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ELISA試劑盒的使用標準分享2023/01/16

ELISA中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會，只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應總是需要一定時間的溫育。溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗室中常用

ELISA試劑盒溫度把控2023/01/09

在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后?？乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當。溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應動力學研究時，實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1～2小時，產(chǎn)物的生成可達ding峰。為加速反應，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜采用更高的溫度?？乖贵w反應4℃

ELISA間接法和夾心法定性測定計算方法2023/01/05

這類反應的定性結果可以用肉眼判斷。目視標本也無色或近于無色者判為陰性，顯色清晰者為陽性。但在ELSIA中，正常人血清反應后?？沙霈F(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異，因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結果時，更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的指標。目視法簡捷明了，但頗具主觀性。在條件許可下，應該用比色計測定吸光值，這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標本（sample，S）、陽性對照（P）、和陰性對照（N）的吸光值，然后進行

分享菌種常用的兩種保存方法2022/12/13

菌種用于發(fā)酵過程作為活細胞催化劑的微生物，包括細菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類。來源于自然界大量的微生物，從中經(jīng)分離并篩選出有用菌種，再加以改良，貯存待用于。使優(yōu)良菌種的性狀保持穩(wěn)定，人為地創(chuàng)造條件，使菌種的新陳代謝活動處于不活潑狀態(tài)，即選取優(yōu)良菌種的休眠體(孢子或芽孢)或富有生命力的懸浮液在低溫或脫水狀態(tài)下保存。一、低溫存法：1.簡單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時間不超過1~2個月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空

盤點ELISA測定操作技術要求2022/11/25

ELISA即酶聯(lián)吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術要求，下面盤點ELISA測定操作技術要求如下：1、嚴格按照試劑說明書進行操作。2、檢測前應將試劑放置室溫平衡半小時，洗滌液應現(xiàn)用現(xiàn)配，同時觀察濃縮洗滌液中有無結晶，若有結晶應放37℃水浴中融化后方可使用。加入底物TMB時應注意有無顏色變化，若已顯色則可能過期或變質(zhì)，也不可使用。3、加樣后及時放入孵育箱。標本較多時，要分批操作。按照說明書步

逆轉(zhuǎn)錄實驗要素分析2022/11/14

逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導下的DNA合成，逆轉(zhuǎn)錄實驗包括3大要素，分別是引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA模板：逆轉(zhuǎn)錄過程1.引物：逆轉(zhuǎn)錄引物主要有3種，包括Oligo（dT）、RandomPrimers和基因特異性引物（GSP）。其中Oligo（dT）具有12-20個T堿基，并且與真核生物mRNA的3’PolyA尾配對，可合成全長的cDNA，但僅擴增有polyA尾的mRNA，對模板質(zhì)量要求高，較適合克隆實驗。而RandomPrimers

影響抗原抗體反應因素條件2022/11/07

抗原抗體反應原理：抗原與抗體能夠特異性結合是基于抗原決定簇（表位）和抗體超變區(qū)分子間的結構互補性與親和性?？乖瓫Q定簇=表位。這種特性是由抗原、抗體分子空間構型所決定的抗原表位和抗體超變區(qū)必須密切接觸。抗原抗體反應的四大特點：特異性、可逆性、比例性、階段性。影響抗原抗體反應因素條件:1、電解質(zhì)：抗原和抗體通常為蛋白質(zhì)分子，等電點分別為pH3～5和pH5～6，在中性或:弱堿性的環(huán)境中，表面均帶負電荷，適當濃度的電解質(zhì)會使他們失去一部分負電荷而相互結合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集或沉淀現(xiàn)象：在抗原抗體反應中，

敘述細胞培養(yǎng)中常見的污染源2022/11/01

細胞培養(yǎng)是指將細胞從動物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離，也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。細胞常規(guī)培養(yǎng)是在細胞房中進行，在超凈工作臺或生物安全柜中，把細胞處理好，根據(jù)需要加入細胞培養(yǎng)基，放入細胞培養(yǎng)瓶/皿或細胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)過程中如果操作不當或者條件控制不合適容易受到化學或者生物因素的污染，常見的污染源有：1.細菌污染細菌污染是實驗室細胞培養(yǎng)中常見的污染，即使在細胞培

引物的合成及純化方式2022/10/24

目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺y三酯法。該方法具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應物比較穩(wěn)定的特點。主要是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成，由待合成引物的3'端向5'端合成延伸，相鄰的核苷酸通過3'→5'磷酸二酯鍵連接。固相亞磷酰胺三酯法合成引物的具體步驟如下：1)用三lv乙酸去除固相載體5'-羥基的保護基團DMT，獲得游離的5'-羥基；2)將亞磷酰胺保護核苷酸單體與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，與游離的5'-羥基發(fā)生縮合反應；3)由于無法*的5'-羥基都參與縮合，可能有極

詳細解答逆轉(zhuǎn)錄操作過程中問題2022/10/17

逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導下的DNA合成。在實際的操作過程中，還會有各種問題，現(xiàn)做詳細解答！1.如何提高RT-PCR反應的靈敏度與特異性？①確定模板RNA完整性好，無DNA污染。②RNA模板中不應含有擴增反應抑制劑。③使用適量的模板RNA，模板量太多會降低特異性，太少會導致擴增不出條帶或條帶太弱。④若模板中有二級結構，可通過提高逆轉(zhuǎn)錄反應溫度來提高擴增效果。2.RNA中含有逆轉(zhuǎn)錄抑制劑時，怎么處理？逆轉(zhuǎn)錄抑制劑包括：SDS、E

ELISA標本的處理與注意事項2022/10/10

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術。ELISA的檢測目的是為了實驗提供準確的實驗依據(jù)，為了保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性，在實驗過程中必須堅持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，在收集標本前都必須有一個完整的計劃。ELISA標本的處理：1、血清：室溫血液私人凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。2.血漿：應

詳述ELISA定性測定判斷方法2022/10/05

ELISA定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統(tǒng)中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果，即用滴度來表示反應的強度，其實質(zhì)仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應的稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標本反應性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在

細胞衰老檢測方法與步驟2022/09/26

細胞衰老是細胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退、逐漸趨向死亡的現(xiàn)象。衰老的細胞表現(xiàn)為細胞體積變大，呈扁平狀；細胞核變大，核膜內(nèi)陷，染色質(zhì)聚集、固縮、裂解；胞質(zhì)內(nèi)顆粒增加，有空泡形成；線粒體的數(shù)目及形狀發(fā)生改變；膜流動性降低；溶酶體內(nèi)容物增多，導致溶酶體酶β-半乳糖苷酶活性升高。衰老細胞所具有的上述特征成為各種細胞衰老檢測手段的依據(jù)。細胞衰老檢測方法與步驟:（1）細胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預先放置滅菌的細胞片，每孔加入1×10E5個細胞，37℃5%CO2條件下培養(yǎng)過夜，使細胞在細胞片上生長。（2）在超

抗體的功能用途2022/09/19

抗體（英語：antibody）：病原體侵入人體后，刺激了淋巴細胞，淋巴細胞就會產(chǎn)生一種抵抗該病原體的特殊蛋白質(zhì)，叫作抗體。（免疫球蛋白不僅僅只是抗體）是一種由漿細胞（效應B細胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面?？贵w能識別特定外來物的一個du特特征，該外來目標被稱為抗原。一、抗體的功能抗體的主要功能是與抗原（包括外來的和自身的）相結合，從而有效地清除侵入機體內(nèi)的微生物、寄生蟲等異物，抗體（antib

細胞遷移步驟實驗方法2022/09/13

細胞遷移即細胞劃痕法，是測定細胞遷移運動與修復能力的方法，類似體外傷口愈合模型。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細胞上，用微量槍頭或其他硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞至實驗設定的時間，取出細胞培養(yǎng)板，觀察周邊細胞是否生長至中央劃痕區(qū)，以此判斷細胞的生長遷移能力，實驗通常需設定正常對照組和實驗組，實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等組別，通過不同分組之間的細胞對于劃痕區(qū)的修復能力，可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。當細胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層

ELISA實驗加樣注意點2022/09/05

ELISA實驗加樣注意點如下：1、標本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。2、加樣后及時放入孵箱。3、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。4、如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。5、標本較多時，請分批操作。6、血清樣

抗原的兩種特性分享2022/08/30

抗原（antigen），是指能夠刺激機體產(chǎn)生（特異性）免疫應答，并能與免疫應答產(chǎn)物抗體和致敏淋巴細胞在體內(nèi)外結合，發(fā)生免疫效應（特異性反應）的物質(zhì)?？乖幕拘再|(zhì)具有異物性、大分子性和特異性。異物性是指進入機體組織內(nèi)的抗原物質(zhì)，必須與該機體組織細胞的成分不相同?？乖奶匦裕焊鶕?jù)抗原的概念可以看出抗原有兩種特性1、免疫原性（immunogenicity）即抗原刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應答的過程。該過程包括：抗原進入機體后，刺激淋巴細胞活化、增殖、分化，產(chǎn)生抗體或致敏的效應淋巴細胞。2、反應原性（r

介紹選擇流式抗體技巧2022/08/22

流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件：目標蛋白特異性，反應種屬以及應用實驗。流式抗體能夠在短時間內(nèi)檢測分析或分選大量細胞，在血液學、免疫學、腫瘤學、藥物學等領域中的應用越來越廣泛。其純度、批次穩(wěn)定性、特異性，以及流式結果的可重復性備受重視。流式抗體熒光標記的方式包括直接標記和間接標記兩種。在流式實驗過程中，盡量減少實驗工序和過程，以保證實驗的真實和準確性。因此在條件允許的范圍內(nèi)，建議盡量用直接標記的抗體進行實驗而不去做間接標記。隨著流式細胞術的日益發(fā)展，流式抗體及

移液器的使用方法及注意事項2022/08/15

介紹下可調(diào)式自動取液器的具體操作方法：用拇指和食指旋轉(zhuǎn)取液器上部的旋鈕，使數(shù)字窗口出現(xiàn)所需容量體積的數(shù)字，在取液器下端插上一個塑料吸頭，并旋緊以保證氣密，然后四指并攏握住取液器上部，用拇指按住柱塞桿頂端的按鈕，向下按到第一停點，將取液器的吸頭插入待取的溶液中，緩慢松開按鈕，吸上液體，并停留1～2秒鐘。移液器的使用方法：1.設定移液體積：從大量程調(diào)節(jié)至小量程為正常調(diào)節(jié)方法，逆時針旋轉(zhuǎn)刻度即可；從小量程調(diào)節(jié)至大量程時，應先調(diào)至超過設定體積刻度，再回調(diào)至設定體積，這樣可以保證移液器的精確度。2.裝配移

解析逆轉(zhuǎn)錄實驗中操作問題2022/08/01

逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）實驗作為是常見的分子生物學實驗之一，逆轉(zhuǎn)錄是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導下的DNA合成，逆轉(zhuǎn)錄實驗包括3大要素，分別是引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA模板。雖然看上去步驟簡單，但是逆轉(zhuǎn)錄實驗中實際操作時常出現(xiàn)問題如下：1.如何提高RT-PCR反應的靈敏度與特異性？①確定模板RNA完整性好，無DNA污染。②RNA模板中不應含有擴增反應抑制劑。③使用適量的模板RNA，模板量太多會降低特異性，太少會導致擴增不出條帶或條帶太弱。④若模板中有二級結構