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2016
02-26

標(biāo)本因素對ELISA測定的影響
ELISA即酶聯(lián)免疫吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗體）結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo)抗原（或抗體），而且此酶標(biāo)抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③測定時將受檢標(biāo)本（抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進(jìn)行反應(yīng)，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分開，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的抗體或抗原量成一定比例；再加入酶反應(yīng)底物后
2016
02-24

ELISA檢測的樣本
ELISA試劑盒通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的*步。1、血清血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上，使血清析出。（將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃1000×g離心20分鐘，仔細(xì)收集上清。
2016
02-22

基因組DNA轉(zhuǎn)染
本實驗要加入PSV2-neo、DNA與外源DNA共轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞，這樣可使受體細(xì)胞獲得新霉素(neo)基因的抗藥性，這樣即使癌基因沒有出現(xiàn)明顯的“轉(zhuǎn)化灶”，也可測出轉(zhuǎn)入的外源性基因的抗neo的標(biāo)記。而且還可利用被neo基因?qū)氲氖荏w細(xì)胞通過G418選擇培養(yǎng)篩選轉(zhuǎn)化的細(xì)胞建立細(xì)胞株。若以獲取“轉(zhuǎn)化灶”為目的，可不加入PSV2-neoDNA只需將從癌細(xì)胞中提取的基因組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞即可，其方法如下：1.基因組DNA轉(zhuǎn)染：(1)配制磷酸轉(zhuǎn)染液NaCl8.0gHepes5.0g用時現(xiàn)配，pH很重要一定
2016
02-19

制備單抗的方法
獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞系后，即可根據(jù)需要大量單抗，以用于不同目的。一、單抗的大規(guī)模制備目前大量制備單抗的方法主要有兩大系統(tǒng)，一是動物體內(nèi)法，這是國內(nèi)外實驗室所廣泛采用；另一是體外培養(yǎng)法。1、動物體內(nèi)單抗的方法迄今為止，通常情況下均采用動物體內(nèi)單抗的方法，鑒于絕大多數(shù)動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細(xì)胞與同品系的脾細(xì)胞融合而得，因此使用的動物當(dāng)然BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細(xì)胞接種于小鼠腹腔內(nèi)，在小鼠腹腔內(nèi)生長雜交瘤，并產(chǎn)生腹水，因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高?？梢娫摲ú僮骱啽?
2016
02-17

蛋白質(zhì)沉淀法
其他沉淀法一．等電點(diǎn)沉淀法兩性電解質(zhì)分子上的凈電荷為零時溶解度zui低，不同的兩性電解質(zhì)具有不同的等電點(diǎn)，以此為基礎(chǔ)可進(jìn)行分離。如工業(yè)上胰島素時，在粗提液中先調(diào)PH8.0去除堿性蛋白質(zhì)，再調(diào)PH3.0去除酸性蛋白質(zhì)。ELISA試劑盒利用等電點(diǎn)除雜蛋白時必須了解制備物對酸堿的穩(wěn)定性，不然盲目使用十分危險。不少蛋白質(zhì)與金屬離子結(jié)合后，等電點(diǎn)會發(fā)生偏移，故溶液中含有金屬離子時，必須注意調(diào)整PH值。等電點(diǎn)法常與鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法或其他沉淀方法聯(lián)合使用，以提高其沉淀能力。二．生成鹽復(fù)合物沉淀法1．金屬
2016
02-15

腫瘤免疫作用
機(jī)體對腫瘤的免疫分為先天性免疫及適應(yīng)性（后天性）免疫。先天性免疫是機(jī)體固有的、經(jīng)遺傳獲得的免疫力，適應(yīng)性免疫是機(jī)體受到抗原刺激后產(chǎn)生的免疫力。先天性免疫由多種細(xì)胞及體液因子組成，其中自然殺傷細(xì)胞（naturekilercel，NKcel）在腫瘤免疫中發(fā)揮著重要作用。后天性免疫有T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞組成，T淋巴細(xì)胞中的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞（cytotoxicTlymphocyte，CTL）在腫瘤免疫中發(fā)揮著核心作用。樹突狀細(xì)胞（dendriticcel，DC）是專職的抗原遞呈細(xì)胞，既參與先天性免疫，
2016
02-03

肝癌干細(xì)胞的特性
從肝癌干細(xì)胞的zui初報道以來，針對其的研究已經(jīng)成為研究者熱點(diǎn)關(guān)注的領(lǐng)域，相關(guān)的報道也逐漸增多。1.高致瘤性事實上，致瘤性是zui令人關(guān)心的問題，通常實驗采取將腫瘤細(xì)胞移植到免疫缺陷小鼠體內(nèi)來驗證不同細(xì)胞群的致瘤性。一般情況下成瘤實驗需要大于10的腫瘤細(xì)胞才能致瘤，而極少量富集的腫瘤干細(xì)胞就能在小鼠體內(nèi)成瘤。因此，腫瘤干細(xì)胞有時亦可稱為“腫瘤起始細(xì)胞（tumorinitiatingcels）”。值得注意的是，目前各個研究小組的對成瘤所需細(xì)胞數(shù)的報道并非*一致，Huh7和PLC/PRF/5的SP細(xì)
2016
02-01

病毒的致病作用
病毒侵入機(jī)體后，必須進(jìn)入易感細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖。病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖，可使細(xì)胞出現(xiàn)損傷、死亡、轉(zhuǎn)化等反應(yīng)，同時細(xì)胞也產(chǎn)生干擾素等抑制病毒復(fù)制。病毒在與機(jī)體發(fā)生相互作用的過程中，能改變或損傷宿主細(xì)胞并由此引起疾病，稱為病毒感染。病毒的致病作用（一）病毒對細(xì)胞的作用1.病毒對宿主細(xì)胞代謝的抑制作用某些病毒主要指DNA病毒感染宿主細(xì)胞后，通過與宿主細(xì)胞競爭RNA聚合酶和細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，抑制編碼宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)的基因轉(zhuǎn)錄，但目前對抑制宿主基因細(xì)胞轉(zhuǎn)錄的機(jī)制尚不十分清楚。許多病毒包括DNA病毒和RNA病毒均可抑制宿主
2016
01-29

MRD的檢測方法
微小殘留病(minimalresidualdisease，MRD)一般是指白血病患者在經(jīng)過治療后體內(nèi)殘存白血病細(xì)胞的狀態(tài)，被認(rèn)為是白血病復(fù)發(fā)及影響預(yù)后的主要原因。廣義而言，此含義還可包括其他惡性腫瘤。MRD被認(rèn)為是在傳統(tǒng)檢測方法所能檢測到的腫瘤細(xì)胞水平以下的長期存在的腫瘤細(xì)胞，這些腫瘤細(xì)胞一旦增殖到一定程度能引起復(fù)發(fā)。因此，有效利用MRD檢測能夠很好地指導(dǎo)治療以增加*，提高療效，特別是對HSCT的療效評估方面也有重要的意義。MRD的檢測方法MRD的檢測方法很多，主要有細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、FI
2016
01-27

細(xì)菌的形態(tài)和大小
細(xì)菌細(xì)菌是自然界中分布zui廣、數(shù)量zui大的一類微生物．也是環(huán)境工程中所涉及的zui重要的原核微生物。1．細(xì)菌的形態(tài)和大小在正常生長條件下，細(xì)菌主要有四種形態(tài)：球狀、桿狀、螺旋狀、絲狀。據(jù)此，細(xì)菌可分別命名為球菌、桿菌、螺旋菌、絲狀菌。(1)球菌按分裂后細(xì)胞的排列方式不同，球菌可分為單球菌、雙球菌、四聯(lián)球菌、八疊球菌、鏈球菌、葡萄球菌。(2)桿萄桿菌有單桿菌(分長桿菌和短桿菌)、雙桿菌和鏈桿菌。桿菌的兩端或一端有平截狀、圓弧狀、分枝狀、膨大呈棒槌狀。(3)螺旋菌螺旋菌呈螺旋卷曲狀。根據(jù)其彎曲程
2016
01-25

微生物的呼吸作用
微生物的呼吸作用實質(zhì)上就是細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的分解、氧化和釋放能量的過程，是新陳代謝的異化作用。呼吸作用中物質(zhì)的氧化主要是以脫氫方式(同時失去電子)實現(xiàn)的，即在化學(xué)反應(yīng)中一種物質(zhì)脫氫同時失去電子被氧化，另一種物質(zhì)得到氫和電子被還原。在此過程中釋放的能量主要被貯存在ATP(三磷酸腺苷)中，滿足各需能代謝反應(yīng)的需要，未被貯存的能量則以熱量形式散發(fā)掉。根據(jù)生物氧化中zui終氫受體(或zui終電子受體)性質(zhì)的不同，可以把呼吸類型分為發(fā)酵、有氧呼吸和無氧呼吸三類。根據(jù)微生物與氧氣的關(guān)系，微生物可分為好氧微生物、厭
2016
01-22

微生物生長的測定
微生物生長是細(xì)胞物質(zhì)有規(guī)律地．不可逆增加，導(dǎo)致細(xì)胞體積擴(kuò)大的生物學(xué)過程，這是個體生長的定義。繁殖是微生物生長到一定階段，由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)的復(fù)制與重建并通過特定方式產(chǎn)生新的生命個體，即引起生命個體數(shù)量增加的生物學(xué)過程。微生物的個體生長特點(diǎn)是時間裉短，很快就進(jìn)入繁殖階段，生長與繁殖難以分開。因此，常常以群體生長作為細(xì)菌生長的指標(biāo)，除有特定的目的以外．在微生物的研究和應(yīng)用中，只有群體的生長才有意義，而群體生長常常表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目或物質(zhì)的增加。對細(xì)胞物質(zhì)的增加可以用生物量來表示。對于單細(xì)胞微生物生長進(jìn)行測定時
2016
01-20

轉(zhuǎn)座因子的轉(zhuǎn)座過程
轉(zhuǎn)座因子是存在于染色體DNA上可以自主復(fù)制和位移的基本單位。轉(zhuǎn)座因子不同于質(zhì)粒等一些可移動的因子，當(dāng)質(zhì)?；蚰承┎《具z傳物質(zhì)成為宿主染色體一部分后，它們是隨著染色體復(fù)制．是被動的，轉(zhuǎn)座因子不但可以在一條染色體上移動，而且可以從一條染色體跳到另一條染色體上，從一個質(zhì)粒跳到另一個質(zhì)?；蛉旧w上，甚至可以從一個細(xì)胞跑到另一個細(xì)胞。轉(zhuǎn)座因子介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移過程稱為轉(zhuǎn)座作用．在原核生物和真核生物中普遍存在．并通過缺失、插入、移動、交換等形式直接或間接地促進(jìn)DNA重組事件的發(fā)生。因此在代謝工程操作中，常將外源基
2016
01-18

羊水細(xì)胞的培養(yǎng)
羊水細(xì)胞(amnioticcell)是羊水中胎兒脫落細(xì)胞的總稱，可分為上皮樣細(xì)胞、成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞、羊水樣細(xì)胞。羊水細(xì)胞主要用于胎兒染色體疾病和先天性代謝疾病的產(chǎn)前診斷。一、材料與試劑1．培養(yǎng)液PRMI1640、HamF10、HamF、12等培養(yǎng)液均可。一般添加20%胎牛血清或30％小牛血清，谷氨酰胺1mmol／L，青霉素50U／ml，鏈霉素50μg／ml。2．分層液比重為1．077g／ml的Ficoll一Urografin溶液。3．清洗液1：1混合的培養(yǎng)基與胎牛血清。4．消化液0．25％胰酶一
2016
01-15

ELISA試劑盒樣本前處理
ELISA試劑盒樣本前處理是酶聯(lián)免疫試驗中關(guān)鍵的一步，稍有不慎將導(dǎo)致實驗滿盤皆輸，如何安全，快捷的處理樣本，我們公司是這樣做的。1均質(zhì)組織樣本：肉、肝食品類切細(xì)，用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎，混合均勻。水產(chǎn)樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細(xì)，用均質(zhì)器均漿；原料表面較臟時,需適當(dāng)用蒸餾水清洗。蛋類：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。水果、蔬菜類：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。2振蕩提取將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，ELISA試劑盒使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組
2016
01-13

樣品蛋白含量的測定
測定方法如下：一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線1、從-20℃取出1mg/mlBSA，室溫融化后，備用。ELISA試劑盒2、取18個1.5ml離心管，3個一組，分別標(biāo)記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。3、按下表在各管中加入各種試劑。4、混勻后，室溫放置2min。在生物分光光度計上比色分析。二、檢測樣品蛋白含量1、取足量的1.5ml離心管，每管加入4℃儲存的考馬斯亮藍(lán)溶液1ml。室溫放置30min后即可用于測蛋白。2、取一管考馬斯亮藍(lán)加0.15mol/LNaCl溶液100
2016
01-08

培養(yǎng)細(xì)胞的分化
(一)培養(yǎng)細(xì)胞的分化個體從一個受精卵通過發(fā)育形成組織、器官等特殊結(jié)構(gòu)和進(jìn)行功能的過程，也可看做為細(xì)胞分化表達(dá)的過程。至動物出生時，機(jī)體內(nèi)的大部分細(xì)胞已經(jīng)完成形態(tài)學(xué)分化，之后體內(nèi)每一個細(xì)胞都受到體外環(huán)境、體內(nèi)神經(jīng)一體液因素、細(xì)胞與局部微環(huán)境相互作用1個方面的影響與調(diào)節(jié)，共同控制著體內(nèi)細(xì)胞增殖、代謝和功能狀態(tài)，維持著細(xì)胞的分化特征。細(xì)胞離體培養(yǎng)因環(huán)境的改變，失掉上述在體內(nèi)時的關(guān)系，細(xì)胞的分化可能發(fā)生如下的變化：1．不適應(yīng)(inadaptation)表現(xiàn)為細(xì)胞在原體內(nèi)時所擁有的分化特性減弱或不明顯，如
2016
01-06

Northern雜交的檢測
(一)原理Northern雜交(Northernblotting)是利用DNA可以與RNA進(jìn)行分子雜交來檢測特異性RNA的技術(shù)，首先將RNA混合物按它們的大小和分子量通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離，分離出來的RNA轉(zhuǎn)至尼龍膜或硝酸纖維素膜上，再與放射性標(biāo)記的探針雜交，通過雜交結(jié)果可以對表達(dá)量進(jìn)行定性或定量。Northern雜交是用來測量真核生物RNA的量和大小估計其豐度的實驗方法，可以從大量的RNA樣本同時獲得這些信息。其基本步驟包括：①完整mRNA的分離；②根據(jù)RNA的大小通過瓊脂糖凝膠電泳對RN
2016
01-04

白介素一2
(一)3H—TdR摻入法1．原理白介素一2(interleukin一2，IL-2)主要由活化T細(xì)胞產(chǎn)生，又為T細(xì)胞增殖所必需，故稱T細(xì)胞生長因子(Tcellgrowthfactor，TCGF)。IL一2產(chǎn)生的水平反映Tll胞的功能，不僅是免疫調(diào)節(jié)重要的研究對象，而且與臨床多種疾病密切相關(guān)。IL一2依賴細(xì)胞株是C578L／6來源的小鼠殺傷性T淋巴細(xì)胞(cytotoxicT—lymphocyteline，CTL)細(xì)胞系，由Gills，1977年建立，只有在IL-2存在的培養(yǎng)基中才能生長。因此可作為指
2015
12-31

染色體標(biāo)本制備
細(xì)胞遺傳學(xué)毒性檢測主要是在分子水平檢測毒性物質(zhì)對細(xì)胞遺傳性的影響；在遺傳性疾病的分子診斷和致病機(jī)制研究中，已得到廣泛應(yīng)用。常用的檢測技術(shù)包括染色體畸變分析、微核試驗、基因突變和DNA斷裂檢測等。*節(jié)染色體標(biāo)本制備染色體是在顯微鏡下可見的細(xì)胞有絲分裂過程中出現(xiàn)的結(jié)構(gòu)。對染色體檢查分析之前，需要進(jìn)行染色體標(biāo)本制備。通常情況下，都是利用外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行染色體核型分析。正常情況下．人體外周血淋巴細(xì)胞不再分裂，但植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)可刺激血中的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化成淋巴母細(xì)

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