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國產(chǎn)新生牛血清和進(jìn)口新生牛血清存在什么差異?2021/07/12
新生牛血清。取自出生14h內(nèi)的小牛的血制成的血清。新生牛血清中營養(yǎng)豐富,蛋白含量和各種生長因子較高,價(jià)格較胎牛血清低得多,是目前動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中常用的血清。國產(chǎn)新生牛血清和進(jìn)口新生牛血清的差異:1.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不健全:國外不僅對(duì)胎牛、新生小牛等不同種類的牛血清有相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),而且通過質(zhì)量評(píng)價(jià),對(duì)同一種類的牛血清劃分出“標(biāo)準(zhǔn)”、“特級(jí)”等不同等級(jí),以滿足生產(chǎn)、研究等不同用途的需要。而國內(nèi)在這方面尚存在一定的不足。2.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善:國外要求對(duì)牛血清至少進(jìn)行9種外源病毒的檢測。而我國在2009年的《小牛
血清和血漿的區(qū)別及作用有哪些?2021/07/09
血清:血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出,放入試管中,不加抗凝劑,則凝血反應(yīng)被激活,血液迅速凝固,形成膠凍。凝血k收縮,其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清,也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中,纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊,所以血清中無纖維蛋白原,這一點(diǎn)是與血漿最大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中,血小板釋放出許多物質(zhì),各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化,如凝血酶原變成凝血酶,并隨血清存放時(shí)間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)的物質(zhì)則
移液器的的分類與使用方法2021/07/08
移液器又稱移液槍,是一種用于定量轉(zhuǎn)移液體的器具。在進(jìn)行分析測試方面的研究時(shí),一般采用移液器(pipette)移取少量或微量的液體。移液器的分類根據(jù)原理可分為氣體活塞式移液器(Air-displacementpipette)和外置活塞式移液器(Positive-displacementpipette)。氣體活塞式移液器主要用于標(biāo)準(zhǔn)移液,外置活塞式移液器主要用于處理易揮發(fā)、易腐蝕及粘稠等特殊液體。移液器的使用方法1.量程的調(diào)節(jié)在調(diào)節(jié)量程時(shí),如果要從大體積調(diào)為小體積,則按照正常的調(diào)節(jié)方法,逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)旋
ELISA實(shí)驗(yàn)技巧:酶標(biāo)板分類與性能判斷2021/07/07
酶標(biāo)板作為ELISA檢測實(shí)驗(yàn)中的輔材,起著舉足輕重的作用并直接影響最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果,酶標(biāo)板的好壞主要取決于其對(duì)蛋白吸附的靈敏度、板孔間蛋白吸附能力差異以及所采購酶標(biāo)板批次間的差異。因此,選擇一款蛋白吸附靈敏度高、對(duì)蛋白吸附能力孔間差異小、批次間差異小的酶標(biāo)板產(chǎn)品,是實(shí)驗(yàn)者獲得可靠、穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的保障。酶標(biāo)板分類:根據(jù)不同的分類標(biāo)準(zhǔn),酶標(biāo)板有著不同的分類。一、根據(jù)孔數(shù),可分為96孔、48孔等,由于酶標(biāo)板主要是配合酶標(biāo)儀用,目前市面上的酶標(biāo)儀最多為96孔,因此酶標(biāo)板最為常用的也是96孔。二、根據(jù)其底部的
胰蛋白酶有什么物化性質(zhì)?用途是什么?2021/07/06
胰蛋白酶為蛋白酶的一種,EC3.4.4.4,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。其英文名稱為Trypsin,化學(xué)式是C6H15O12P3。胰蛋白酶的物化性質(zhì):胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取,純化獲得的結(jié)晶,再制成的凍干制劑。呈白色或米黃色結(jié)晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯仿。分子量24000,pI10.5,最適pH值7.8~8.5左右。pH9.0不可逆失活。Ca2+對(duì)酶活性有穩(wěn)定作用;重金屬離子、有機(jī)磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制劑對(duì)其活性有強(qiáng)烈抑制。胰蛋白酶的用途:胰蛋
ELISA實(shí)驗(yàn)方法:ELISA中必要的三個(gè)試劑2021/07/05
在臨床檢驗(yàn)中一般采用商品試劑盒進(jìn)行測定,ELISA中有三個(gè)必要的試劑:免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);(5)酶聯(lián)物(結(jié)合物)及標(biāo)本的稀釋液;(6)洗滌液;(7)酶反應(yīng)終止液。免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個(gè)月以上。有些不完整的試盒,僅
乙酸的物化性質(zhì)是什么?如何制備?2021/07/01
乙酸,也叫醋酸、冰醋酸,英文名稱為AceticAcid,化學(xué)式CH?COOH,是一種有機(jī)一元酸,為食醋內(nèi)酸味及刺激性氣味的來源。乙酸的物理性質(zhì):在常溫下是一種有強(qiáng)烈刺激性酸味的無色液體。乙酸的熔點(diǎn)為16.6℃(289.6K),沸點(diǎn)117.9℃(391.2K),相對(duì)密度1.05,閃點(diǎn)39℃,爆炸極限4%~17%(體積)。純的乙酸在低于熔點(diǎn)時(shí)會(huì)凍結(jié)成冰狀晶體,所以無水乙酸又稱為冰醋酸。乙酸易溶于水和乙醇,其水溶液呈弱酸性。乙酸鹽也易溶于水,水溶液呈堿性。乙酸的化學(xué)性質(zhì):1.酸性:乙酸在水溶液中是一元
ELISA實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn):ELISA檢測做好這7步,得出結(jié)果2021/06/30
ELISA檢測系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中為廣泛的是靈敏的技術(shù)手段??墒窃谛吕鲜植僮鬟^程中總是會(huì)出現(xiàn)或大或小的問題,比如說花板,假陽性,全顯色,全部顯色,顯色比空白還低.....。聯(lián)碩生物為您總結(jié)7步ELISA檢測實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),做好這7步您就能得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1、包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別,所以保存抗原很重要,我做重組蛋白時(shí),師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。還有有的包被原可能不是蛋白,對(duì)于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事
什么是無水乙醇?它的理化性質(zhì)以及基本用途有哪些?2021/06/29
無水乙醇(Ethanolabsolute),是指純度較高的乙醇水溶液。一般情況下,一般稱濃度為99.5%的乙醇溶液為無水乙醇,無水乙醇是乙醇和水的混合物。無水乙醇的物理性質(zhì):外觀與性狀:無色液體,具有特殊香味熔點(diǎn)(℃):-114.1相對(duì)密度(水=1):0.79沸點(diǎn)(℃):78.3揮發(fā)性:易揮發(fā)性質(zhì):純度高達(dá)99.5%的乙醇(純度達(dá)99.99%的乙醇稱為絕對(duì)乙醇)溶解性:與水以任意比互溶,可混溶于醚、氯仿、甘油等多數(shù)有機(jī)溶劑無水乙醇的化學(xué)性質(zhì):1.消去反應(yīng)無水乙醇在濃硫酸條件下迅速加熱升至170℃
免疫熒光染色原理及步驟2021/06/28
免疫熒光又稱免疫熒光抗體。免疫熒光實(shí)驗(yàn)原理是將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上,直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡便、特異性高,非特異性熒光染色少,相對(duì)使用標(biāo)記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。下面詳細(xì)介紹免疫熒光染色步驟:1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上,10min后棄去,使標(biāo)本保持一定濕度。2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液,使其*覆蓋標(biāo)本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時(shí)間(參考:30min)。3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,
PBS緩沖液的作用和保存方法2021/06/25
PBS是磷酸緩沖鹽溶液(phosphatebuffersaline)的簡稱,一般作為溶劑,起溶解保護(hù)試劑的作用。它是生物化學(xué)研究中使用最為廣泛的一種緩沖液,主要成分為Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl,由于Na2HPO4和KH2PO4它們有二級(jí)解離,緩沖的pH值范圍很廣;而NaCl和KCl主要作用為增加鹽離子濃度。(注意:PBS不是磷酸緩沖液(phosphatebuffersolution,PB))PBS緩沖液的作用:不僅偽狂犬病毒要用它稀釋,一般的有活性的生物制劑都要用它來稀釋。原
移液器的分類,用途以及維護(hù)保養(yǎng)2021/06/22
移液器又稱移液槍,其外文名稱為pipette,是一種用于定量轉(zhuǎn)移液體的器具。在進(jìn)行分析測試方面的研究時(shí),一般采用移液器移取少量或微量的液體。移液器的分類:1.根據(jù)工作原理可分為空氣置換移液器與正向置換移液器;2.根據(jù)能夠同時(shí)安裝吸頭的數(shù)量可將其分為單通道移液器和多通道移液器;3.根據(jù)刻度是否可調(diào)節(jié)可將其分為固定移液器和可調(diào)節(jié)式移液器;4.根據(jù)調(diào)節(jié)刻度方式可將其分為手動(dòng)式移液器和電動(dòng)式移液器;5.根據(jù)特殊用途可將其分為全消毒移液器、大容量移液器、瓶口移液器、連續(xù)注射移液器等。移液器的用途:用于臨床
細(xì)胞爬片的特點(diǎn),操作注意事項(xiàng)及其保存方式2021/06/21
在醫(yī)學(xué)生物研究中,免疫熒光檢測等需用到細(xì)胞爬片。細(xì)胞爬片是什么?其名為爬片,外文名稱為RoundCoverslip,用于各類細(xì)胞培養(yǎng)板中,讓細(xì)胞在爬片上生長,后續(xù)實(shí)驗(yàn)可直接使用,避免了細(xì)胞從培養(yǎng)板轉(zhuǎn)移到載玻片上的損傷。細(xì)胞爬片采用玻璃片,經(jīng)滅菌,TC等處理后制作而成,可促進(jìn)細(xì)胞在玻片上貼壁生長與形態(tài)伸展,在后期免疫組化、免疫熒光、原位雜交等處理過中也不易脫片。細(xì)胞爬片特點(diǎn)以及規(guī)格:-無污染,免清洗,節(jié)省實(shí)驗(yàn)員的時(shí)間。-γ射線滅菌,無熱源、無DNA酶、無RNA酶。-化學(xué)穩(wěn)定性好,耐受實(shí)驗(yàn)室常用溶劑
ELISA實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn):降低ELISA背景的四點(diǎn)tips2021/06/16
在ELISA試劑盒操作中,我們都認(rèn)為ELISA實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景噪音會(huì)影響您對(duì)結(jié)果的判斷。如何降低ELISA的背景,下面有一些tips。一、洗滌很重要洗滌步驟看似很無聊,其實(shí)很重要,因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中,那么它會(huì)增加背景噪音。如有必要,可
如何把細(xì)胞鋪均勻?2021/06/09
做細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn),細(xì)胞鋪板大概是最常見的一個(gè)實(shí)驗(yàn)了。但是有很多人不是很得要領(lǐng),鋪得不是均勻:要么中間密周圍稀,要么周圍密中間禿頂。一般96孔板每孔是加100微升細(xì)胞懸液,從孔的左邊靠近底部加入。加完半邊板后,將未加的細(xì)胞懸液混一下,再繼續(xù)加剩余的半邊板子。都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣。注意把握力度(一般輕巧敲三下),太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)(逆時(shí)針效果不好),依次敲擊剩余三個(gè)邊,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱。6孔板、12孔板或24孔板,
重組抗體的產(chǎn)生及有哪些優(yōu)勢(shì)?2021/06/07
1890年馮˙貝林(vonBehring)發(fā)現(xiàn)了抗白喉毒素血清,發(fā)明了人工被動(dòng)免疫,并提出了抗原和抗體的概念,在后續(xù)漫長的抗體研究中,人類相繼發(fā)展出三代抗體制備技術(shù):①第一代抗體:以抗原免疫高等脊椎動(dòng)物制備的多克隆抗體;②第二代抗體:由雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的只針對(duì)某一種特定抗原決定簇的單克隆抗體;③第三代抗體:應(yīng)用分子克隆技術(shù)、基因突變技術(shù)改造某種抗體的基因編碼序列,生產(chǎn)出的性能更*的抗體,也稱為基因工程抗體或重組抗體。單抗的出現(xiàn)及其顯著的*性(特異性高、蛋白類天然產(chǎn)物等特性)使其在疾病的研究、診斷和
ELISA試劑盒分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種2021/06/04
血清是常用的標(biāo)本,血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,ELISA試劑盒分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種:1.內(nèi)源性物質(zhì)普遍認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。(1)類風(fēng)濕因子人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽性
菌種保存的幾種常用方法2021/06/02
微生物具有容易變異的特性,因此,在保藏過程中,必須使微生物的代謝處于zui不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài),才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素,所以,菌種保藏方法雖多,但都是根據(jù)這三個(gè)因素而設(shè)計(jì)的。保藏方法大致可分為以下幾種:1.傳代培養(yǎng)保藏法又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等(后者作保藏厭氧細(xì)菌用),培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。2.液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法,能夠適當(dāng)延長保藏時(shí)間,它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅
二甲基亞砜的基本用途有哪些?2021/05/31
二甲基亞砜(DMSO)是一種含硫有機(jī)化合物,分子式為C2H6OS,常溫下為無色無臭的透明液體,是一種吸濕性的可燃液體。具有高極性、高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性好、非質(zhì)子、與水混溶的特性,能溶于乙醇、丙醇、苯和l仿等大多數(shù)有機(jī)物,被譽(yù)為“萬/能溶劑”。在酸存在時(shí)加熱會(huì)產(chǎn)生少量甲基硫醇、甲醛、二甲基硫、甲磺酸等化合物。在高溫下有分解現(xiàn)象,遇氯能發(fā)生劇烈反應(yīng),在空氣中燃燒發(fā)出淡藍(lán)色火焰??勺饔袡C(jī)溶劑、反應(yīng)介質(zhì)和有機(jī)合成中間體。也可用作合成纖維的染色溶劑、去染劑、染色載體以及回收乙q、二氧化l的吸收劑。一、基本用途
淺談酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試驗(yàn)辦法2021/05/28
酶聯(lián)免疫測定是將抗原抗體反響的高度特異性和酶的催化作用相結(jié)合,開展建立一種非放射性符號(hào)免疫分析辦法。因?yàn)镋LISA具有靈敏度高、特異性強(qiáng),酶免疫試劑的性質(zhì)比較穩(wěn)定,操作辦法簡潔快速、無放射性污染以及應(yīng)用范圍廣等很多優(yōu)點(diǎn),在醫(yī)學(xué)根底理論研究,病毒學(xué)和生物化學(xué)查驗(yàn)等工作中應(yīng)用十分廣泛。該法需將純化的抗原包被在固相載體,與必定稀釋度的待側(cè)血清反響,然后與酶符號(hào)的第二抗體(抗人IgG,IgA,IgM或抗人IgG.A.M的混合物)反響,酶可催化色原反響,在酶標(biāo)測定儀必定波長下進(jìn)行比色,測定吸光度。ELIS
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