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2015
11-11

X-Gal和IPTG-X-gal 平板制作
一、簡(jiǎn)介X-Gal在β-半乳糖苷酶的催化下水解后呈藍(lán)色，因此常用于轉(zhuǎn)基因篩選試驗(yàn)中，如藍(lán)白斑篩選或β-半乳糖苷酶的原位染色檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。藍(lán)白斑試驗(yàn)中主要根據(jù)菌落呈現(xiàn)的顏色即可簡(jiǎn)單的挑選出哪些是轉(zhuǎn)化子。分子式為C14H15BrClNO6，分子量為408.63，CASNumber7240-90-6。X–Gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物，水解后呈藍(lán)色?；谶@個(gè)特點(diǎn)，pUC系列載體DNA(或其他帶有l(wèi)acZ基因載體DNA)以lacZ缺失細(xì)胞為宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)、或用M13噬菌體載體
2015
11-09

細(xì)菌組成可能受到出生時(shí)刻的影響
一項(xiàng)研究表明，已被證明能夠影響消化和免疫健康的個(gè)人*的細(xì)菌組成可能受到出生時(shí)刻的影響。ELISA試劑盒科學(xué)家對(duì)來(lái)自9位母親和10位出生后不足一天的新生兒進(jìn)行了細(xì)菌取樣。這組科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，陰道分娩的嬰兒獲得的細(xì)菌群落類(lèi)似于他們的母親的陰道細(xì)菌組成，而通過(guò)剖宮產(chǎn)出生的嬰兒攜帶了常見(jiàn)的皮膚細(xì)菌，這些細(xì)菌并不比來(lái)自其他剖宮產(chǎn)嬰兒的細(xì)菌更加類(lèi)似于他們的母親的細(xì)菌組成。通常與乳汁消化、細(xì)菌病或陰道感染有關(guān)的細(xì)菌占了來(lái)自陰道分娩的兒童的皮膚和嘴的樣本的大部分。剖宮產(chǎn)嬰兒的細(xì)菌群落大部分是由與食物中毒、白喉和痤瘡
2015
11-06

免疫組化ABC法實(shí)驗(yàn)步驟
1、4%多聚甲醛常規(guī)灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃），蠟塊制作，切片，貼片。0.01MPBS清洗5min×3次;抗體2、脫蠟、水化：用二甲苯兩次10min，用梯度乙醇由低濃度到高濃度進(jìn)行水化;3、加入0.3%的過(guò)氧化氫甲醇溶液（甲醇80ml+0.01MPBS100ml+30%過(guò)氧化氫）30min，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的影響，0.01MPBS清洗5min×3次;4、加入0.3%TritonX-100（0.3mlTritonX-100+0.01MPBS100ml）30min，以增加細(xì)胞的通
2015
11-04

ELISA的應(yīng)用與操作注意事項(xiàng)
ELISA的應(yīng)用ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲(chóng)病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗體，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的
2015
11-02

實(shí)驗(yàn)前了解血清怎么儲(chǔ)存與操作
血清是ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)前的必要標(biāo)本之一，所以我們?cè)谧鰧?shí)驗(yàn)前需要對(duì)血清有個(gè)充分的了解，我們需要知道血清是怎么儲(chǔ)存的，血清是怎么操作的。1.血清必須貯存于–20～-70℃,若存放于4℃,請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。如果一次無(wú)法用完一瓶,可將40～45ml分裝于無(wú)菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10%,必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。2.一般提供之血清為無(wú)菌,不需再無(wú)菌過(guò)濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾,勿直接過(guò)濾血清。3.瓶裝（500ml）血
2015
10-30

細(xì)胞因子溶解操作方法
peprotech細(xì)胞因子溶解操作方法PeproTech細(xì)胞因子中不含載體蛋白（CarrierProtein）或其他添加劑（如BSA、HAS或蔗糖等），并且通常以zui少量的鹽來(lái)進(jìn)行凍干處理，因此微量的細(xì)胞因子在凍干過(guò)程中會(huì)沉積于管內(nèi)，形成很薄或不可見(jiàn)的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后，務(wù)必在開(kāi)蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底（此時(shí)能否見(jiàn)到白色沉淀均屬正?，F(xiàn)象）。1．離心：高速離心(10,000rpm)20-30秒，或低速離心(2,000rpm)5分鐘。2．溶解（Reconstit
2015
10-28

原代培養(yǎng)物及傳代培養(yǎng)物之間的區(qū)別
原代培養(yǎng)物及傳代培養(yǎng)物之間的區(qū)別細(xì)胞系與細(xì)胞株的比對(duì)條件。一般實(shí)驗(yàn)者都知道傳代培養(yǎng)的細(xì)胞是細(xì)胞系；細(xì)胞株就是從細(xì)胞系篩選出來(lái)的有特殊屬性的比如無(wú)線增值的。細(xì)胞株(CellStrain)：通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細(xì)胞株(CellStrain)，也就是說(shuō)，細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系(cellline)，由原先存在于原代培養(yǎng)
2015
10-26

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定標(biāo)本分解
（1）標(biāo)本溶血由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測(cè)定結(jié)果。為克服上述干擾作用，標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。（2）標(biāo)本受細(xì)菌污染因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。（3）標(biāo)本保存不當(dāng)在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、甚至
2015
10-23

小鼠胚胎干細(xì)胞融入視網(wǎng)膜
在皮氏培養(yǎng)皿中培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞所產(chǎn)生的感光細(xì)胞能與患有視網(wǎng)膜疾病的成年小鼠的視網(wǎng)膜相融合。這意味著，通過(guò)細(xì)胞療法來(lái)矯正因視網(wǎng)膜疾病或損傷造成的失明的研究又邁進(jìn)了一步。在與年齡相關(guān)的黃斑退化和各種遺傳視網(wǎng)膜疾病中，視網(wǎng)膜的功能會(huì)因?yàn)橐环N被稱為“感光體”的感光細(xì)胞受損而喪失。先前研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于患有類(lèi)似疾病的失明小鼠來(lái)說(shuō)，可以通過(guò)從視力正常的年輕小鼠的視網(wǎng)膜中分離出未成熟的感光體并移植到失明小鼠視網(wǎng)膜中，從而改善其視力。RobinAli等人從胚胎干細(xì)胞中獲取并培養(yǎng)出未成熟的類(lèi)似視桿細(xì)胞并進(jìn)行了研究。
2015
10-21

細(xì)胞傳代的方法
多數(shù)細(xì)胞系和原代細(xì)胞都會(huì)以一種單層的形式生長(zhǎng)（單層細(xì)胞）或者覆蓋在玻璃或經(jīng)處理的塑料物體表面。為了保持細(xì)胞的健康與活躍增殖，通常需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行有規(guī)律的傳代。zui常見(jiàn)的傳代方法是使用蛋白酶如胰酶或膠原酶破壞細(xì)胞間以及細(xì)胞與培養(yǎng)介質(zhì)間的連接。當(dāng)細(xì)胞被解離成單細(xì)胞懸液時(shí)，再將它們稀釋并分發(fā)至新的培養(yǎng)容器中。在那里，細(xì)胞可以重新貼壁生長(zhǎng)和分裂，然后經(jīng)過(guò)一段時(shí)間培養(yǎng)，細(xì)胞又再一次長(zhǎng)滿（接近匯合）。此時(shí)，細(xì)胞又需要進(jìn)行傳代或用于下游實(shí)驗(yàn)。注意：以下指南描述了典型單層細(xì)胞的常規(guī)傳代與維持的基本原則。為了得到
2015
10-19

血小板分析的應(yīng)用范圍及臨床意義
血栓性疾病、出血性疾病、心血管疾病以及自身免疫性血小板減少癥等疾病的病理生理過(guò)程與血小板相關(guān)。血小板功能檢測(cè)包括黏附、聚集和活化功能試驗(yàn)。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)全血中血小板表面相關(guān)標(biāo)志物是一種新技術(shù)，它拓寬了血小板相關(guān)疾病的診斷與功能研究方法，豐富了血小板功能評(píng)估指標(biāo)。一、流式細(xì)胞儀血小板分析應(yīng)用范圍1.通過(guò)分析信號(hào)傳遞、細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)、顆粒釋放、糖蛋白構(gòu)形、膜磷脂、與抗凝因子的結(jié)合和微粒形成，分析血小板活化，血小板對(duì)刺激物的反應(yīng)性。2.通過(guò)分析受激后表面結(jié)合蛋白觸發(fā)凝血鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和表面糖蛋白缺陷檢測(cè)，
2015
10-16

常用的熒光色素
熒光色素許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。ELISA試劑盒常用的熒光色素有：1．異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑。分子量為389.4，zui大吸收光波長(zhǎng)為490495nm，zui大發(fā)射光波長(zhǎng)520530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光，結(jié)構(gòu)式如下：有兩種同分異結(jié)構(gòu)，其中異構(gòu)體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性、與蛋白質(zhì)結(jié)合能力等方
2015
10-14

細(xì)胞傷口愈合實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)步驟1.細(xì)胞在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。2.細(xì)胞以一定密度接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，生長(zhǎng)24小時(shí)后，單層細(xì)胞融合度應(yīng)達(dá)到70-80%。3.不要更換培養(yǎng)基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養(yǎng)細(xì)胞間劃痕，劃痕橫穿過(guò)孔，槍頭盡量與板孔的底部垂直，不要傾斜。這樣產(chǎn)生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑相等。Gap的距離可以選用不同型號(hào)的槍頭調(diào)節(jié)。劃痕在同一方向成一條直線。4.在垂直與*條劃痕的方向制作另一條劃痕，每孔劃痕成十字交叉型。5.劃痕后，用培養(yǎng)基輕輕的清洗板孔2次，以去除脫落細(xì)胞。
2015
10-12

RNA干擾實(shí)驗(yàn)技術(shù)
通過(guò)生化和遺傳學(xué)研究表明，RNA干擾包括起始階段和效應(yīng)階段(inititationａndeffectorsteps)。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長(zhǎng)的小分子干擾RNA片段(smallinterferingRNAs,siRNAs)。證據(jù)表明；一個(gè)稱為Dicer的酶是RNaseIII家族中特異識(shí)別雙鏈RNA的一員，它能以一種ATP依賴方式逐步切割由外源導(dǎo)入或者由轉(zhuǎn)基因，病毒感染等各種方式引入的雙鏈RNA，切割將RNA降解為19-21bp的雙鏈RNAs(siRNAs)，每個(gè)片
2015
10-09

ELISA試劑盒應(yīng)用定性?shī)A心免疫檢測(cè)技術(shù)
ELISA試劑盒應(yīng)用定性?shī)A心免疫檢測(cè)技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國(guó)型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3。ELISA檢測(cè)試劑盒將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEVIgM抗體，這些抗體就會(huì)與HEV的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過(guò)氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會(huì)與*次孵育結(jié)合上的HEVIgM抗體相結(jié)合，ELISA試劑
2015
10-07

ELISA各個(gè)操作步驟的注意要點(diǎn)
按試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。ELISA試劑盒的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說(shuō)明書(shū)中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過(guò)將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從200
2015
09-30

采血管中添加物的影響
研究經(jīng)驗(yàn)指出酶聯(lián)免疫試劑盒可以用來(lái)檢測(cè)血清樣本，看有還是沒(méi)有某個(gè)抗原或抗體，也可以看該抗原或抗體是多還是少，可以比較不同血清樣本之間該抗原/抗體的含量高低。如果該抗原是一個(gè)病原，或該抗體是一個(gè)對(duì)某病原具有特異性的抗體，則酶聯(lián)免疫試劑盒該抗原或該抗體的結(jié)果，可以用來(lái)幫助判斷，提供血清的個(gè)體，是否感染或曾經(jīng)感染過(guò)這個(gè)病原。采血管中添加物等影響。（1）標(biāo)本溶血由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記的酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)定中，會(huì)
2015
09-28

組織切片中脫水和透明
脫水和透明所謂脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來(lái)，以利于有機(jī)溶劑的滲入，這一過(guò)程稱為脫水。脫水是否*，直接關(guān)系到組織是否能充分透明，而脫水過(guò)度（原因是組織在純酒精內(nèi)時(shí)間過(guò)久，發(fā)生組織質(zhì)地發(fā)生變化）容易造成組織發(fā)脆。造成組織發(fā)脆的原因還有加溫（溫度超過(guò)35℃）、脫水劑內(nèi)加有丙酮、浸蠟用的石蠟中二甲苯過(guò)多等等。ELISA試劑盒一般我們總認(rèn)為組織發(fā)脆跟高濃度酒精有關(guān)，而忽視了與低濃度的酒精關(guān)系，其實(shí)低濃度的酒精具有強(qiáng)大的穿透力，比純酒精更容易滲透到組織塊內(nèi)部使之脫水，組織如果在低濃度酒精里充分脫
2015
09-25

液氮罐的使用維護(hù)與注意事項(xiàng)
一、容器的使用維護(hù)1、液氮罐只用于盛裝液氮，不允許盛裝其他液體；ELISA試劑盒2、使用前檢查容器內(nèi)部是否清潔干燥；3、充液氮前要用少量液氮預(yù)冷；4、用于長(zhǎng)期貯存時(shí)，則需要定期補(bǔ)充液氮，補(bǔ)充時(shí)機(jī)一般應(yīng)在液氮剩余量為總?cè)萘康娜种粸橐耍?、嚴(yán)禁在容器蓋上放置物體和密封頸口；6、放進(jìn)或取出冷凍物品時(shí)，要盡量使罐口打開(kāi)時(shí)間短，以減少液氮消耗，也不要把提筒*提出來(lái)；7、嚴(yán)防沖擊和碰撞；8、嚴(yán)禁用硬物清除頸管內(nèi)的凍霜，以免損傷頸管。二、運(yùn)輸1、液氮罐運(yùn)輸時(shí)只能立放，不能躺放，為了防止翻倒，須用皮帶或其它
2015
09-23

染色體易位與癌癥之間的機(jī)制
研究人員發(fā)現(xiàn)了染色體易位與癌癥之間的相互關(guān)系的一個(gè)重要機(jī)制，為進(jìn)一步研究腫瘤中染色體易位提供了重要依據(jù)。ELISA試劑盒研究人員開(kāi)啟內(nèi)部和相互染色體易位后，雄激素受體（AR）發(fā)生內(nèi)源性結(jié)合，這時(shí)由于AR和遺傳毒性應(yīng)激的誘導(dǎo)，催化了兩種類(lèi)型的酶的活性，從而促使易位位點(diǎn)發(fā)生位點(diǎn)特異性DNA雙鏈斷裂（DSBs），這兩種酶分別是活化誘導(dǎo)胞嘧啶核苷脫氨酶，和LINE-1重復(fù)編碼ORF2酶切反應(yīng)。這些研究數(shù)據(jù)表明由配基核受體和遺傳毒性應(yīng)激啟動(dòng)的兩條平行途徑的交接點(diǎn)，是非隨機(jī)腫瘤染色體易位，這也許在許多腫瘤和

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