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細(xì)胞衰老檢測具體方法2023/12/11: 細(xì)胞衰老是細(xì)胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退、逐漸趨向死亡的現(xiàn)象。衰老的細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞體積變大，呈扁平狀；細(xì)胞核變大，核膜內(nèi)陷，染色質(zhì)聚集、固縮、裂解；胞質(zhì)內(nèi)顆粒增加，有空泡形成；線粒體的數(shù)目及形狀發(fā)生改變；膜流動(dòng)性降低；溶酶體內(nèi)容物增多，導(dǎo)致溶酶體酶β-半乳糖苷酶活性升高。衰老細(xì)胞所具有的上述特征成為各種細(xì)胞衰老檢測手段的依據(jù)。其中，對(duì)衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶的檢測是有效檢測細(xì)胞衰老的經(jīng)典方法。X-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）是β-半乳糖苷酶的底物，X-Gal本身無色，經(jīng)

制作劃痕實(shí)驗(yàn)需要注意事項(xiàng)2023/12/04: 傷口愈合試驗(yàn)，也通常稱為“劃痕試驗(yàn)”，是一種廣泛建立的研究體外集體細(xì)胞遷移的技術(shù)。細(xì)胞劃痕（WoundHealing)是一種操作簡單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。其實(shí)驗(yàn)原理是，當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層細(xì)胞上人為一個(gè)空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。條件好的實(shí)驗(yàn)室可以使用活細(xì)胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)中角質(zhì)形成細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移活動(dòng)。結(jié)合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時(shí)間的速度。使用延時(shí)顯微鏡獲

免疫印跡(WB)實(shí)驗(yàn)步驟闡述2023/11/28: WB，蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)又稱免疫印跡(immunoblotting)，是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。實(shí)驗(yàn)步驟：一、蛋白質(zhì)樣品制備原始樣品可為細(xì)胞、組織、培養(yǎng)上清、免疫沉淀或親和純化的蛋白，以下為定性檢測目的蛋白時(shí)細(xì)胞樣

化學(xué)成分之化學(xué)分析方法詳情2023/11/20: 化學(xué)分析從大類分是指經(jīng)典的重量分析和容量分析。重量分析是指根據(jù)試樣經(jīng)過化學(xué)實(shí)驗(yàn)反應(yīng)后生成的產(chǎn)物的質(zhì)量來計(jì)算式樣的化學(xué)組成，多數(shù)是指質(zhì)量法。容量法是指根據(jù)試樣在反應(yīng)中所需要消耗的標(biāo)準(zhǔn)試液的體積。容量法即可以測定式樣的主要成分，也可以測定試樣的次要成分。1、重量分析指采用添加化學(xué)試劑是待測物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的沉淀物，并通過測定沉淀物的質(zhì)量來確定待測物的含量。2、容量分析滴定分析主要分為酸堿滴定分析、絡(luò)合滴定分析、氧化還原滴定分析、沉淀滴定分析。酸堿滴定分析是指以酸堿中和反應(yīng)為原理，利用酸性標(biāo)定物來滴定堿

實(shí)時(shí)定量PCR檢測結(jié)果出現(xiàn)異常解析2023/11/13: 實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)（real-timePCR）也叫qPCR（QuantitavePCR），是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過特定數(shù)學(xué)原理對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。下面對(duì)實(shí)時(shí)定量PCR檢測結(jié)果出現(xiàn)異常解析：1、無Ct值出現(xiàn)a)、檢測熒光信號(hào)的步驟有誤：一般染料法采用72℃延伸時(shí)采集，探針法則一般在退火結(jié)束時(shí)或延伸結(jié)束采集信號(hào)。b)、引物或探針降解：可通過PAGE電泳檢測其完整性。c)、模板量不足：對(duì)未知濃度的樣品應(yīng)從系列稀釋樣本的最高濃度做起。

影響微生物生長因素之溫度解析2023/11/06: 微生物與所處的環(huán)境之間具有復(fù)雜的相互影響和相互作用:一方面,各種各樣的環(huán)境因素對(duì)微生物的生長和繁殖有影響,另一方面,微生物生長繁殖也會(huì)影響和改變環(huán)境.研究環(huán)境因素與微生物之間的關(guān)系,可以通過控制環(huán)境條件來利用微生物有益的一面,同時(shí)防止它有害的一面。溫度是影響微生物生長的最重要因素之一。溫度對(duì)微生物的影響具體表現(xiàn)在：1、影響酶活性，溫度變化影響酶促反應(yīng)速率，最終影響細(xì)胞合成。2、影響細(xì)胞膜的流動(dòng)性，溫度高，流動(dòng)性大，有利于物質(zhì)的運(yùn)輸，溫度低，流動(dòng)性降低，不利于物質(zhì)運(yùn)輸，因此，溫度3、變化影響營養(yǎng)物

ELISA測定標(biāo)本需要考慮方面2023/10/30: 用于ELISA測定的標(biāo)本最為常用的是血清(漿)，有時(shí)因?yàn)樘囟ǖ臋z測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。對(duì)用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集，要注意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4～6點(diǎn)之間，會(huì)有一峰值出現(xiàn)：生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放，因此，在測定此類激素時(shí)，有必要在密切相連的時(shí)間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本，以其中

小鼠ELISA檢測試劑盒試驗(yàn)標(biāo)本收集事項(xiàng)2023/10/23: 做ELISA實(shí)驗(yàn)，在處理樣本前應(yīng)該先了解收集樣本的注意事項(xiàng)。一、標(biāo)本收集注意事項(xiàng)：1.收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。2.血清和血漿避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。3.標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。4.標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測，需按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融。5.可根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù))。6.收集標(biāo)本，盡量做到雙份的用量，避免一次實(shí)驗(yàn)失敗，重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)標(biāo)本缺失，從而耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。7.收集標(biāo)本時(shí)，應(yīng)該做好防護(hù)

淺談單克隆抗體技術(shù)了解下2023/10/16: 單克隆抗體(monoclonalantibody，Mab)技術(shù)是20世紀(jì)免疫學(xué)技術(shù)的一項(xiàng)里程碑式突破．該技術(shù)將免疫小鼠的B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合生成雜交瘤細(xì)胞，這種雜交瘤細(xì)胞核內(nèi)含有雙親細(xì)胞的染色體，繼承了親代細(xì)胞的特征．它既具有瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)中迅速增殖的能力．又具備免疫脾細(xì)胞合成和分泌特異性抗體的特性。隨后用適當(dāng)方法把雜交瘤細(xì)胞分離出來，進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)，使之大量繁殖，在培養(yǎng)液中形成單個(gè)雜交瘤細(xì)胞的克隆(也稱細(xì)胞系)。由于每個(gè)B淋巴細(xì)胞只有合成一種抗體的遺傳基因，所以單個(gè)雜交腐細(xì)胞的克

RT-PCR實(shí)驗(yàn)反應(yīng)體系靈敏度提升方法匯總2023/10/08: 增加反應(yīng)體系的靈敏度：1.分離高質(zhì)量RNA：成功的cDNA合成來自高質(zhì)量的RNA。高質(zhì)量的RNA至少應(yīng)保證全長并且不含逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制劑，如EDTA或SDS。RNA的質(zhì)量決定了你能夠轉(zhuǎn)錄到cDNA上的序列信息量的最大值。一般的RNA純化方法是使用異硫氰酸胍/酸性酚的一步法。為了防止痕量RNase的污染，從富含RNase的樣品(如胰臟)中分離到的RNA需要貯存在甲醛中以保存高質(zhì)量的RNA，對(duì)于長期貯存更是如此。從大鼠肝臟中提取的RNA，在水中貯存一個(gè)星期就基本降解了，而從大鼠脾臟中提取的RNA，在水

抗體特異性選擇技巧分析2023/10/03: 抗體是哺乳動(dòng)物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對(duì)抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識(shí)別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細(xì)胞殺傷等來清除病原體特異性（specificity）的本質(zhì)含義是“Connectedwithoneparticularthingonly"即只與唯yi的特定事物相關(guān)，具有專一性。在免疫學(xué)上我們會(huì)說“抗體具有特異性"，指的就是抗體具有專一性，某一特定的抗體只能與唯yi一種抗原結(jié)合。其實(shí)準(zhǔn)確來講是一類具有特定抗原表位的抗

實(shí)時(shí)熒光定量PCR與普通PCR的不同點(diǎn)敘述2023/09/25: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR與普通PCR二者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同，都能說明生物體外的特殊DNA復(fù)制的整個(gè)過程的擴(kuò)增效率和溶解溫度情況。但是二者也有以下不同之處。1、二者系統(tǒng)組成不同熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)。2、二者原理不同熒光定量PCR實(shí)時(shí)監(jiān)測與DNA結(jié)合的熒光染料激發(fā)的熒光，普通OCR通過檢測插入DNA中核算染料的量來測定PCR最終產(chǎn)物量。3、二者反應(yīng)要求不同熒光定量PCR對(duì)擴(kuò)增片段有較高的要求，一般為100-300bp，普通PCR可以擴(kuò)增長點(diǎn)的片段。4、二者應(yīng)

實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑穩(wěn)定性判斷遵循原則2023/09/22: 實(shí)驗(yàn)室通常使用各種化學(xué)試劑，使用過程中人們總是習(xí)慣于用生產(chǎn)日期來判斷試劑能否使用，但實(shí)際上很多廠家生產(chǎn)的化學(xué)試劑并不會(huì)標(biāo)注明確的保質(zhì)期，這讓使用者非常頭疼，實(shí)際上這種判斷方式通常是不準(zhǔn)確的?；瘜W(xué)試劑在貯存、運(yùn)輸和銷售過程中會(huì)受到溫度、光輻照、空氣和水份等外在因素的影響，容易發(fā)生潮解、霉素、變色、聚合、氧化、揮發(fā)、升華和分解等物理化學(xué)變化，使其失效而無法使用。因此要采用合理的包裝，適當(dāng)?shù)馁A存條件和運(yùn)輸方式，保證化學(xué)試劑在貯存、運(yùn)輸和銷售過程中不變質(zhì)。對(duì)一些對(duì)貯存和運(yùn)輸有特殊要求的應(yīng)按特殊要求辦理。

RNA純化過程中需注意的問題2023/09/11: RNAse的無處不在導(dǎo)致了RNA的脆弱敏感。要改善RNA提取的質(zhì)量，在RNA純化過程中要特別注意的10個(gè)問題介紹。1、在收獲組織及細(xì)胞死亡之后，應(yīng)立即滅活內(nèi)源的RNA酶，以防止RNA降解。以下3個(gè)方法均可有效使內(nèi)源RNA酶失活：1）用含離液（如胍鹽）的細(xì)胞裂解液收獲樣品，并立即勻漿。2）用液氮瞬間凍結(jié)樣品。值得特別注意的是：組織塊必須保證足夠小，在浸入液氮的瞬間就能凍結(jié)，以確保瞬間令RNA酶失活3）立即將樣品置于RNAlater?TissueCollection:RNAStabilization

細(xì)胞系主要應(yīng)用領(lǐng)域追蹤2023/09/08: 細(xì)胞系是指原代細(xì)胞經(jīng)過增殖、傳代之后衍生出來的細(xì)胞克隆群。他們具有相同基因型和表現(xiàn)型的細(xì)胞，它們在體外培養(yǎng)中具有一定的生長能力和增殖能力，可以進(jìn)行長期細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞系相比原代細(xì)胞更易于培養(yǎng)、保存和傳播，堅(jiān)持相同的細(xì)胞生物學(xué)特征，長期保存在實(shí)驗(yàn)室中，成為細(xì)胞和分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的重要工具。細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)首ci傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體，也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞?，F(xiàn)在細(xì)胞系廣泛的應(yīng)用于科學(xué)研究和藥物生產(chǎn)，用途包括：1、科學(xué)研究：藥物研究開發(fā)與基礎(chǔ)研究藥物研究與開發(fā)（1）新藥篩選：如化

蛋白質(zhì)純化膠體過濾法步驟2023/08/28: 不同大小的蛋白質(zhì)分子進(jìn)入膠體過濾管柱，可依其分子量差異分離；是一種廣泛應(yīng)用的partition色析法（Pharmacia操作手冊，GelFiltration）。儀器設(shè)備：色析管柱（PharmaciaCcolumn,1.6×100cm）、鐵架、鐵夾及水平儀；部分收集器（fractioncollector,需準(zhǔn)備干凈試管約100支）；濃縮用離心機(jī)（低速5,000rpm）；濃縮用離心管Centriprep-30（Amicon4322）請(qǐng)注意其使用方法藥品試劑：膠體SephacrylS-300（Phar

實(shí)驗(yàn)室推選：ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)各種問題解決方案2023/08/21: ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。在檢測時(shí)，受檢標(biāo)本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)異常剖析：一、白板異常：顯色步驟結(jié)束后，酶標(biāo)板所有孔均無顏色。陽性對(duì)照不顯色。1

資訊推送：抗體科學(xué)保存指引2023/08/16: 抗體保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果！如果抗體保存得當(dāng)，大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。請(qǐng)謹(jǐn)記無論何時(shí)請(qǐng)按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體.抗體濃度過低（1、多克隆抗體多克隆抗體在血清中于-20℃保存十年其活性損失不大。然而，一旦抗體被純化后，儲(chǔ)存在50%的甘油中于-20℃保存，即使沒有凍融，其活性的損失也可以觀察到，盡管其進(jìn)程仍然非常緩慢。即使沒有甘油，只要你b反fu凍融，抗體也可以存儲(chǔ)在-20℃幾年甚至幾十年。另一個(gè)重要的事情是，該抗體濃度應(yīng)高于1毫克/毫升，因?yàn)橄〉目贵w

污染細(xì)胞價(jià)值較大清除回收辦法2023/08/07: 培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。在細(xì)胞培養(yǎng)中如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，宜棄之；在尋找原因后徹di消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞，再進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。污染細(xì)胞價(jià)值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。1、細(xì)菌和真菌的清除抗生素對(duì)殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥。預(yù)防用藥比污染后再用藥。預(yù)防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期有效。2、支原體的清除(1)、用MRA處理用MRA（MycoplasmaRemoval

微生物篩選鑒別方法及培養(yǎng)注意事項(xiàng)2023/08/01: 一、微生物的篩選方法1、單菌落挑取法:利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種在固體培養(yǎng)基表面，根據(jù)目的微生物特定的菌落特征，利用單菌落挑取的方法挑選目的微生物2、選擇培養(yǎng)法:利用選擇培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行選擇培養(yǎng)，直接篩選目的微生物3、鑒定培養(yǎng)法:利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)te有的特征，然后篩選目的微生物4.根據(jù)功能可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。二、微生物的鑒別方法1、菌落特征鑒別法:根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進(jìn)行鑒別2、指示劑鑒別法:如在以尿素為

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