注意： 應(yīng)使用從牛神經(jīng)組織（BD Biosciences目錄＃354006或同等物）制備的高質(zhì)量ECGS來(lái)繁殖CRL-1730。啟動(dòng)具有高*ECGS濃度的細(xì)胞。在HUV-EC-C細(xì)胞的培養(yǎng)物中可常規(guī)觀察到中度至重度碎片和許多漂浮細(xì)胞。通過溫和離心保留漂浮細(xì)胞并添加回粘附群體。

CRL-1730是一種生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞系，其粗略估計(jì)的倍增時(shí)間為5至6天。培養(yǎng)物應(yīng)每48小時(shí)*換液。當(dāng)密度小于50％匯合時(shí)，細(xì)胞應(yīng)該只允許72小時(shí)沒有流體變化。執(zhí)行完整的流體更改而不是添加介質(zhì)。

這種細(xì)胞系產(chǎn)生大量漂浮物和碎片，尤其是在較高密度下。細(xì)胞在*填充至100％匯合之前分離。建議在80％至90％匯合時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)，以避免過多的漂浮物。漂浮的細(xì)胞是可行的，如果發(fā)音，它們應(yīng)該被旋轉(zhuǎn)并重新植入生長(zhǎng)的培養(yǎng)物中。

1. 移除并丟棄培養(yǎng)基。
2. 用0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液短暫沖洗細(xì)胞層，以除去含有胰蛋白酶抑制劑的所有痕量血清。
3. 向燒瓶中加入2.0至3.0mL胰蛋白酶-EDTA溶液，并在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞直至細(xì)胞層分散（通常在5至15分鐘內(nèi)）。
   注意：為了避免結(jié)塊，在等待細(xì)胞分離時(shí)，不要通過敲擊或搖動(dòng)燒瓶來(lái)攪動(dòng)細(xì)胞。難以分離的細(xì)胞可置于37℃以促進(jìn)分散。
4. 加入6.0至8.0mL*生長(zhǎng)培養(yǎng)基，輕輕吹打吸出細(xì)胞。
5. 將適當(dāng)?shù)确莸募?xì)胞懸浮液加入新培養(yǎng)容器中。
6. 在37°C孵育培養(yǎng)物。

亞培養(yǎng)比：建議傳代培養(yǎng)比為1：2至1：3

中等更新：每周兩到三次

接種密度：  8.0×10 3至3.0×10 4個(gè)活細(xì)胞/ cm 2

冷凍培養(yǎng)基：補(bǔ)充有5％（v / v）DMSO的*生長(zhǎng)培養(yǎng)基

儲(chǔ)存溫度：液氮?dú)庀?/p>

氣氛：空氣，95％; 二氧化碳（CO 2），5％

溫度： 37°C