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2015
07-29

SABC法與其他免疫組織化學(xué)染色方法
EnvisionTMSVStemS該法是近幾年在國內(nèi)推廣使用的一種方法，它的原理是將多個(gè)抗鼠和抗兔IgG分子與辣根過氧化物酶結(jié)合形成聚合物。以代替?zhèn)鹘y(tǒng)方法的二抗和三抗，直接與特異性*抗體結(jié)合，從而放大了抗原抗體結(jié)合的信號(hào)，使檢測變得簡單而且敏感性增加。經(jīng)DAB顯色即可完成染色，其他染色步驟與SABC法相同。Maxvision法該法是根據(jù)聚合物技術(shù)把過氧化物酶與抗鼠和(或)抗兔IgG分子結(jié)合在多聚肽上形成多聚物分子，可以避免由于生物素引起的非特異性背景顯色，其他染色步驟與SABC法相同。故適合于生
2015
07-27

免疫熒光組織化學(xué)基本原理
免疫熒光組織化學(xué)(immunofluorescencehistochemistry)或免疫熒光細(xì)胞化學(xué)(immunofluorescencecytochemistry)是將熒光作為標(biāo)記物的免疫組織化學(xué)技術(shù)。1942年，Coons等報(bào)道用異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記抗體，檢查小鼠組織切片中的可溶性肺炎球菌多糖抗原，從此開創(chuàng)了免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)的先河。隨著熒光標(biāo)記技術(shù)和單克隆抗體技術(shù)的不斷發(fā)展和激光掃描共聚焦顯微鏡的應(yīng)用，使免疫熒光組織化學(xué)的特異性、快速性和在細(xì)胞、分子水平定位的敏感性與準(zhǔn)確性大
2015
07-24

免疫熒光組織化學(xué)雙重染色的應(yīng)用
由于大腦中膽堿能神經(jīng)元直接參與人類運(yùn)動(dòng)、學(xué)習(xí)和記憶．它的胚胎發(fā)生和發(fā)生機(jī)制一直是神經(jīng)科學(xué)的熱點(diǎn)，因?yàn)檫@一問題的解決可能會(huì)找到治療膽堿能系統(tǒng)退行性疾病的有效途徑，也將闡明神經(jīng)元如何發(fā)生這個(gè)神經(jīng)科學(xué)的基本問題。要實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，首先要確定胚胎發(fā)生過程中膽堿能神經(jīng)元的時(shí)空定位、胚胎來源以及如何獲得膽堿能表型的過程。關(guān)于膽堿能神經(jīng)元在端腦的時(shí)空定位．20世紀(jì)80年代末美國幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室報(bào)道了幾乎一致的研究成果。而對(duì)于后兩個(gè)問題始終*莫展。有一天，在翻閱文獻(xiàn)時(shí)我發(fā)現(xiàn)了一個(gè)奇怪現(xiàn)象，U.E．Schambra(19
2015
07-22

非放射性標(biāo)記探針的檢測
雜交體檢測又稱雜交體顯示，是指通過一定方法使雜交反應(yīng)形成的雜交體(雜交信號(hào))成為在顯微鏡下可識(shí)別的產(chǎn)物。對(duì)原位雜交反應(yīng)信號(hào)進(jìn)行顯示的方法因探針標(biāo)記物不同而異。根據(jù)標(biāo)記物的不同，非放射性標(biāo)記探針原位雜交信號(hào)的顯示方法也不同，如果用熒光素標(biāo)記探針，雜交信號(hào)可直接在熒光顯微鏡下觀察，如果用辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記探針，原位雜交信號(hào)可用相應(yīng)底物的酶促反應(yīng)來顯示。目前．常用非放射性標(biāo)記物多為半抗原，以半抗原標(biāo)記探針的原位雜交信號(hào)可通過免疫酶組織化學(xué)或親和組織化學(xué)技術(shù)顯示。如用生物素標(biāo)記探針進(jìn)行原位雜
2015
07-20

PNA寡聚體的特性
PNA寡聚體具有*的特性：1．由于PNA的電中性骨架，其分子中不含磷酸基團(tuán)，因此PNA鏈更容易和帶有負(fù)電荷的互補(bǔ)序列的DNA或RNA鏈結(jié)合，而且形成的復(fù)合物分子較DNA／DNA雙鏈或DNA／RNA雜交鏈更為穩(wěn)定。2。PNA與核酸雜交不僅具有很高的親和性，還有很高的特異性。PNA對(duì)互補(bǔ)DNA的錯(cuò)配容忍程度比相應(yīng)的DNA／DNA更低，一個(gè)15mer的PNA／DNA分子在其中間段出現(xiàn)一個(gè)錯(cuò)配堿基，其Tm值下降8～20℃，兩個(gè)堿基錯(cuò)配則*不能雜交。3．PNA不被目前已知的任何核酸酶或蛋白酶所降解。如在合
2015
07-17

常用測量參數(shù)的基本術(shù)語
長度對(duì)于形狀不規(guī)則的線形組織結(jié)構(gòu)，一般方法很難計(jì)算出長度，如組織中的毛細(xì)血管和神經(jīng)纖維，細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)中的各種膜性結(jié)構(gòu)等，以往常用排列稀疏或密集等詞描述，圖像分析儀則可測出各種圖像周界線的長度。例如：在活檢組織的子宮頸上皮細(xì)胞電子顯微鏡照片上，測出一定范圍內(nèi)的細(xì)胞膜長度為8128像素，橋粒長度為1229像素，計(jì)算出橋粒長度占細(xì)胞膜總長度的15％，用此方法觀察到癌細(xì)胞的橋粒值遠(yuǎn)小于正常細(xì)胞，因此，則可以提出癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的原因之一可能與癌細(xì)胞之間的細(xì)胞連接減少有關(guān)。面積在光鏡或電鏡免疫組織化學(xué)標(biāo)本觀察中
2015
07-15

冰凍切片
?冰凍切片是指將組織在冷凍狀態(tài)下直接切片。?在切片前組織不經(jīng)過任何化學(xué)藥品處理或加熱過程。–縮短了制片時(shí)間–抗原性不受損失?對(duì)穩(wěn)定性差的抗原，如淋巴細(xì)胞表面抗原尤其適合。?組織凍結(jié)過程中，細(xì)胞內(nèi)、外的水分會(huì)形成冰晶，凍結(jié)的速度愈慢，冰晶顆粒愈大，可嚴(yán)重影響組織、細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。因此制備凍塊時(shí)要求低溫、速凍。1、冰凍組織塊的常用方法?液氮中冰凍：組織投入液氮中(一196?C)中10～20sec；?干冰中加入丙酮(或異戊烷)，液體立即氣化起泡，溫度降至一70?C，將組織投入，若在干冰丙酮中置一盛有異
2015
07-13

激光掃描共聚焦顯微鏡的光信號(hào)接收和成像方式
激光掃描共聚焦顯微鏡(laserscanningconfocalmicroscope,LSCM)是80年代發(fā)展起來的一項(xiàng)具有劃時(shí)代意義的新產(chǎn)品。實(shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)胞內(nèi)部非侵入式光學(xué)斷層掃描成像，從而對(duì)被檢物體樣品從停留到表面單層，靜態(tài)平面的觀察進(jìn)行到立體，斷層掃描、動(dòng)態(tài)全面的觀察，在生命科學(xué)研究中得到迅速應(yīng)用。儀器構(gòu)成(1)計(jì)算機(jī)系統(tǒng)：控制著機(jī)械，光學(xué)、聲學(xué)系統(tǒng)及各種外圍設(shè)備。(2)激光照射系統(tǒng)：氬離子激光器和聲光調(diào)節(jié)器。光信號(hào)接收和成像方式(1)光信號(hào)接收生物樣品發(fā)出的熒光通常有二種接收方式：①由光電
2015
07-10

免疫學(xué)抗體實(shí)驗(yàn)室方法
抗體作為實(shí)驗(yàn)試劑已有很多年了。可以發(fā)展專門針對(duì)想要抗原的特殊抗體。另外，抗體試劑與抗原相互作用的結(jié)合通常具高親和力，這就使得檢測很少量靶抗原成為可能。典型的靶蛋白是：高度純化的蛋白質(zhì)、糖蛋白、或這些分子復(fù)雜異質(zhì)的混合物（如豚草屬花粉）。由于抗原結(jié)合區(qū)與效應(yīng)分子的功能決定區(qū)在不同的區(qū)域，所以，免疫球蛋白（Igs）在基因和分子水平實(shí)際上是組合結(jié)構(gòu)。例如，把編碼某一特定恒定區(qū)的基因和許多編碼可變區(qū)的基因中的任何一個(gè)相連，這一特定恒定區(qū)介導(dǎo)補(bǔ)體結(jié)合的能力能夠得以維持同時(shí)仍能被地定為靶目標(biāo)。因此，無論是由
2015
07-08

免疫組化非特異性染色的因素
非特異性染色的主要因素組織的非特異性染色的機(jī)理很復(fù)雜，其產(chǎn)生的原因主要可分為以下幾點(diǎn)：（1）一部分熒光素未與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。（2）抗體以外的血清蛋白與熒光素結(jié)合形成熒光素脲蛋白，可與組織成分結(jié)合。（3）除去檢查的抗原以外，組織中還可能存在類屬抗原（如Forssman氏抗原），可與組織中特異性抗原以外之之相應(yīng)抗體結(jié)合。（4）從組織中難于提純抗原性物質(zhì)，所以制備的免疫血清中往往混雜一些抗其他組織成分的抗體，以致容易混淆。（5）抗體分子上標(biāo)記的熒光素分子太多，這種過
2015
07-03

單細(xì)胞凝膠電泳的實(shí)驗(yàn)原理
實(shí)驗(yàn)原理在細(xì)胞核中，DNA是環(huán)狀附著在核基質(zhì)上，細(xì)胞裂解過程中，核基質(zhì)被溶解、抽提，DNA的結(jié)構(gòu)則未發(fā)生變化。如果DNA鏈上存在缺口，則使DNA超螺旋變的松弛，DNA環(huán)向外展，同時(shí)由于暴露了陰電荷，在電場力的作用下，松動(dòng)的DNA環(huán)向陽極遷移，但是由于這種松動(dòng)的DNA環(huán)一端仍附著于核DNA，其遷移距離受到限制，因此尾長并不總是真實(shí)反映鏈缺口的多少。實(shí)際應(yīng)當(dāng)依靠尾長與尾部的熒光強(qiáng)度同時(shí)來進(jìn)行分析。鏡檢和分析：1)在熒光顯微鏡下觀察，綠光激發(fā)吸收濾片590nm。必要時(shí)照相記錄。2)記數(shù)觀察的細(xì)胞，記錄
2015
07-01

SP法雙重染色步驟
SP法雙重染色步驟1～6步驟與SABC法相同，但無需使用生物素阻斷劑：7．切片加入A特異性抗體（如兔抗A抗體），4=C孵育后，PBS沖洗3次，每次5分鐘8.滴加生物素化二抗（如抗兔二抗），室溫孵育切片10分鐘，繼而PBS沖洗3次，每次5分鐘；9.滴加鏈霉菌抗生物素蛋白—堿性磷酸酶，室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘10．堿性磷酸酶顯色液（BCIP／NBT）顯色（紫藍(lán)色）．PBS沖洗3次，每次5分鐘；11．滴加0．05％鹽酸，室溫10分鐘（可避免已顯色的抗原褪色）；12．滴加抗小鼠二抗同
2015
06-29

種子蛋白質(zhì)系統(tǒng)分析的實(shí)驗(yàn)步驟
儀器、試劑和材料1．儀器(1）日本MRK公司產(chǎn)VS-KT-P自動(dòng)定氮儀(2）樣品磨(3）玻璃層析柱2．試劑(1)50％異丙醇（V/V）或70％乙醇(2)3％硼酸(3)0.5mol/LNaCI(4)0.lmol/LNaOH操作步驟1．制樣谷物籽粒風(fēng)干，用樣品磨粉碎，放干燥器中備用。2．裝柱在玻璃層析柱底部過濾篩板上置一層濾紙。稱取酸洗并經(jīng)540℃高溫處理的石英砂60g，樣品2g裝入三角瓶中混勻，每個(gè)樣品重復(fù)3次，設(shè)空白對(duì)照。另稱取石英砂20g，其中10g置于層析柱底部，將三角瓶中混合物裝入柱內(nèi)，再
2015
06-26

上皮細(xì)胞及腫瘤標(biāo)記物的意義
細(xì)胞組織標(biāo)記物意義鱗狀細(xì)胞癌ZM-0313CK5/6胞漿陽性鱗狀細(xì)胞癌、皮膚基底細(xì)胞癌、鼻咽和其他部位的“淋巴上皮癌”及子宮頸部的乳頭狀“鱗狀移行”癌均陽性表達(dá)，為鱗狀細(xì)胞標(biāo)記的。ZM-0406P63胞核陽性表達(dá)于乳腺和其他部位肌上皮細(xì)胞、前列腺基底細(xì)胞和鱗狀細(xì)胞及其來源的腫瘤。腺癌ZM-0315CK8/18胞漿陽性是腺上皮來源腫瘤的標(biāo)記物的，在鱗狀上皮無交叉反應(yīng)。甲狀腺癌ZM-0250TTF-1胞核陽性表達(dá)于甲狀腺腺上皮、甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺濾泡癌、甲狀腺髓樣癌均陽性表達(dá)，注意必須pH8.0
2015
06-24

病理技術(shù)測定不過關(guān)的原因
醫(yī)生與技術(shù)的關(guān)系：1、很多人會(huì)說，技術(shù)員工作做的不好，和醫(yī)生沒什么關(guān)系，其實(shí)不然。zui簡單的如取材，如果醫(yī)生取材厚薄不均，組織就處理不好，HE切片和免疫組化質(zhì)量都會(huì)有影響。技術(shù)員片子做的不好，醫(yī)生可以退片，要求重切，這是我們技術(shù)員應(yīng)該做的；但是，如果醫(yī)生取材不好，技術(shù)員要退組織，大多數(shù)醫(yī)生是不會(huì)同意的。這里就存在一個(gè)不合理的現(xiàn)象。還有的醫(yī)生提出取材不好，技術(shù)員可以自己去修一下，我不同意這樣的做法，一是技術(shù)員有可能修去你需要的病變，這個(gè)責(zé)任誰負(fù)，這是一種醫(yī)療故是對(duì)病人的不負(fù)責(zé)；二是作為醫(yī)生你應(yīng)該
2015
06-19

尿液蛋白分析和檢測
尿蛋白成份分析對(duì)腎病的診斷治療以及愈后觀察都具有重要意義，這些指標(biāo)包括：（1）尿微量白蛋白檢測：a.腎小球損傷時(shí)，尿中白蛋白排出量明顯升高，其升高程度與腎小球損傷的程度相關(guān)；b.可對(duì)糖尿病性腎病，重金屬及藥物中毒等腎病早期發(fā)現(xiàn)、診斷和療效觀察提供參考依據(jù)；控制不良的糖尿病，常發(fā)生腎臟損害，尿中白蛋白排出量增加是zui早出現(xiàn)的指標(biāo)之一，還可能通過檢測尿白蛋白濃度對(duì)糖尿病性腎病分期及愈后作出判斷。（2）尿中免疫球蛋白濃度測定及尿中游離輕鏈分析。尿中游離輕鏈（本周氏蛋白）的檢測對(duì)診斷輕鏈病是*的步驟，
2015
06-17

酶標(biāo)抗體的保存和稀釋液
結(jié)合物的保存酶標(biāo)抗體中的酶和抗體均為生物活性物質(zhì)，保存不當(dāng)，極易失活。高濃度的結(jié)合物較為穩(wěn)定，冰凍干燥后可在普通冰箱中保存一年左右，但凍干過程中引起活力的減低，而且使用時(shí)需經(jīng)復(fù)溶，頗為不便。結(jié)合物溶液中加入等體積的甘油可在低溫冰箱或普通冰箱的冰格中較長時(shí)間保存。早期的ELISA試劑盒中的結(jié)合物一般均按以上兩種形式供應(yīng)，配以稀釋液（見3.2.5）臨用時(shí)按標(biāo)明的稀釋度稀釋成工作液?，F(xiàn)在較先進(jìn)的ELISA試劑盒均已用合適的緩沖液配成工作液，使用時(shí)不需再行稀釋，在4-8℃保存期可達(dá)6個(gè)月。由于蛋白質(zhì)濃度
2015
06-16

ELISA競爭法
在競爭法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5之間，此時(shí)反應(yīng)zui為敏感。競爭法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對(duì)照的顯色差異，一般均用比色計(jì)測定，讀出S、P和N的吸光值。計(jì)算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。a.ELISA陽性判定值法與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，但在計(jì)算公式中引入陽性對(duì)照A值，現(xiàn)舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照
2015
06-15

抗體芯片的特點(diǎn)
抗體芯片特點(diǎn)*整個(gè)分析過程可以在一天內(nèi)完成*適用于包括組織、細(xì)胞系、體液在內(nèi)的多種生物樣品*用熒光分析的方法比較兩個(gè)樣品之間378個(gè)蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度*試劑盒提供完整的樣品抽提制備、標(biāo)記、孵育所需的Buffer，特別設(shè)計(jì)的樣品制備的過程能保持樣品的完整性和溶解性，保證制備樣品具有代表性和一致性。*芯片上的抗體分別經(jīng)過特異性抗原、細(xì)胞系和組織的檢測，靈敏度高達(dá)pg/ml*芯片上的抗體包含針對(duì)信號(hào)傳導(dǎo)、癌癥、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞結(jié)構(gòu)、凋亡和神經(jīng)生物學(xué)等廣泛的生物功能的相關(guān)蛋白，跨度大、適用范圍廣。*開放
2015
06-12

線粒體前體蛋白信號(hào)序列的特點(diǎn)
線粒體前體蛋白信號(hào)序列的特點(diǎn)是：①多位于肽鏈的N端，由大約20個(gè)氨基酸構(gòu)成；②沒有帶負(fù)電荷的氨基酸，形成一個(gè)兩性α螺旋，帶正電荷的氨基酸殘基和不帶電荷的疏水氨基酸殘基分別位于螺旋的兩側(cè)，現(xiàn)在認(rèn)為這個(gè)螺旋與轉(zhuǎn)位因子的識(shí)別有關(guān)；③對(duì)所牽引的蛋白質(zhì)沒有特異性要求，非線粒體蛋白連接上此類信號(hào)序列，也會(huì)被轉(zhuǎn)運(yùn)到線粒體。此外有些信號(hào)序列位于蛋白質(zhì)內(nèi)部，完成轉(zhuǎn)運(yùn)后不被切除，還有些信號(hào)序列位于前體蛋白C端，如線粒體的DNA解旋酶Hmil。線粒體具有四個(gè)功能區(qū)隔，即外膜、內(nèi)膜、膜間隙、基質(zhì)。進(jìn)入不同部位的蛋白具有

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