fù)：用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片：A、抗原熱修復(fù)a、高壓熱修復(fù)：在沸水中加

實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞貼壁問(wèn)題探究2024/01/29: 細(xì)胞貼壁細(xì)胞（除腫瘤細(xì)胞外）在體外培養(yǎng)條件下，完成貼壁后均為單層生長(zhǎng)，原因是貼壁細(xì)胞有接觸性抑制的特點(diǎn)。一般認(rèn)為接觸抑制是細(xì)胞間的一種識(shí)別作用，對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)形成與穩(wěn)定具有重要性的作用。由于貼壁細(xì)胞的一面是緊貼在培養(yǎng)瓶上的，如果其上方存在細(xì)胞與其相粘附，那么下方的細(xì)胞很快就會(huì)缺乏營(yíng)養(yǎng)餓死。不貼壁的一些原因：1.胰酶消化時(shí)間把控不當(dāng)：消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的；若胰酶處理太久，容易造成細(xì)胞膜蛋白損傷，使細(xì)胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng)，嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。2.缺少貼壁因子：血清中

選擇適合實(shí)驗(yàn)抗體技術(shù)方法綜述2024/01/22: 檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同時(shí)在后繼試驗(yàn)中也會(huì)有不同的檢測(cè)方案，因此在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類(lèi)型及后繼檢測(cè)方案的要求，其中如何根據(jù)一抗的種屬來(lái)源和類(lèi)型選擇二抗尤為重要。1.一抗的種屬來(lái)源：二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來(lái)源，例如：如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是從兔血清里制備的兔源多克隆抗體，則相應(yīng)的二抗需要選擇抗兔的二抗。即根據(jù)一抗的物種來(lái)源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。2.一抗是屬于哪個(gè)類(lèi)或亞類(lèi)除了要與

引物在PCR反應(yīng)中幾個(gè)方面的作用歸納2024/01/15: PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）是一種常用的分子生物學(xué)技術(shù)，可用于擴(kuò)增DNA序列。在PCR反應(yīng)中，引物是起關(guān)鍵作用的短鏈DNA分子，它們會(huì)與待擴(kuò)增DNA序列的兩端匹配，指示聚合酶在這些位置開(kāi)始復(fù)制DNA。引物在PCR反應(yīng)中的作用可以歸納為以下幾個(gè)方面：1.引物定義PCR擴(kuò)增的目標(biāo)序列：PCR擴(kuò)增需要在待擴(kuò)增DNA序列的兩端放置引物，引物的選擇和設(shè)計(jì)可以確保PCR擴(kuò)增特定的DNA序列。引物的序列應(yīng)該能夠與待擴(kuò)增DNA序列的兩端互補(bǔ)匹配，以便在PCR反應(yīng)中進(jìn)行擴(kuò)增。2.引物促進(jìn)DNA序列的復(fù)制：一旦引物與待擴(kuò)

實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性把控詳細(xì)闡述2024/01/08: 任何檢測(cè)均會(huì)產(chǎn)生檢測(cè)誤差，分析測(cè)試誤差來(lái)源很多，如，樣品的代表性、均勻性、穩(wěn)定性。質(zhì)量保證的任務(wù)就是把所有的誤差，包括：系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差，減少到預(yù)期的水平。分析測(cè)試的質(zhì)量保證可分為取樣的質(zhì)量保證和分析檢測(cè)系統(tǒng)的質(zhì)量保證兩大方面。質(zhì)量保證的兩大方面取樣的質(zhì)量保證：樣品是從大量物質(zhì)中選取的一部分物質(zhì)；樣品的測(cè)定結(jié)果是總體特性量的估計(jì)值；由于總體物質(zhì)的不均勻性，用樣品的測(cè)定結(jié)果推斷總體，必然引入誤差，稱(chēng)此誤差為取樣誤差；取樣誤差可分為隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差；1、取樣的隨機(jī)誤差：由取樣過(guò)程中無(wú)法控制的隨機(jī)

酶免疫分析儀各類(lèi)型的工作原理及基本結(jié)構(gòu)2023/12/26: 酶免疫分析(enzymeimmunoassay，EIA)是目前臨床應(yīng)用最多的一類(lèi)免疫分析技術(shù)，可分為非均相(或異相)酶免疫測(cè)定和均相酶免疫測(cè)定兩種方法。均相酶免疫分析法（homogeneousenzymeimmunoassay，HEI）均相酶免疫分析主要有酶擴(kuò)大免疫測(cè)定技術(shù)和克隆酶供體免疫測(cè)定兩種方法。非均相酶免疫分析法（heterogeneousenzymeimmunoassay）常用的酶免疫分析法多為非均相法，又可分為液相酶免疫法和固相酶免疫法兩種，以后者常用，稱(chēng)為酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzy

DNA提取試劑盒試驗(yàn)必看事項(xiàng)2023/12/18: 一、RNA和DNA提取：裂解：裂解公式可能因您要提取DNA還是RNA而異，但共同點(diǎn)是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。Chaotropes（離液劑）的作用：Chaotrope會(huì)破壞氫鍵及疏水間的相互作用。離液鹽包括鹽酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸鋰。洗滌劑：除了離液劑外，裂解緩沖液中通常還有一些去污劑，以幫助蛋白質(zhì)溶解和裂解。溶菌酶和蛋白酶K:根據(jù)樣品類(lèi)型，也可以使用酶進(jìn)行裂解。蛋白酶K就是其中之一，實(shí)際上在這些變性緩沖液中效果較好；當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)變性增多，蛋白酶K的作用也會(huì)相應(yīng)增強(qiáng)。然而，溶菌酶在變性中不

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