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遠(yuǎn)慕解析：酶抑制劑的概念和作用2022/10/09: 酶抑制劑是一種分子結(jié)合于酶并降低它的活性。通過與酶的活性位點(diǎn)結(jié)合，抑制劑降低了底物與酶的相容性，從而抑制了酶-底物復(fù)合物的形成，阻止了反應(yīng)的催化作用，并減少了（有時(shí)為零）反應(yīng)?？梢哉f，隨著酶抑制劑濃度的增加，酶活性的速率降低，因此，產(chǎn)物的產(chǎn)生量與抑制劑分子的濃度成反比。由于阻斷酶的活性可以殺死病原體或糾正代謝失衡，許多藥物是酶抑制劑。它們還用于殺蟲劑中。并非所有與酶結(jié)合的分子都是抑制劑。酶激活劑與酶結(jié)合并增加其酶促活性，而酶底物在酶的正常催化循環(huán)中結(jié)合并轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。抑制劑的結(jié)合可以阻止底物進(jìn)入酶

培養(yǎng)基不凝固怎么辦？凝固物質(zhì)又有哪些？2022/10/09: 你知道培養(yǎng)基的凝固物質(zhì)有哪些嗎？跟著遠(yuǎn)慕生物來學(xué)習(xí)一下吧！最/常用的凝固物質(zhì)為瓊脂，特殊情況下也可用明膠、卵白蛋白、血清等。抑制劑和指示劑：用于選擇、鑒定及判斷結(jié)果。1.抑制劑：必須具有選擇抑制作用。目的在于抑制非檢出菌（非目的菌）的生長(zhǎng)，以利于檢出菌（目的菌）的生長(zhǎng)。常用膽鹽、煌綠、亞硫酸鈉、亞硒/酸鈉及一些染料和某些抗生素等。2.指示劑：在培養(yǎng)基中加入一定種類的指示劑，是為了觀察細(xì)菌是否利用和分解培養(yǎng)基中的糖、醇類。常用的有酚紅、中性紅、甲基紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍(lán)、中國(guó)藍(lán)等酸堿指示劑。亞

細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件你知道嗎2022/10/09: 一、細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖除需必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還需有適宜的環(huán)境，包括溫度、酸堿度及氣體等。1、充足的營(yíng)養(yǎng)細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖、新陳代謝必須有充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)才能提供其菌體所需的原料及能量。2、適宜的溫度不同細(xì)菌對(duì)溫度的要求不同，據(jù)此可分為嗜冷菌、嗜溫菌、嗜熱菌三種類型。病原菌均為嗜溫菌，多數(shù)病原菌最適生長(zhǎng)溫度為35～37℃，少數(shù)病原菌如小腸結(jié)腸炎耶爾森菌最適溫度為20～28℃，空腸彎曲菌最適溫度為36～43℃。3、適宜的酸堿度各類一細(xì)菌對(duì)于生長(zhǎng)環(huán)境中氫離子的濃度要求不同，多數(shù)在中性至弱堿性環(huán)境中

抗原抗體反應(yīng)原理特點(diǎn)歸納總結(jié)！實(shí)驗(yàn)人看過來！2022/10/08: 抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行，也可以在機(jī)體外進(jìn)行。抗原抗體反應(yīng)的過程是經(jīng)過一系列的化學(xué)和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個(gè)階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。由于抗體主要存在于血清中，在抗原或抗體檢測(cè)中多以血清為試驗(yàn)材料，故將體外抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng)也稱作血清學(xué)反應(yīng)(serologicalreaction)。該反應(yīng)既可用已知的抗原檢測(cè)未知的抗體，這是臨床上常用的血清學(xué)診斷方法；也可用已知的抗體檢測(cè)未知的抗原，如微生物及其

流式抗體（熒光抗體）細(xì)胞染色步驟與注意2022/10/08: 染色緩沖液（BSA）的配制：PBS含有1%FBS和0.09%NaN3，置于冰上或4度冰箱備用。準(zhǔn)備單細(xì)胞懸液：淋巴組織、骨髓、血液或培養(yǎng)的細(xì)胞。用冰染色緩沖液洗細(xì)胞2次，離心細(xì)胞，用冰染色緩沖液重懸細(xì)胞，使終濃度為2×107細(xì)胞/ml。各取50ul（106細(xì)胞）細(xì)胞懸液到2個(gè)圓底的Ep管中。根據(jù)抗體說明書在其中1個(gè)Ep管中加入合適的抗體量，另外1個(gè)加入同型對(duì)照抗體，冰上避光孵育20分鐘（建議每5分鐘輕輕混勻，以免細(xì)胞沉積）。根據(jù)熒光抗體的親和力適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間。用1ml染色緩沖液洗2次去除未結(jié)合

蛋白的生物活性測(cè)定方法分享！2022/10/08: 結(jié)晶紫法活性測(cè)定1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胰腺癌SW1990細(xì)胞，用0.25%胰/酶（以無鈣鎂離子PBS溶液配制，pH7.4）消化后，加入RPMI-1640培養(yǎng)基（10%新生牛血清，100U/ml青霉/素，100U/ml鏈霉/素，pH7.2）吹打細(xì)胞，使形成細(xì)胞懸液。進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，使細(xì)胞數(shù)為2~2.5x105個(gè)/ml。接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，100µl/孔。接種細(xì)胞時(shí)須不斷搖動(dòng)細(xì)胞懸液，以保證各孔細(xì)胞數(shù)的均勻一致。96孔板放置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22h，觀察到孔中細(xì)胞長(zhǎng)滿70~

實(shí)驗(yàn)室常用染料性能一起了解下2022/09/30: （一）天然染料1、蘇木/精蘇木/精是從南美的蘇木（熱帶豆科植物）干枝中用浸制出來的一種色素，是最/常用的染料之一。蘇木/精不能直接染色，必須暴露在通氣的地方，使他變成氧化蘇木/精（又叫蘇木素）后才能使用，這叫做“成熟”。蘇木/精的“成熟”過程需時(shí)較長(zhǎng)，配置后時(shí)間愈久，染色力愈強(qiáng)。被染材料必須經(jīng)金屬鹽作媒劑作用后才有著色力。所以在配制蘇木/精染劑時(shí)都要用媒染劑。常用的媒染劑有硫酸鋁按、鉀明礬和鐵明礬等。蘇木/精是淡黃色到銹紫色的結(jié)晶體，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染細(xì)胞核的優(yōu)良材料，他能把細(xì)胞中

免疫組化非特異性染色消除方法2022/09/30: 一、非特異性染色的主要因素組織的非特異性染色的機(jī)理很復(fù)雜，其產(chǎn)生的原因主要可分為以下幾點(diǎn)：（1）一部分熒光素未與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。（2）抗體以外的血清蛋白與熒光素結(jié)合形成熒光素脲蛋白，可與組織成分結(jié)合。（3）除去檢查的抗原以外，組織中還可能存在類屬抗原（如Forssman氏抗原），可與組織中特異性抗原以外之之相應(yīng)抗體結(jié)合。（4）從組織中難于提純抗原性物質(zhì)，所以制備的免疫血清中往往混雜一些抗其他組織成分的抗體，以致容易混淆。（5）抗體分子上標(biāo)記的熒光素分子太多，這

自己配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液需要做期間核查嗎？2022/09/30: 1、標(biāo)準(zhǔn)溶液是自己配制出來的，它屬于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)嗎？要怎么做期間核查呢？標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)自己配制出來的，屬于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。參考解答：標(biāo)準(zhǔn)溶液是自己配制出來的，它屬于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，需要做期間核查（如果在很短時(shí)間內(nèi)用完了，這種情況不用核查）期間核查時(shí)候要區(qū)別是CRM還是RM，一般核查的時(shí)候主要關(guān)注標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1、性狀是否發(fā)生變化2、是否在有效期內(nèi)3、外觀是否變化，比如是否渾濁4、保存的環(huán)境條件是否合適必要時(shí)可以用些技術(shù)手段看看試劑值是否發(fā)生明顯變化。但是實(shí)驗(yàn)室一般不能對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定值。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)值是否變化和對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值

常用一般溶液有效期一覽表2022/09/30: 試劑的有效日期是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的重要因素。在實(shí)際使用過程中，人們總是習(xí)慣于用生產(chǎn)日期來判斷化學(xué)試劑的有效性，其實(shí)這是不對(duì)的?；瘜W(xué)試劑不像食品和藥品有嚴(yán)格的保質(zhì)期，化學(xué)試劑一般?有保質(zhì)期的具體要求和界限，這與化學(xué)試劑的保質(zhì)期受多方面因素影響有關(guān)。要根據(jù)化學(xué)性質(zhì)、保存條件等，再結(jié)合工作的實(shí)際情況判斷試劑是否出現(xiàn)變質(zhì)、能否繼續(xù)使用。常用一般溶液有效期一覽表名稱濃度有效期淀粉指示劑5g/L5天淀粉指示劑10g/L5天鹽酸氨水緩沖溶液PH=9.6-9.77天乙醇溶液78%7天乙醇溶液75%7天乙醇溶液

單細(xì)胞組織保存液+低溫保存的操作方法2022/09/29: 近兩年發(fā)表的一篇NatureImmunology的文章，證實(shí)了使用低溫保存樣本用于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析腎臟樣本的可行性。采用低溫存儲(chǔ)策略可以最大限度地減少批次效應(yīng)，防止一些細(xì)微的基因表達(dá)特征被掩蓋。雖然這種策略可能導(dǎo)致中性粒細(xì)胞的損失，并且可能會(huì)改變其他細(xì)胞亞群的相對(duì)頻率，但并沒有觀察到由于組織保存液而對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)生了主要影響。研究人員使用流式細(xì)胞術(shù)比較了新鮮和保存液處理的小鼠腎臟細(xì)胞的存活率，并通過scRNA-seq分析，驗(yàn)證了保存液低溫保存組織樣本策略在長(zhǎng)達(dá)3天的保存過程中，能夠有效保持腎臟的

質(zhì)譜鑒定微生物的原理你知道嗎2022/09/29: 在應(yīng)用MALDI-TOFMS時(shí)，通常將微生物樣本與一種飽和的低分子量無機(jī)化合物溶液（稱為基質(zhì)）進(jìn)行混合加在靶板上，待干后樣本與基質(zhì)共結(jié)晶后形成了以基質(zhì)包裹構(gòu)架的樣本固體沉淀。樣本基質(zhì)結(jié)晶體經(jīng)激光輻射，基質(zhì)從激光中吸收能量使樣品吸附，基質(zhì)與樣品之間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移使得樣品分子電離，離子在加速電場(chǎng)下獲得相同的動(dòng)能，經(jīng)高壓加速、聚焦后進(jìn)入飛行時(shí)間檢測(cè)器。根據(jù)離子飛行時(shí)間的不同進(jìn)行分析得出離子質(zhì)荷比（m/z）和離子峰值，形成質(zhì)量圖譜。不同的微生物由于蛋白分子組成有差異而形成具有特異性的圖譜，通過軟件對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)

培養(yǎng)液pH對(duì)細(xì)胞會(huì)有影響嗎？2022/09/29: 由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些。在配制培養(yǎng)用液時(shí)，需要注意一點(diǎn)：培新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時(shí)，溶液的pH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。培養(yǎng)液pH下降很快可能原因有哪些？其解決辦法是什么？通常細(xì)胞生長(zhǎng)得非?？鞎r(shí)，pH值通常下降得很快。此時(shí)可以及時(shí)傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決。此外，培養(yǎng)瓶

大規(guī)模培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞這樣操作！2022/09/29: 根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞的類型，可采用貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)和固定化培養(yǎng)等三種培養(yǎng)方法進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。一、動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特性及培養(yǎng)溫度1.細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，易污染，培養(yǎng)需用抗生素2.細(xì)胞大，無細(xì)胞壁，機(jī)械強(qiáng)度低，環(huán)境適應(yīng)性差3.需氧少，不耐受強(qiáng)力通風(fēng)與攪拌4.群體生長(zhǎng)效應(yīng)，貼壁生長(zhǎng)（錨地依賴性）5.培養(yǎng)過程產(chǎn)品分布細(xì)胞內(nèi)外，成本高6.原代培養(yǎng)細(xì)胞一般繁殖50代即退化死亡依據(jù)在體外培養(yǎng)時(shí)對(duì)生長(zhǎng)基質(zhì)依賴性差異，動(dòng)物細(xì)胞可分為兩類：●貼壁依賴型細(xì)胞：需要附著于帶適量電荷的固體或半固體表面才能生長(zhǎng)，大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞，包括非淋巴

關(guān)于進(jìn)口胎牛血清的安全問題2022/09/28: 胎牛血清是細(xì)胞成長(zhǎng)的快樂口糧，而進(jìn)口胎牛血清被*為品質(zhì)佳，自然是實(shí)驗(yàn)室里的“香餑餑”。但你知道嗎？進(jìn)口胎牛血清使用安全不僅關(guān)乎到實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)人員安全，也上升到國(guó)家生物安全層面。你手里的進(jìn)口胎牛血清夠安全嗎？血清生物安全不容忽視生物安全是國(guó)家安全的重要組成部分，我國(guó)《生物安全法》已于2021年4月15日起施行，它的頒布對(duì)實(shí)驗(yàn)室生物安全具有重大指導(dǎo)意義。生物安全法共10章88條，聚焦生物安全領(lǐng)域主要風(fēng)險(xiǎn)，完善風(fēng)險(xiǎn)防控體制機(jī)制，全面規(guī)范生物安全相關(guān)活動(dòng)。近年來全球疫情頻發(fā)，很多都是動(dòng)物來源的病毒傳播，

關(guān)于核酸檢驗(yàn)方法遠(yuǎn)慕有話要說！2022/09/28: 核酸檢測(cè)具體流程如下：1.核酸提取使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動(dòng)化儀器等商品化試劑或設(shè)備并按說明書操作。提取RNA時(shí)應(yīng)注意防止RNA降解。DNA應(yīng)置于-20℃保存，RNA和需長(zhǎng)期保存的DNA應(yīng)置于-80℃保存。2.逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成反應(yīng)需使用逆轉(zhuǎn)錄引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴(kuò)增儀或水浴箱中，在規(guī)定的溫度和時(shí)間下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進(jìn)行第一輪擴(kuò)增反應(yīng)。逆

菌種活化方法可以這樣做！2022/09/28: 目前國(guó)際國(guó)內(nèi)常用的菌種保存方法包括：定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍干燥法、80℃冰箱凍結(jié)法、液氮超低溫凍結(jié)法，其菌種復(fù)蘇方法如下：(1)定期移植法的菌種復(fù)蘇較簡(jiǎn)單，直接轉(zhuǎn)接即可;(2)液體石蠟法保存的菌種在復(fù)蘇時(shí)，挑取少量菌體轉(zhuǎn)接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上，生長(zhǎng)繁殖后，再重新轉(zhuǎn)接一次;(3)沙土管法保存菌種在復(fù)蘇時(shí)，在無菌條件下打開沙土管，取部分沙土粒于適宜的斜面培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出菌落后再轉(zhuǎn)接一次?；蛉∩惩亮Ｓ谶m宜的液體培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)接斜面;(4)真空冷凍干燥法保存菌種在復(fù)蘇時(shí)先用7

石蠟組織切片制作全過程分享！2022/09/28: (一)石蠟切片注意事項(xiàng)(1)組織脫水、透明和浸蠟在脫水過程中，所用各級(jí)酒精的純度應(yīng)盡量保持，以便將組織內(nèi)的水分*脫去。在*中的時(shí)間不宜過長(zhǎng)，以防組織過硬，造成切片不順暢。如果*中含有水分，則組織脫水不*。這種含有水分的組織二甲苯不能*浸入，造成切片無法透明而呈現(xiàn)混濁現(xiàn)象。此時(shí)可將組織重行在新*中脫水。透明所用二甲苯應(yīng)保持純度，否則透明難以充分，不利于石蠟滲透。組織在二甲苯中的時(shí)間需要嚴(yán)格掌握，時(shí)間過長(zhǎng)則組織脆硬易碎，時(shí)間過短石蠟不易浸入。因?yàn)橥该魉钑r(shí)間較短，所以透明時(shí)間必須注意。浸蠟的溫度不可

為啥你的PCR實(shí)驗(yàn)又雙叒叕失敗了？2022/09/28: 首先，讓我們來回憶一下PCR鑒定的整個(gè)過程，主要包括樣本處理、配PCR體系、擴(kuò)增、PCR產(chǎn)物電泳四個(gè)部分，接下來我們就從這幾個(gè)部分盤點(diǎn)PCR操作中的那些坑，請(qǐng)收下這份防坑指南。1.樣本處理PCR的第一個(gè)步驟就是處理樣本，這一步出問題后面的也就廢了。取樣后，如果不能馬上處理樣本，短期放4℃保存，長(zhǎng)期放﹣20℃保存；此外，加完裂解液，要注意檢查樣本是否*浸沒在裂解液中。2.PCR體系簡(jiǎn)而言之，PCR體系的要求就是“加對(duì)成分加對(duì)量”，就好比做一道菜，缺了任何一種材料或者量不合適，味道就不一樣了，而對(duì)P

遠(yuǎn)慕簡(jiǎn)述：免疫學(xué)ELISA、免疫組化、WB的特性2022/09/27: ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）：用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色，待測(cè)的樣品多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒有用到組織包埋、切片等技術(shù)，這是與免疫組化的主要區(qū)別，操作上開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義。免疫組化和elisa所用到的原理大致相同，只是因?yàn)樗鶛z測(cè)的樣品不同，從而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析，其靈敏度非常高。免疫組化：是融合了免疫學(xué)原理（抗原抗體特異性結(jié)合）和組織學(xué)技術(shù)

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