植物花色苷含量試劑盒說明書

可見分光光度法

正式測定前取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

花色苷是一類易溶于極性溶劑的天然色素，屬黃酮類化合物?；ㄉ諒V泛存在于植物的根、莖、葉、花和果實(shí)中，使其呈現(xiàn)由紅到紫等不同顏色，是植物主要的呈色物質(zhì)。

測定原理：

采用pH示差法測定花色苷含量，當(dāng)pH為1.0時(shí)花色苷在530nm處有大吸收峰,而當(dāng)pH為 4.5 時(shí),花色苷轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色查爾酮形式,在 530處無吸收峰, 利用此特性分別測定在不同pH下的 530nm和700nm 處的吸光度值。pH示差法減少了溶液pH和溶劑差異的影響，排除了其他非花色苷類物質(zhì)對檢測結(jié)果的干擾。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 50 mL× 1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 50 mL× 1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 50 mL × 1 瓶，4℃保存；

花色苷的提?。?/span>

按照烘干樣品質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 烘干樣品，加入1mL提取液），充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中，提取液定容至1mL，蓋緊后4℃浸提 24 h，

8000 g，25℃離心10min，取上清液待測。

測定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上；試劑一和試劑二預(yù)熱 10min 以上。

2、取100µL上清液和900µL試劑一（相當(dāng)于稀釋10倍），靜置15min，分別測定530nm和700nm 處的吸光值，分別記為A1和A2。

3、取100µL上清液和900µL試劑二（相當(dāng)于稀釋10倍），靜置15min，分別測定 530nm和700nm 處的吸光值，分別記為A3和A4。

4、計(jì)算△A=（A1-A2）-(A3-A4)

注意：如果A1大于1，可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)，保證總體積1mL不變，如50 µL上清液和950µL試劑一（相當(dāng)于稀釋20倍）；如果A1小于0.1，可以適當(dāng)縮小稀釋倍數(shù)，保證總體積不變，如200 µL上清液和800 µL試劑一（相當(dāng)于稀釋5倍），使A1保持在0.1~1范圍內(nèi)，可提高檢測靈敏度；同樣調(diào)整上清液和試劑二體積比例；計(jì)算時(shí)以實(shí)際稀釋倍數(shù)代入下述公式中。

花色苷含量計(jì)算：

花色苷含量（µg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×10⁶]÷W=16.7×ΔA× F÷W

V：提取液體積，1×10^-3 L，ε：花色苷的摩爾消光系數(shù)，2.69×10⁴ L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；M：花色苷的相對分子質(zhì)量：449.2g/mol；F：稀釋倍數(shù)；10⁶：1g=10⁶µg；W：樣本干重：g。

注意：低檢測限為 0.2μg/g 干重