一、運輸和保存

1、發(fā)送T25培養(yǎng)的細胞系方式：順豐，灌滿液發(fā)貨

（1）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

（2）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現污染，請及時拍照與我們聯系。

2、細胞系接收后的處理：

（1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

（2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

（3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基。

（4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。

（5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。

二、細胞培養(yǎng)步驟

1、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

（1） 準備基礎培養(yǎng)基100%；北美胎牛血清5%，添加劑1%；雙抗1%。

（2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

2、 細胞處理：

（1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

（2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行1:2傳代培養(yǎng)（盡量用T25培養(yǎng)瓶）。

3、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

（1）選用原代細胞生長狀態(tài)好（90－95％），生長數量大于5×105進行傳代。

（2）吸除細胞培養(yǎng)液。用含雙抗的1×PBS（pH7.4）清洗細胞培養(yǎng)瓶2次。

（3）3ml細胞消化液加入細胞培養(yǎng)瓶，輕輕搖動，使細胞消化液覆細胞培養(yǎng)瓶底。

（4）細胞培養(yǎng)瓶置于5%CO2、95%空氣、37oC培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)2分鐘后，在顯微鏡下觀察細胞系的消化狀態(tài)。

請記住：如貼壁細胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后，用手指輕輕拍打細胞培養(yǎng)側部至大部分貼壁細胞懸浮，加入3ml血清終止液，終止細胞消化。每種細胞的消化時間是有差異的。