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使用標準物質/標準樣品的十個注意事項2022/10/21

標準物質、標準樣品使用的十個注意點正確使用標準物質、標準樣品是保證測量量值準確、可靠的重要手段。標準物質的正確使用包括正確的選擇、正確的使用（防止誤用）和使用中的注意事項。1、使用者根據要進行的測量程序之目的，從國家質檢總局發(fā)布的“標準物質/標準樣品目錄”中選擇相應種類的標準物質。從“目錄”中發(fā)布的標準物質特性量值選擇與預期應用測試量值水平相適應的標準物質。使用者不應選用不確定度超過測量程序所允許水平的標準物質。在一般工作場所可以選用二級標準物質。對實驗室認證、方法驗證、產品評價與仲裁等可以選用

遠慕分享：流式抗體選擇小技巧2022/10/20

由于在流式細胞實驗過程中，熒光抗體對單細胞懸液的標記效果直接影響實驗的數據質量。因此，需要考慮各種影響流式抗體品質及檢測效果的因素，例如抗體特異性、熒光素信號強弱、熒光素標記方式、同型對照等。流式抗體的選擇：1.流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件：目標蛋白特異性，反應種屬以及應用實驗。2.流式抗體熒光標記的方式包括直接標記和間接標記兩種。在流式實驗過程中，盡量減少實驗工序和過程，以保證實驗的真實和準確性。因此在條件允許的范圍內，建議盡量用直接標記的抗體進行實驗而

多肽合成的技術原理與合成方法你知道嗎2022/10/20

多肽合成又叫肽鏈合成，是一個固相合成順序一般從C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。多肽的合成主要分為兩條途徑:化學合成多肽和生物合成多肽。多肽合成的原理多肽合成就是如何把各種氨基酸單位按照天然物的氨基酸排列順序和連接方式連接起來。由于氨基酸在中性條件下是以分子內的兩性離子形式(H3+NCH(R)COO-)存在，因此，氨基酸之間直接縮合形成酰胺鍵的反應在一般條件下是難于進行的。氨基酸酯的反應活性較高。在100℃下加熱或者室溫下長時間放置都能聚合生成肽酯

多肽常用的幾種水解方法2022/10/20

雖然多肽合成的氨基酸組成分析方法較多，且趨向更靈敏、更精確、更簡便、更快速，但還沒有一種方法可以單獨適用于所有氨基酸殘基的檢測，并且很多因素如溫度、時間、水解試劑、水解方法及多肽合成樣品中添加劑等對水解程度均有影響。常用的水解方法作簡要介紹如下:1.酸性水解酸性水解是應用最為廣泛水解方法，可以使大多數氨基酸殘基完/全水解，最/通用的水解劑是6mol/LHCI。條件:6mol/LHCI、真空、110℃.水解時間為20-24h。即可用于液相水解模式也可用于氣相水解模式。但在該條件下，天冬酰胺和谷氨酰

遠慕分享：透明質酸的種類介紹2022/10/20

透明質酸的生產過程和技術決定了質量優(yōu)劣的差異，所以在使用上一定要是正確來源生產的產品才能有治療的功效。一般而言，提煉的方法有三種：1、動物組織：主要原料是雞冠和牛眼玻璃體等。用丙酮或乙醇將原料脫脂、脫水，用蒸餾水浸泡、過濾，然后以氯化鈉水溶液和氯仿溶液處理，之后加入胰蛋白酶保溫后得到混合液，最后用離子交換劑進行處理、純化得到精制的透明質酸。這種方法提取率極低，僅1%左右，分離過程復雜，致使透明質酸價格昂貴，達5000美元/公斤，限制了在化妝品中大的量使用。2、微生物發(fā)酵：以葡萄糖作為碳源發(fā)酵液，

細胞組織消化常用哪幾種酶？2022/10/19

直接從生物體獲取的組織，一般需要將其消化成單個細胞才能進行體外培養(yǎng)。這種直接從離體組織獲得的細胞，更接近于生物體內的生活狀態(tài)，且生物性狀尚未發(fā)生很大改變，因此在藥物篩選、細胞移植、類器官培養(yǎng)、腫瘤研究等眾多領域備受歡迎。但組織消化過程中常遇到多種問題，例如消化不*、細胞死亡率高等。如何克服這些問題，其實消化酶的選擇是關鍵。遠慕生物將為您介紹一些常用的消化酶及其適用組織，供您參考。組織消化過程中常用的酶1.胰蛋白酶胰蛋白酶(Trypsin)是目前應用最/廣泛的消化試劑，通過作用于與賴氨酸或精氨酸相

遠慕淺談一下影響酶活性的因素2022/10/19

1、酶濃度酶促反應速度與酶分子的濃度成正比。當底物分子濃度足夠時，酶分子越多，底物轉化的速度越快。但事實上，當酶濃度很高時，并不保持這種關系，曲線逐漸趨向平緩。根據分析，這可能是高濃度的底物夾帶有許多的抑制劑所致。2、底物濃度在生化反應中，若酶的濃度為定值，底物的起始濃度較低時，酶促反應速度與底物濃度成正比，即隨底物濃度的增加而增加。當所有的酶與底物結合生成中間產物后，即使在增加底物濃度，中間產物濃度也不會增加，酶促反應速度也不增加。3、溫度各種酶在最適溫度范圍內，酶活性最/強，酶促反應速度最大

單個核細胞的分離純化方法2022/10/19

外周血單個核細胞（peripheralbloodmononuclearcell，PBMC）主要指淋巴細胞和單核細胞，是免疫學實驗最/常用的細胞，也是進行T細胞和B細胞分離純化的重要環(huán)節(jié)。1．原理PBMC的密度與血液中的其他成分不同。紅細胞和粒細胞的密度較大，為1.092左右；淋巴細胞和單核細胞的密度為1.076～1.090；血小板為1.030～1.035。因此，利用一種密度介于1.076～1.090之間、近于等滲的溶液（分層液）進行密度梯度離心，可使不同類別的血細胞按其相應密度分布，從而被分離。

這幾種分析標準品的定義你知道嗎2022/10/19

化學品的概念和定義化學品是指化學單質、化合物和混合物，包括天然的以及合成的。分析標準品的定義有機分析標準品有機分析標準品(Organicanalyticalstandards)是測定有機化合物的組分和結構時用作對比的化學試劑。其組分必須精確已知。也可用于微量分析。農藥分析標準品農藥分析標準品(Pesticideanalyticalstandards)適用于氣相色譜法分析農藥或測定農藥殘留量時作對比物品。其含量要求精確。有由微量單一農藥配制的溶液,也有多種農藥配制的混合溶液。原子吸收光譜標準品原子

病毒核酸檢測標準化：標準物質的種類及制備2022/10/18

病毒核酸檢測(nucleicacidtest，NAT)現已廣泛應用于血液及其制品的病毒篩查、臨床抗病毒/藥物治療療效監(jiān)測等。但核酸檢測容易受到檢測樣本的基質效應和檢測病毒的基因變異等多種因素的影響，使得不同的實驗室應用不同的方法學進行核酸檢測的結果，在量值、靈敏度和特異性方面常出現較大的差異。為使不同實驗室，不同方法間檢測的結果具有可比性，就必須使檢測標準化，而標準物質是檢測標準化的核心。標準物質的種類由于血清中病毒核酸的量值不能單獨應用物理和(或)化學的方法進行準確測定，必須通過一定的核酸擴增

遠慕分享：RT-PCR的定義與檢測方法2022/10/18

1.定義：是以RNA為模板，聯合逆轉錄反應（reversetranscription，RT）與PCR，可用于檢測單個細胞或少數細胞中少于10個拷貝的RNA模板。RNA擴增包括兩個步驟：在單引物的介導下和逆轉錄酶的催化下，合成RNA的互補cDNA；加熱后cDNA與RNA鏈解離，然后與另一引物退火，并由DNA聚合酶催化引物延伸生成雙鏈靶DNA，最后擴增靶DNA。2.檢測方法⑴一步法：利用同一緩沖液，在同一體系中加入逆轉錄酶、引物、Taq酶、4種dNTP直接進行mRNA反轉錄與PCR擴增。Taq酶不僅

原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗指導原則2022/10/18

穩(wěn)定性試驗的目的是考察原料藥物或制劑在溫度、濕度、光線的影響下隨時間變化的規(guī)律，為藥品的生產、包裝、貯存、運輸條件提供科學依據，同時通過試驗建立藥品的有效期。穩(wěn)定性試驗的基本要求是：（1）穩(wěn)定性試驗包括影響因素試驗、加速試驗與長期試驗。影響因素試驗用1批原料藥物或1批制劑進行。加速試驗與長期試驗要求用3批供試品進行。（2）原料藥物供試品應是一定規(guī)模生產的。供試品量相當于制劑穩(wěn)定性試驗所要求的批量，原料藥物合成工藝路線、方法、步驟應與大生產一致。藥物制劑供試品應是放大試驗的產品，其處方與工藝應與大

PCR后出現非特異性擴增是什么情況？2022/10/18

PCR產物的電泳檢測時間一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規(guī)則甚致消失。假陰性，不出現擴增條帶PCR反應的關鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及，④PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應針對上述環(huán)節(jié)進行分析研究。模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不*。在酶和引物質量好時，不出現擴增帶，極有可能是標本的消化處理，模板核酸提取過程出了毛

克隆載體構建入門攻略，小白進來學習！2022/10/17

載體構建是分子生物學研究常用的手段之一。通俗地可以描述為將一段目標片段（基因CDS或者用于轉錄的sgRNA）插入環(huán)形DNA里面，并在體內（一般大腸桿菌）高保真復制擴增后用于后續(xù)科研實驗。根據后續(xù)實驗目的的不同，通常分為四種類型：擴增目的基因——構建克隆載體；表達目的基因——構建表達載體；編輯基因——構建基因編輯載體；轉染細胞——構建病毒包裝載體。載體的基本構造復制起始點：質粒在大腸桿菌中的復制起點，使質粒得以在大腸桿菌中復制，這意味著你插入到質粒中的目標基因可以享受大腸桿菌的高保真復制系統(tǒng)?？剐?

質粒DNA的去磷酸化實驗方法2022/10/17

實驗方法原理去除5'端的磷酸基可防止質粒DNA的自身連接和環(huán)化。在體外連接反應中，DNA連接酶可在鄰近的兩個分子間形成磷酸二酯鍵。但只有當一個分子的5'端帶有磷酸基另一分子的3'端帶有羥基時，這一反應才能完成。實驗材料小牛腸堿性磷酸酶（CIP)或蝦堿性磷酸酶（SAP)蛋白酶K限制性內切核酸酶載體DNA試劑、試劑盒EDTAEGTA乙醇酚氯仿SDSTETris-Cl儀器、耗材瓊脂糖凝膠水浴實驗步驟一、材料1.緩沖液和溶液EDTA(0.5mol/L，pH8.0)，EGTA(0.5mol/L，pH8.0

檢測磷酸化蛋白，怎么選擇磷酸的位點？2022/10/17

實驗方法原理磷酸化位點的確定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白質被純化，如果可能蛋白質要均一；磷蛋白被特異性的化學或酶反應切斷、產生肽混合物，其中含有一到兩個磷酸肽不同之處在干其分離磷酸肽的策略是為了確定氨基酸序列，定位肽段內磷酸化的殘基。上面所述的分離方法，2D-PP作圖、HPLC或lMAC方法，也同樣適宜于微量制備磷酸肽用于確定磷酸化位點。實驗材料蛋白樣品實驗步驟過去確定磷酸化位點測序最/常用的是逐步化學降解法，如絲氨酸和蘇氨酸磷酸化分析方法、酪氨酸磷酸化分析方法,最近，此方法已經主要被質譜方法

單細胞凝膠電泳標準操作規(guī)程，科研人必看！2022/10/17

原理：在細胞核中，DNA是環(huán)狀附著在核基質上，細胞裂解過程中，核基質被溶解、抽提，DNA的結構則未發(fā)生變化。如果DNA鏈上存在缺口，則使DNA超螺旋變的松弛，DNA環(huán)向外展，同時由于暴露了陰電荷，在電場力的作用下，松動的DNA環(huán)向陽極遷移，但是由于這種松動的DNA環(huán)一端仍附著于核DNA，其遷移距離受到限制，因此尾長并不總是真實反映鏈缺口的多少。實際應當依靠尾長與尾部的熒光強度同時來進行分析。操作步驟：1.分離制備單細胞懸液：（1）體外培養(yǎng)的細胞株：用胰酶消化，吹打成單細胞懸液（2）體內臟器細胞：

遠慕教你選擇合適的全血DNA、RNA提取方法2022/10/14

從全血中提取DNA和RNA應該說是最基本的工作了，提取的DNA和RNA質量的好壞直接影響了下游的實驗和分析，可供選擇的方法非常多，亂花漸欲迷人眼，如何選擇最/適合的方法，成了很多人實驗開始前最難以抉擇的事情。遠慕生物從兩個方面，層層剝繭，分析*佳的實驗方法。1、全血的采集保存和DNA的提取a、用含抗凝劑的采血管進行采血，抗凝劑一般有EDTA和肝素，EDTA更好一些，不會影響下游的反應，如果沒有采血管，也可以自己添加抗凝劑EDTA，提前準備0.04M的EDTA溶液，每5ml的血液中加入0.4ml配

遠慕淺談蛋白柱的日常維護和常見問題2022/10/14

在蛋白分離時選擇了合適的蛋白柱，有時往往不能成功地完成蛋白的分離，同一根蛋白分離柱在不同的使用者手中可能會有不同的柱壽命及分離效果，正確的使用蛋白柱和正確的日常維護是保證成功分離蛋白及延長柱壽命的關鍵。不論使用什么類型的蛋白柱，首先必須對其填料的性能有基本了解。如該柱適用什么樣的溶劑，什么類型的樣品，流速及耐壓范圍等，遠慕提供的各種類型的蛋白柱，在柱箱內均有詳細的說明書，使用柱子前，務必要仔細閱讀，以保證正確使用這些柱子。下面遠慕就蛋白分離中常出現的問題進行討論。①樣品不保留：在用離子交換柱分離

核酸標準物質（質控品）的管控和使用2022/10/14

在《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》，《三級綜合醫(yī)院評審標準（2011年版）》等文件中，都指出在臨床檢測報告的項目均應開展內部室內質控，并參加外部室間質評。在這兩項工作當中，標準物質的作用尤為重要，對它的管控不可/或缺。(一)、標準物質（質控品）的來源與基本條件分子實驗室中，一般將標準物質分成兩類：1、用于儀器校準、驗證、測試和繪制工作標準曲線等目的的標準物質；（一般是由廠商提供的質控品）2、用于外部室間質評、內部室內質控、方法驗證等目的的標準物質，而在《2021臨床醫(yī)學檢驗技術（士）》的中，這類標