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樣品的采集檢測及培養(yǎng)基的滅菌方法2022/09/27

樣品的采集及檢測一、保證采樣器具的無菌性1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌，保證恒溫、時間足夠（但不可時間過長，導致玻璃器皿易裂紋而報廢）。2.取樣筐：使用前要用75%酒精進行噴灑消毒3.取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用75%酒精進行擦拭消毒。4.取樣袋：可現(xiàn)用酒精進行擦拭消毒，再在超凈臺用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。5.電子稱表面用75%酒精消毒。二、人員操作1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。2.取樣要具有代表性（隨機樣、

動物血清的正確熱滅活方法2022/09/27

動物血清的熱滅活非常容易造成蛋白析出增多，若非必要，可以無需做此操作。若必須做動物血清的熱滅活，請嚴格遵守以下步驟：1、保證血清*融化狀態(tài)，溫度接近常溫。2、保證水浴溫度56℃、30分鐘的原則，在水浴過程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子，使血清內(nèi)部受熱均勻，直至滅活時間結(jié)束。注意事項：溫度過高、時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多，甚至嚴重影響血清的品質(zhì)。在56℃水浴中，持續(xù)恒溫30分鐘。在此過程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子，使其受熱均勻，減少蛋白的析出。為什么要熱滅活血清？加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活

血清污染和過濾的相關(guān)問題解答2022/09/27

1、問：懷疑購買的Gibco胚胎干細胞專用胎牛血清（GibcoES專用胎牛血清）染菌，想用濾膜過濾一下，可否自己用0.22μm濾膜過濾？對血清性質(zhì)有多大影響？有做過的么？答：可以過濾的，血清當出廠時都是0.22μm或0.1μm過濾除菌。想證明有沒有染菌不用過濾這么麻煩，只要放置于37℃過夜就可以了，如果有微生物污染會變渾濁的，如果還是澄清的就說明沒有問題的。實驗室中血清很難直接過濾，一般要加到培養(yǎng)基中再過濾。我們實驗室制備培養(yǎng)基時，都使用濾膜過濾，一般而言如果制備1-2瓶培養(yǎng)基，一個濾膜及一支3

關(guān)于血清分離膠你了解多少呢？2022/09/26

血清分離膠是一種粘性流體，其結(jié)構(gòu)中含有大量氫鍵，由于氫鍵的締合作用形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。在離心力的作用下，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)被破壞，變成粘度低的流體。當離心力消失之后又重新形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)．恢復成粘度高的流體．這種性質(zhì)被稱為觸變性(thixotropy)．利用這一特性可制成一種血清分離膠。當分離膠與凝固后的血液在同一試管中離心時，分離膠便在血清和血/塊之間形成膠狀的隔離層將血清和血/塊隔開。從而提高了血清的收得率，并在原狀態(tài)下保存血清，簡化了臨床檢驗過程，提高了工作效率?，F(xiàn)今醫(yī)學檢驗技術(shù)已步入全自動化，微機管理的新時

如何選擇western-blot中分離膠的濃度2022/09/26

westernblot中分離膠濃度的選擇取決于目的蛋白分子量不同的分離膠濃度對不同的目的蛋白分子量的分辨率不一樣，比如15%的分離膠更適合45kDa的分目的蛋白，而10%的分離膠更適合70kDa的目的蛋白而因為westernblot的膜應該是*覆蓋SDSPAGE的凝膠，所以不用太擔心條帶在凝膠上位置偏上活偏下所以westernblot中分離膠濃度的選擇取決于目的蛋白分子量如果以溴酚藍跑到膠的底部為準,26kD在10%的由下往上1/4的地方,而15%就在由下往上大約1/2（不太確定）的地方,對于分

脂類和類脂你還在傻傻分不清嗎2022/09/26

脂類是油、脂肪、類脂的總稱.食物中的油脂主要是油和脂肪,一般把常溫下是液體的稱作油,而把常溫下是固體的稱作脂肪.脂肪是由甘油和脂肪酸組成的三酰甘油酯,其中甘油的分子比較簡單,而脂肪酸的種類和長短卻不相同.因此脂肪的性質(zhì)和特點主要取決于脂肪酸,不同食物中的脂肪所含有的脂肪酸種類和含量不一樣.自然界有40多種脂肪酸,因此可形成多種脂肪酸甘油三酯.脂肪酸一般由4個到24個碳原子組成.脂肪酸分三大類：飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸.脂肪在多數(shù)有機溶劑中溶解,但不溶解于水.脂類的分類(1)脂肪

標定標準溶液時平行測定的誤差2022/09/26

標定標準溶液時平行測定的誤差滴定誤差要求：以不確定度表示，≤±0.2%。滴定誤差分類：主要包括稱量誤差、量器誤差、方法誤差。（1）稱量誤差每次稱量誤差：±0.0001g，一份試樣稱量誤差±0.0002g。若相對誤差±0.1%，則每一份試樣的稱量至少為0.2g。（2）量器誤差滴定管讀數(shù)誤差：±0.01ml,一份試樣量取誤差±0.02ml。若相對誤差±0.1%，則每一份試樣體積量至少為±20ml（3）方法誤差主要是終點誤差。其原因有：指示劑不能準確地在化學計量點時改變顏色；標準溶液的加入不可能恰好在

小小標準品，助力分子診斷更準確喲！2022/09/23

分子診斷是指通過分子生物學的檢測手段，檢測患者體內(nèi)基因結(jié)構(gòu)或表達水平的技術(shù)。由于其檢測速度快、靈敏度高和特異性強等特點，被廣泛應用于血液篩查、遺傳性疾病、傳染性疾病、腫瘤伴隨診斷等領(lǐng)域。比如現(xiàn)今與我們息息相關(guān)的新冠核酸檢測，就屬于分子檢測的應用實例。分子診斷的檢測往往需要標準品，作為對照，校正系統(tǒng)誤差，確保結(jié)果的準確性。下面遠慕生物就和大家分享分子診斷的背景知識和標準品的應用意義吧！應用于分子診斷中的檢測技術(shù)分子診斷主要檢測基因的序列結(jié)構(gòu)和表達水平，主要的檢測技術(shù)包括PCR、高通量測序、熒光原位

遠慕生物淺談：穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建及其單克隆化應用要點2022/09/23

穩(wěn)轉(zhuǎn)株是指通過基因工程手段獲得穩(wěn)定過表達或抑制特定基因的細胞株。一般將目的基因序列或抑制目的基因的shRNA序列裝載至重組載體中，再通過慢病毒系統(tǒng)或轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)將目的序列整合至宿主細胞的染色體中，實現(xiàn)目的基因持續(xù)、穩(wěn)定的調(diào)控。通過慢病毒系統(tǒng)或轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)轉(zhuǎn)染并經(jīng)過藥物篩選獲得的陽性細胞是一個混合細胞池，即多克隆細胞系。單克隆細胞系則是從多克隆細胞系中分選得到的，由單一細胞擴增得到的細胞株。穩(wěn)轉(zhuǎn)株細胞系是科研工作者常用的基因調(diào)控細胞模型，常規(guī)的科研實驗，多克隆細胞系是可以滿足需求的，但某些應用場景需要

原始菌種、菌液的制備及保存的標準操作規(guī)程2022/09/23

目的菌種保藏使微生物的代謝活動處于最/低的狀態(tài)，但又不至于死亡，從而達到保藏的目的。規(guī)范菌種原始菌液的制備及長期保存。1.定義原始菌液--由凍干菌或冷凍菌直接傳代的孢子或生長菌的原始懸浮液。工作菌液--由原始菌液直接稀釋，或根據(jù)一般試驗需要而等量稀釋的特定濃度的孢子或細菌的懸浮液。2.總則微生物室收到實驗菌種后應進行活化及純化，并進行傳代（芽孢桿菌除外）。每一新菌種在適宜的瓊脂平板上劃線分離，檢查是否純種，觀察菌落形態(tài)并用革蘭氏染色或芽孢染色法進行鏡檢，如果是芽孢懸浮液，用常規(guī)方法測定其存活孢子

酵母菌菌株的保存培養(yǎng)與復蘇實驗2022/09/22

酵母菌菌株的保存與復蘇實驗實驗材料酵母菌試劑、試劑盒甘油DMSO儀器、耗材凍存管實驗步驟1.配制30%的甘油溶液，在每個15mm×45mm，4ml的帶蓋的凍存管中加入1ml甘油溶液，輕輕擰上螺蓋，高壓滅菌15min。2.為了在凍存管中配制凍存菌液，加入1ml對數(shù)后期或靜止早期的培養(yǎng)液，混勻后置干冰中一段時間，然后轉(zhuǎn)存到-70℃冰箱中。3.復蘇菌株時，可以從凍存管中刮下少量細胞劃在平板上，不要將整個凍存管中的貯存液融化。4.細胞也可以按菌懸液加入80μlDMOS的方式配制凍存菌株，貯存在-70℃。

錯綜復雜搞不清？一網(wǎng)打盡實驗室的各種染色法！2022/09/22

細胞涂片染色在臨床檢驗工作中起到舉足輕重的作用，細胞染色效果直接影響到細胞形態(tài)學的辨別以及疾病的診斷。不同染色方法的染色原理和用途也不盡相同，現(xiàn)對檢驗工作中常見的幾種染色方法及其用途和優(yōu)缺點進行總結(jié)：瑞氏染色（Wright'sstain）又稱美藍-伊紅Y染色，染液主要由堿性染料亞甲藍（美藍）和酸性染料伊紅溶于甲醇配置形成。該染色方法操作簡單，染色時間短，對細胞質(zhì)成分及中性顆粒染色效果較好；但是染色效果較差，容易退色，對細胞核染色效果較姬姆薩染色法差，保存時間短。該染色方法在檢驗工作中主要用于臨時

抗酸染色法的步驟和染色配制說明2022/09/22

一、抗酸染色一般步驟1、初染用玻片夾夾持涂片標本，滴加石炭/酸復紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時離開，若染液蒸發(fā)減少，應再加染液，以免干涸，加熱3-5分鐘，待標本冷卻后用水沖洗。2、脫色3%鹽酸酒精脫色30秒~1分鐘；用水沖洗。3、復染用堿性美蘭溶液復染1分鐘，水洗，用吸水紙吸干后用油鏡觀察。二、抗酸染色的染液配制1、石/炭酸復紅堿性復紅酒精飽和溶液10mL5%石炭/酸90mL2、3%鹽酸酒精濃鹽酸3mL95%酒精97mL3、呂氏美蘭液美蘭酒精飽和液30mL氫氧/化鉀（1

細胞凍存時，培養(yǎng)基、血清、DMSO按什么比例配制？2022/09/21

DMSO是目前最/常用的細胞凍存保護劑，一般使用時終濃度控制在5~10%，最佳濃度取決于細胞類型。一般來說，存活率比較高的細胞系，培養(yǎng)基、血清、DMSO按照7：2：1的比例新鮮配制使用。細胞計數(shù)后，用配制好的細胞凍存液重懸細胞，至5×10^6~1×10^7cells/mL，然后1~1.5mL/管分裝凍存。對于存活率較低的細胞系，或者需要長時間保存的細胞系，可以增加凍存液中的血清濃度，血清和DMSO按9：1的比例配制。另外，還有商品化的無血清凍存液可以選擇，不需要預先配制。一般會含有多種保護劑成分

你知道核酸提取加蛋白酶K有什么好處嗎？2022/09/21

隨著新/冠疫情的發(fā)展，新/冠病毒核酸的檢測工作已趨于常態(tài)化。而優(yōu)質(zhì)的核酸提取試劑是核酸檢測的基礎(chǔ)，正確提取核酸才能保證下游檢測結(jié)果的質(zhì)量。市場上核酸提取的試劑成分雖然各有差別，但蛋白酶K由于其獨/特的廣譜蛋白水解酶活性和穩(wěn)定性，目前已成為了多種提取試劑的重要原料。另外，在臨床實踐中，特別是我國目前正在推行20混1檢測的場景下，難免會遇到復雜樣本（例如含有“痰液”的樣本）；而蛋白酶K在處理特殊樣本時，更能突顯出作用。蛋白酶K廣泛應用于核酸提取蛋白酶K來源于林伯氏白色念球菌，是一種絲氨/酸蛋白酶，具

細胞分裂時，里面的家當怎么分？2022/09/21

你知道自己多久換一套皮膚嗎？對，你沒聽錯，不是王/者農(nóng)藥的皮膚，就是你身體表面如假包換的皮膚。答案是：一個月。不光如此，此時此刻你的胃，跟一星期前已經(jīng)不是一個胃了；你肺里的氣管，跟兩個月前也已經(jīng)不是同一套氣管了。事實上，人體內(nèi)大多數(shù)器官和組織，時刻都在發(fā)生細胞分裂，用新生細胞替代衰老細胞。據(jù)估計，人體內(nèi)有30萬億個細胞，每天會發(fā)生兩萬億次細胞分裂。也就是說，如果細胞分裂一次要收你一塊錢，一天就能收光4.5個馬云的身家資產(chǎn)。那么問題來了，細胞分裂時，里面的家當怎么分？科學家發(fā)現(xiàn)，每一次細胞分裂，都

干細胞超全的科普，科研人快馬??！2022/09/21

「1」什么是干細胞？干細胞存在于人體哪些地方？Whatarestemcells干細胞是具有自我復制、多向分化和歸巢潛能的原始細胞，是機體的起源細胞，是形成人體各種組織、器官的始祖細胞。如同一棵樹干，可以長出樹杈、樹葉、開花和結(jié)果一樣?，F(xiàn)如今科學家已經(jīng)成功從許多器官或組織中分離出了干細胞，其中包括視網(wǎng)膜干細胞、胰腺干細胞、成骨干細胞等。研究表明，干細胞不僅存在于胚胎，而且存在于成人體內(nèi)，可以從臍血、臍帶、胎盤、骨髓、脂肪、血液等組織中分離出相應的干細胞?！?」干細胞從何而來？Stemcellsco

藥物分析中的雜質(zhì)到底哪里來的？2022/09/20

為了保證APIs及制劑的質(zhì)量，必須在工藝開發(fā)、優(yōu)化和工藝轉(zhuǎn)化中必須仔細監(jiān)控雜質(zhì)。法規(guī)和國際指導原則更加關(guān)注原料藥中雜質(zhì)的分離、鑒定和控制。今天咱們就根據(jù)具體實例列舉了不同類型雜質(zhì)和不同來源雜質(zhì)的情況。1、雜質(zhì)的定義和來源不純物可定義為目標成分與外來物的混合物或本身劣質(zhì)的物質(zhì)。往往是最終的制備工藝對原料藥的成本具有重大影響。產(chǎn)量、物理特性、化學純度是API生產(chǎn)、制劑處方、制劑生產(chǎn)中需要重點考慮的地方。作為新藥申請的一部分，申請人必須向FDA提交原料藥和制劑的生產(chǎn)和過程控制。如果生產(chǎn)批次不符合純度和

植物葉綠素作用及檢測方法2022/09/20

讓植物呈現(xiàn)綠色的物質(zhì)稱之為葉綠素。這是一種在所有植物中都存在的天然色素，但作用卻遠遠超過著色。植物葉綠素廣泛存在于綠色植物組織中，其含量與光合作用、營養(yǎng)狀況密切相關(guān)，是反應植物生長狀況的重要指標。葉綠素還吸收太陽能并轉(zhuǎn)換成植物生命需要的能量。正如血液是人體重要組成部分一樣，葉綠素也是植物不/可缺少的部分。植物沒有它就會死亡。葉綠素是鮮活綠色果蔬的代表色素。在植物細胞中，葉綠素與蛋白質(zhì)結(jié)合成葉綠蛋白存在，使之呈現(xiàn)綠色。當細胞死亡后，葉綠素則從葉綠體中游離出來。在正常生長發(fā)育的果品中，葉綠素的合成作

配制標準溶液為什么要標定？溶液的標定與配制！2022/09/20

配制標準溶液為什么要標定溶液配制后要標定的原因，配置出來的溶液是一個初步含量，濃度值還沒有達到真實值，為了讓滴定液的濃度更接近真實值所以需要用基準物質(zhì)進行標定。標定，主要是指使用標準的計量儀器對所使用儀器的準確度進行檢測是否符合標準，一般大多用于精密度較高的儀器。標定也可以認為是校準。直接標定為準確稱取一定量的基準物，溶于水后用待標定的溶液滴定，至反應*。根據(jù)所消耗待標定溶液的體積和基準物的質(zhì)量，計算出待標定溶液的準確濃度。標準溶液就是已確定其主體物質(zhì)濃度或其他量值的溶液。不同的情況需使用不同的