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原代細(xì)胞培養(yǎng)中常見的一些錯(cuò)誤2021/12/13: 原代細(xì)胞（primaryculturecell）是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。原代細(xì)胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究，如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學(xué)研究等，還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。原代細(xì)胞如何進(jìn)行培養(yǎng)？常用的原代細(xì)胞培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。分散細(xì)胞培養(yǎng)大致步驟為：將動(dòng)物組織從機(jī)體中取出離散成單個(gè)細(xì)胞（常用胰蛋白酶），置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖（注意整個(gè)過程

培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)都有哪些分類？2021/12/10: 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中，困難的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。⑴血清：動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血清。常用的是小牛血清。血清提供生長(zhǎng)必需因子，如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。在這里，血清等于是動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)的天然營(yíng)養(yǎng)液。⑵支持物：大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞有貼壁生長(zhǎng)的習(xí)慣。離體培養(yǎng)常用玻璃，塑料等作為支持物。⑶氣體交換：二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié)，不斷維持所需要的氣體條件。植物細(xì)胞培養(yǎng)⑴光照：離體培養(yǎng)的植物細(xì)胞對(duì)光照條件不甚嚴(yán)格，因?yàn)榧?xì)胞生長(zhǎng)所需要的物質(zhì)主要是靠

細(xì)胞傳代培養(yǎng)的操作步驟和注意事項(xiàng)2021/12/09: 原代細(xì)胞培養(yǎng)成功以后，需要進(jìn)行分離培養(yǎng)，否則細(xì)胞會(huì)因生存空間不足或密度過大，營(yíng)養(yǎng)障礙，影響細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞允許培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增(形成細(xì)胞株)，可以進(jìn)行細(xì)胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細(xì)胞和分化特征。傳代細(xì)胞形成細(xì)胞株的da利處在于提供了大量持久的實(shí)驗(yàn)材料，便于實(shí)驗(yàn)。1.操作步驟（1）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。（2）向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。（3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進(jìn)

細(xì)胞培養(yǎng)全攻略，看這一篇就夠了2021/12/08: 1細(xì)胞的復(fù)蘇【概述】復(fù)蘇細(xì)胞要求快速融化的手段，這樣可以讓細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化。避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損害。【用品】培養(yǎng)液、吸管、離心管、培養(yǎng)瓶【步驟】[1]打開水浴鍋，將溫度調(diào)至37℃；[2]從液氮中取出凍存的細(xì)胞株，用鑷子夾住凍存管（戴防護(hù)面罩），迅速置入37℃的水浴鍋中，不斷振搖凍存管，使之盡快融化，要在1-2min內(nèi)完成復(fù)溫；[3]血清融化后，取出凍存管，移至超凈工作臺(tái)，用75%酒精擦洗消毒，用無菌吸管吸取細(xì)胞懸液移至無菌離心管，加10倍的含1

血清的種類和用途你都了解嗎？2021/12/07: 1、透析血清分子量小于10,000的分子如氨基酸、葡萄糖、鹽離子和未結(jié)合的蛋白均被移除。透析血清主要用在進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)定特定成分進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)中。2、碳吸附血清使用活性和右旋糖苷去除血清中的親脂類(lipophilic)物質(zhì)，如某些激素、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等，去除作用對(duì)分子量大小并無區(qū)分。碳吸附胎牛血清常用于體外培養(yǎng)研究驗(yàn)證激素的作用效果。3、去外泌體血清適用于收集細(xì)胞分泌的外泌體時(shí)使用。4、低IgG血清用于研究抗體、病毒和病毒反應(yīng)、細(xì)胞表面抗原表位。5、四環(huán)素血清應(yīng)用于使用敏感四環(huán)素誘導(dǎo)

影響細(xì)胞株生長(zhǎng)的因素有哪些？2021/12/06: 細(xì)胞株在體外進(jìn)行培養(yǎng),失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制,因此,除滿足營(yíng)養(yǎng)的要求外,還必須使細(xì)胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境.外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長(zhǎng).一、溫度：一般哺乳類及禽類細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃.溫度過高或過低都會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng).細(xì)胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強(qiáng),在低溫下,細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時(shí),雖影響細(xì)胞代謝,但并無傷害作用.把細(xì)胞置于23~25℃時(shí),細(xì)胞仍能生存和生長(zhǎng),但速度減緩,不過,魚類細(xì)胞的適宜培養(yǎng)溫度為23~25℃.若溫度過

怎么養(yǎng)好細(xì)胞？2021/12/03: 把細(xì)胞養(yǎng)好的三個(gè)關(guān)鍵要素是：良好的細(xì)胞來源，正確的實(shí)驗(yàn)操作，以及合適的培養(yǎng)體系。其中“合適的培養(yǎng)體系”就是要?jiǎng)?chuàng)造適合細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境，給細(xì)胞建立個(gè)滿意的“家”。細(xì)胞培養(yǎng)基本條件：1.合適的細(xì)胞培養(yǎng)基合適的細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的重要的條件之，培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。2.優(yōu)質(zhì)血清目，大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中重要的成分之，含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的多種生長(zhǎng)因子及其它營(yíng)養(yǎng)成分。3.無菌無毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境無菌無毒的操

細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)小黑點(diǎn)是什么原因如何解決？2021/12/01: 在細(xì)胞培養(yǎng)中?？梢姷郊?xì)胞及培養(yǎng)液中有一些大小不等、形態(tài)不同的黑色未知顆粒，去網(wǎng)上查詢得到的答案也多種多樣。那么這些小黑點(diǎn)究竟是什么？我們又該怎么去應(yīng)對(duì)這種情況？非生物類細(xì)胞碎片類在細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候，由于細(xì)胞代謝、物質(zhì)交換、周邊環(huán)境變化，尤其是在從37度培養(yǎng)箱中拿出來觀察的過程中，由于液體培養(yǎng)基的比熱較大，液內(nèi)溫度高于外界溫度，造成冷熱交換、小范圍內(nèi)形成液體流動(dòng)加劇，當(dāng)然這些小碎末就會(huì)被攪動(dòng)起來形成似乎“游動(dòng)”的感覺；隨著細(xì)胞培養(yǎng)的繼續(xù)，部分細(xì)胞開始衰亡，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破裂，破裂之后的細(xì)胞內(nèi)容物泄露到培

特級(jí)胎牛血清的功效和注意事項(xiàng)2021/11/30: 特胎牛血清清需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月.由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱,必須預(yù)留定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选Ｑ逶趧?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中起著多方面的作用可以概括為:①提供細(xì)胞生存和增殖所必需的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子。②補(bǔ)充基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量不足的營(yíng)養(yǎng)成分。③含有些可供貼壁細(xì)胞型細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的基質(zhì)成分。④提供載體蛋白，可結(jié)合維生素、脂質(zhì)、金屬離子等。⑤在些情況下，中和毒性物質(zhì)保護(hù)細(xì)胞不受傷害。⑥給培養(yǎng)液提供良好的

如何正確的操作細(xì)胞凍存？2021/11/29: 1.冷凍保存方法:(1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4C10分鐘---20C30分鐘---80C16~18小時(shí)(或隔夜)--液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20C不可超過1小時(shí)，以防止胞內(nèi)冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80C冰箱中，惟存活率稍微降低些。(2)程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3C/分鐘之速度由室溫降至(-80C以下)-120C，再放在液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。(3)HAKATA無血清細(xì)胞凍存：加

如何選擇合適的胎牛血清?2021/11/26: 由于胎牛血清來源的特殊性，這使得選擇血清也成為了門技術(shù)活。那么如何來甄別和選擇血清呢？1.看產(chǎn)地受供體飼養(yǎng)環(huán)境、生產(chǎn)工藝等因素的影響，原產(chǎn)澳洲、新西蘭的血清是目品質(zhì)較高的血清來源。雖然北美洲的血清質(zhì)量也較高，但受yi情及國(guó)家進(jìn)口政策的限制，目尚無正規(guī)渠道購(gòu)買北美的血清產(chǎn)品。2.看外觀1）顏色：根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對(duì)血清質(zhì)量并無直接影響，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)檎嬲奶ヅＱ迥δ?

細(xì)胞凍存有哪些注意事項(xiàng)？2021/11/25: 很多人覺得細(xì)胞凍存很簡(jiǎn)單，但是有些注意事項(xiàng)操作不好會(huì)影響或是損壞細(xì)胞的質(zhì)量哦，今天就來給大家總結(jié)下，凍存細(xì)胞的相關(guān)注意事項(xiàng)。注意事項(xiàng):1.欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好(logphase)且存活率高之狀態(tài)，約為80~90%致密度。冷凍檢則細(xì)胞是否仍保有其*性質(zhì)，例如hybridoma應(yīng)在冷凍保存至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。2.細(xì)胞在液氮中可長(zhǎng)期凍存無*，而不會(huì)影響細(xì)胞活力;在-70度可保存數(shù)月。3.注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DISO應(yīng)為試劑等，無菌且無色以0.22micronFGLPTelflon過濾

細(xì)胞培養(yǎng)常用的試劑有那些?2021/11/24: 1.谷氨酰胺使用方法是什么？答：谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中單獨(dú)配制，置-20℃冰箱中保存，用加入培養(yǎng)液中。2.碳酸氫鈉在室溫條件存放是否穩(wěn)定？答：碳酸氫鈉白色粉末，或不透明單斜晶系細(xì)微結(jié)晶。比重2.159。無臭、味咸，可溶于水，微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微堿性，受熱易分解，在65℃以上迅速分解，在270℃時(shí)*失去二氧化碳，在干燥空氣中無變化，在潮濕空氣中緩慢分解。3.培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢的原因有哪些？其解決辦法有哪些？答：可能得原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清

細(xì)胞培養(yǎng)中為什么要加入胎牛血清？2021/11/23: 一、胎牛血清的功能血清的成分十分復(fù)雜，既有協(xié)助物質(zhì)運(yùn)輸?shù)牡鞍?、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的激素和因子等，正因?yàn)檠暹@種天然成分的復(fù)雜性，使得血清在細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)揮了多種功能：1.提供維持細(xì)胞生長(zhǎng)的激素，促進(jìn)所培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)；2.彌補(bǔ)基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或含量很少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；3.提供結(jié)合蛋白，促進(jìn)細(xì)胞識(shí)別和利用維生素、脂類和其他激素等；4.某些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用；5.促進(jìn)細(xì)胞貼壁，提供可促進(jìn)細(xì)胞鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)的因子；6.起酸堿度緩沖液作用；7.提供蛋白酶抑制劑

血清常見出現(xiàn)的問題匯總2021/11/22: 1.如何貯存和凍結(jié)血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?答：將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但有必要注意的是，融解過程中有必要規(guī)矩地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)刻貯存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而構(gòu)成沉積或可見的混濁。因而，推薦在-20℃以下貯存血清，并防止反復(fù)凍融。主張血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過個(gè)月。若次無法用完瓶，主張無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2.血清中包含絮狀沉積，它們是什么，怎樣

細(xì)胞收到后需要注意些什么問題2021/11/19: 一.收到細(xì)胞株包裹時(shí)，請(qǐng)檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請(qǐng)立即通知。細(xì)胞株請(qǐng)盡速開始培養(yǎng)，或立即冷凍保存(置于–70°C，隔夜后，移到liqN2)。二.冷凍細(xì)胞解凍程序:1.依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單上基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它zhi定之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類，若因?qū)嶒?yàn)需要，必須有所不同時(shí)，務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行所需之實(shí)驗(yàn)。2.FBS(fetalbovineserum,胚牛血清),CS(calfseru

細(xì)胞培養(yǎng)需要哪些條件？2021/11/18: 1．無菌環(huán)境無毒和無菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的要條件。細(xì)胞在活體內(nèi)，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過程中，缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)而喪失對(duì)微生物的防御能力和對(duì)有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細(xì)胞能在體外環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖，必須要確保無菌工作區(qū)域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。常見的微生物污染有支原體、細(xì)菌、真菌。支原體無致死毒性，可與細(xì)胞長(zhǎng)期共存，對(duì)細(xì)胞有潛在影響，但體積小，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)菌增殖快，在短時(shí)間

如何選擇安全的胎牛血清？2021/11/17: 血清可以為細(xì)胞生長(zhǎng)提供必要的營(yíng)養(yǎng)支持，大部分的細(xì)胞培養(yǎng)都需要用到血清。很多朋友日常的工作學(xué)習(xí)都在與這些動(dòng)物血清打交道，那么你有沒有關(guān)注過這些產(chǎn)品的生物安全問題呢？血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和生長(zhǎng)因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。但是作為血清制品，難以避免的就是面臨生物安全相關(guān)的問題。近些年來，生物安全問題受到廣

細(xì)胞培養(yǎng)中血清起到什么作用?2021/11/16: 1.提供結(jié)合蛋白：作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì),在細(xì)胞代謝過程中起重要作用。2.提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。3.提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸維生等是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。4.提供激素和各種生長(zhǎng)因子。5.對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。針對(duì)第五個(gè)原因,我們來重點(diǎn)談?wù)?有些細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用.這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用.上海恒遠(yuǎn)公司技術(shù)員分析,這是因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳

細(xì)菌污染的原因有哪些？2021/11/15: 污染向來是在細(xì)胞培養(yǎng)中的大問題。預(yù)防或治理污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵因素。我們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)時(shí)，在開始階段就要十分重視污染問題，否則會(huì)功盡棄，這樣不僅浪費(fèi)時(shí)間，也會(huì)浪費(fèi)人力、物力。(一)有哪幾類污染？在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染不只是指微生物，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的、對(duì)細(xì)胞生存有害或造成細(xì)胞不純的物質(zhì)，包括生物和化學(xué)物質(zhì)。1、細(xì)菌污染細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染，即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素，也可能因?yàn)椴僮鞑簧鞫鹞廴尽Ｒ姷挠懈锾m氏陽(yáng)性菌，如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌，

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