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蛋白酶抑制劑與磷酸酶抑制劑各自作用特點2023/07/24

1、蛋白酶抑制劑破碎細胞提取蛋白質(zhì)的同時可釋放出蛋白酶，這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提取過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。蛋白酶抑制劑（proteaseinhibitor）從廣義上指與蛋白酶分子活性中心上的一些基團結(jié)合，使蛋白酶活力下降，甚至消失，但不使酶蛋白變性的物質(zhì)。各種蛋白酶對不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同，因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度。由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極低，尤其應注意在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑時應充分混勻以減少蛋白酶抑制劑的沉淀。常用的蛋

血清的質(zhì)量標準及實際篩選血清方法2023/07/10

血清的質(zhì)量標準：1.內(nèi)毒素標準為不高于5EU/ml2.總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高偏低都會影響實驗的正常進行3.血紅蛋白標準為不高于20mg/dl4.pH。國產(chǎn)血清、大多高于7.5，進口胎牛血清，大多低于7.5，根據(jù)PH的高低可用來初步鑒別血清的來源5.微生物。包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等，大多都能清除。大腸桿菌噬菌體無法過濾，很難徹di清除，但對血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒，在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在，是影響國產(chǎn)血清質(zhì)量的重要原因之一在實

ELISA實驗出現(xiàn)異常剖析2023/07/03

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。在檢測時，受檢標本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應。洗滌后加入酶標記的抗體，通過反應結(jié)合在固相載體上。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。ELISA實驗結(jié)果出現(xiàn)異常剖析：一、白板異常：顯色步驟結(jié)束后，酶標板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。1

獲取純化原代細胞方法合集2023/06/27

原代細胞分離的方法有多種，常用的是機械解離細胞法、酶學解離細胞法以及螯合劑解離細胞法，下面我們就介紹酶解聚方法獲得純化的原代細胞。1、胰蛋白酶純化法1）、在去除不需要的組織后，使用無菌的解剖刀和剪子把剩余的組織切成3~4mm小片，通過懸浮在無鈣鎂的平衡鹽溶液中清洗組織碎片。讓組織碎片沉淀，去除上清液。重復清洗2到3次。2）、將盛有組織碎片的容器置于冰上，去除殘留的上清液。加入0.25%溶解在無鈣鎂的平衡鹽溶液中的胰蛋白酶（100mg組織加入1ml胰蛋白酶）。3）、在4℃孵育6到18小時，使幾乎沒

ELISA試劑盒中各HRP底物操作說明2023/06/05

ELISA試劑盒中HRP底物范圍較廣，HRP即辣根過氧化物酶（HorseradishPeroxidase）比活性高，穩(wěn)定，分子量小，純酶容易制備，所以zui常用。過氧化物酶作為多個試劑盒顯色體系的關鍵成分，對試劑盒的質(zhì)量有重要影響。HRP底物主要包括二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。一、二氨基聯(lián)苯胺／金屬鹽DAB是辣根過氧化物酶最敏感、常用的底物。它產(chǎn)生強烈的棕色產(chǎn)物，在水和醇中不溶解。多數(shù)情況下，推薦在DAB中加入不同的金屬離子。當加入金屬鹽如鈷、鎳至底物液中，辣根過氧化物酶可以更

ELISA試劑盒實驗包被條件選擇指南2023/05/29

ELISA試劑盒實驗包被條件選擇指南：1、包被抗原的選擇包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被，對于含雜質(zhì)較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反應的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標板上，再通過特異性反應使抗原固相化)。經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標板上，一般都先使其與無關蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián)，偶聯(lián)物吸附于固相載體上。2、包被液的選擇一般常用的是pH9.6

抗原抗體反應的特性解析2023/05/24

抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應。這種反應既可在機體內(nèi)進行，也可以在機體外進行?？乖贵w反應的過程是經(jīng)過一系列的化學和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。抗體能特異性地識別相應的抗原，并與之結(jié)合。這種結(jié)合在體外也能發(fā)生，這種抗原抗體反應模式圖特性就是許多免疫檢測方法的基礎。抗原與抗體相互作用是非共價的，可逆的，其特性符合許多化學反應的基本原理。但因為抗體分子的結(jié)構(gòu)特點，以及抗原分子結(jié)構(gòu)的多樣性，使抗原抗體結(jié)合反應表現(xiàn)

實驗干貨，PCR反應常見問題分述2023/05/15

聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR反應常見問題分述如下：1．假陰性，不出現(xiàn)擴增條帶PCR反應的關鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備，②引物的質(zhì)量與特異性，③酶的質(zhì)量，④PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應針對上述環(huán)節(jié)進行分析研究。模板：①模板中含有雜蛋白質(zhì)，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋

影響ELISA試驗結(jié)果必看事項清點2023/05/05

ELISA試劑盒實驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在科研領域上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對實驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。影響ELISA試驗結(jié)果必看事項清點：1、操作應對試驗的物理參數(shù)有充沛的了解，如環(huán)境溫度(保持在18c～25℃)、反響孵育溫度和孵育時刻、洗刷的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。2.正確運用加樣器加樣器應筆直參加標本或試劑，ELISA試劑盒防止刮擦包被板底部。加樣過程中防止液體外濺，血清殘留在反響孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，

ELISA檢測結(jié)果解讀2023/04/23

ELISA檢測結(jié)果可以定量、定性或半定量地解釋。在定量檢測中，使用已知標準的連續(xù)稀釋液來生成標準曲線，通常是光密度（OD）與濃度的關系。由此，可以計算出未知樣品中目標物的精確數(shù)量。標準曲線計算和ELISA實驗中未知物目標濃度測定示例在定性檢測中，通常仍會通過使用酶標儀來收集數(shù)據(jù)，但結(jié)果將通過與沒有標準曲線的空白和/或陰性孔的比較來解釋為陽性或陰性。半定量檢測也是在不使用連續(xù)稀釋或標準曲線的情況下收集數(shù)據(jù)。然而，包含陰性和陽性標準，通常是高陽性和低陽性，有利于相對比較未知樣本井和已知狀態(tài)的樣本孔之

ELISA吸光度值衰減探究2023/04/20

在做elisa試劑盒實驗的時候,ELISA吸光值一直在衰減這樣的現(xiàn)象。在加完顯色液(購買)顯色一定時間后，再加終止液（2MH2SO4，自己配制）后，立即測試其吸光度值，等過幾分鐘再測試吸光度值，發(fā)現(xiàn)兩次測得的吸光度值發(fā)生衰減。第二次均小于次。并且，加終止液時，從條加到第12條后，測試發(fā)現(xiàn)，吸光度值從1-12條逐級衰減。前提是這12條酶標板都是同一種產(chǎn)品，并且包被相同蛋白。原來ELISA吸光度值衰減可以這樣巧妙應對。其實具體的原因也很簡單，有可能是顯色液的質(zhì)量不夠好。一般情況下，終止反應后OD值的

ELISA試劑盒包被用抗原與抗體概述2023/04/10

一、ELISA試劑盒包被用抗原用于包被固相載體的抗原按其來源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動物組織、微生物培養(yǎng)物等，須經(jīng)提取純化才能作包被用。如HBsAg可以從攜帶者的血清中提取，一般的細菌和病毒抗原可以從其培養(yǎng)物中提取，蛋白成份抗原可從富含此抗原的材料中提取等（例如AFP從臍帶血或胎肝中提取）。重組抗原是抗原基因在質(zhì)粒體中表達的蛋白質(zhì)抗原，多以大腸桿菌或酵母菌為質(zhì)粒體。重組抗原的優(yōu)點是除工程菌成份外，其他雜質(zhì)少，而且無傳染性，但純化技術(shù)難度較大。以大腸桿菌為質(zhì)

五種類型的生化試劑盒簡介及意義2023/03/20

五種類型的生化試劑盒：多酚氧化酶（PPO）活性檢測試劑盒（比色法），血鉀（K?）、甘油三酯（TG）、游離膽固醇（FC）、總膽固醇（TC）檢測試劑盒（比色法）。1.多酚氧化酶（PPO）活性檢測試劑盒（比色法）：多酚氧化酶（PPO）能夠催化Catechol產(chǎn)生醌，后者在525nm有特征光吸收，測定525nm光吸收增加的速率進而計算多酚氧化酶（PPO）活性。該試劑盒適用的樣本范圍廣泛包括血清、血漿、組織、細胞、細菌；而且細致優(yōu)化了樣本處理方法、實驗操作流程以及結(jié)果計算過程。2.血鉀（K?）檢測試劑盒（

PCR技術(shù)溫度與時間的把控解說2023/03/13

溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因(長度為100～300bp時)可采用二溫度點法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94℃變性，65℃左右退火與延伸(此溫度TaqDNA酶仍有較高的催化活性)。1、變性溫度與時間：變性溫度低，解鏈不wan全是導致P

實驗選擇合適的抗體要點指南2023/03/06

實驗室科研工作離不開抗體，WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體，那科研實驗室如何選擇合適的抗體呢？一.一抗選擇要點:1）.確定抗體的名字。注意中英文名字、它名、亞型等信息。2）確定你的實驗類型。Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都會列出該抗體經(jīng)驗證過適用于何種實驗的類型，如果抗體說明書沒有提及的應用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種實驗驗證，請根據(jù)說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的抗體。3）.確定實驗樣本

抗原決定簇根據(jù)結(jié)構(gòu)分類2023/02/28

根據(jù)結(jié)構(gòu)，可以把表位分為構(gòu)象決定簇、線性決定簇及新抗原決定簇1、構(gòu)象決定簇在蛋白質(zhì)分子折疊時，由線性氨基酸序列的相隔離的氨基酸殘基而形成的空間構(gòu)象，稱為構(gòu)象決定簇（conformationaldeterminant）。如溶菌酶分子上的表位來自一級序列的兩個相隔離的氨基酸殘基，所以蛋白質(zhì)或者肽類抗原的抗原決定簇依賴于其一級結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)。2、線性決定簇蛋白質(zhì)抗原上的表位是由相鄰連續(xù)的或非連續(xù)的氨基酸序列形成的局部表面結(jié)構(gòu)。在共價序列的鄰近氨基酸殘基形成的表位稱為線性決定簇（lineardeterm

小鼠白介素ELISA試劑盒成分介紹2023/02/20

試劑盒是用于盛放檢測化學成分、藥物殘留、病毒種類等化學試劑的盒子。下面小鼠白介素ELISA試劑盒成分介紹：1、預包被板:抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化96T2、酶標記抗體:(30倍濃縮)HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化0.4mLx13、標準品:重組小鼠白介素-60.5mLx24、EIA緩沖液:含1%BSA,0.05%吐溫20BPS30mLx15、標記抗體稀釋液:含1%BSA,0.05%吐溫20BPS12mLx16、顯色劑:TMB底物液15mLx17、終止液:1N硫酸12mLx

探討小鼠ELISA試劑盒加樣問題2023/02/15

ELISA試劑盒加樣時可能遇到的問題：1、過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)。2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間。3、加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外，血清或血漿標本分離不好即進行加樣。ELISA試劑盒相應解決辦法：1、標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘。2、標本為血漿：須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘。3、若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-2

單克隆化抗體特性優(yōu)勢2023/02/10

一、單克隆抗體的特性1.高度特異性。2.高度的均一性和可重復性。3.弱凝集反應和不呈現(xiàn)沉淀反應。4.對環(huán)境敏感性單克隆抗體越純，對溫度越敏感，對pH越敏感。低濃度的NaCl對單克隆抗體有一定的保護作用。二、單克隆抗體的優(yōu)點與局限性1.單克隆抗體的優(yōu)點(1)可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。(2)由于單克隆抗體的高特異性和單一生物學功能，可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導向治療。(3)由于可能得到“無xian量”的均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA

引起ELISA測定錯誤結(jié)果的主要原因2023/01/29

做elisa實驗需要注意哪些問題?實驗室需要做elisa實驗,在做的時候需要特別注意些什么問題呢?這是新手朋友都有疑惑的地方。Elisa實驗中應該注意的問題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問題。elisa試劑盒有著準確性高、靈敏度高、特異性強的諸多優(yōu)點,深受廣大用戶朋友的喜愛.然而,在實驗過程中,也需要注意很多問題.對此,你需要遵守一些規(guī)則,才能更好地進行實驗,取得較好的實驗成果。Elisa方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定.在Elisa測定中影響因素較多,在檢測過程中