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科研實驗用品的種類和作用2022/01/12: 1.實驗用品種類︰1.1.細(xì)胞培養(yǎng)實驗用品均為無菌，除了玻璃容器與pasteurpipet外，其它均為塑料無菌制品。1.2.TC級培養(yǎng)盤表面均有coating高分子物質(zhì)以讓細(xì)胞吸附，培養(yǎng)容器種類有Tflask，plates,dishes,rollerbottle等，依實驗需要使用。1.3.plasticsterilepipet:1ml,2ml,5ml,10ml,25ml1.4.塑料離心管:15ml,50ml，均有2種不同材質(zhì)，其中polypropylene(PP)為不透明材質(zhì)，polystyre

如何進(jìn)行細(xì)胞凍存與復(fù)蘇？2022/01/11: 為什么要進(jìn)行細(xì)胞凍存？細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分

細(xì)胞解凍過程中，存活率低怎么辦？2022/01/10: 出現(xiàn)低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：1.解凍過程中細(xì)胞裂解推薦的解決方案：可預(yù)期到一定量的細(xì)胞死亡，因此細(xì)胞的濃度應(yīng)足夠高，考慮到這一損失。起始濃度為106至107細(xì)胞/毫升。2.解凍過程中的問題推薦的解決方案：在-70℃至-80℃下保存冷凍的培養(yǎng)物，保存時間為1-5天，但這不是保存的優(yōu)先方法。在37℃充分解凍后應(yīng)立即開始培養(yǎng)。3.對冷凍液過敏推薦的解決方案：A.*或部分更換培養(yǎng)基，減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在24小時后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。B.留出更多時間供培養(yǎng)物恢復(fù)。有時細(xì)胞需要

細(xì)胞凍存的注意事項2022/01/07: 一、怎樣凍存動物細(xì)胞?細(xì)胞冷凍過程有四個要點：細(xì)胞的收獲、保護(hù)劑的使用、冷凍速率和儲存環(huán)境。(1)細(xì)胞的收獲用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿90%的時候，這時細(xì)胞生長狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前24小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時方法和平時一樣，用100xg離心5分鐘收集細(xì)胞再重懸，活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是400-1000萬細(xì)胞/ml)，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。(2)保護(hù)劑的使用細(xì)胞凍

培養(yǎng)基常見問題匯總2022/01/06: 1.怎樣查到一個特定細(xì)胞株的相關(guān)知識和培養(yǎng)條件？ATCC（AmericanTypeCultureCollection）收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料。打開ATCC網(wǎng)頁的Cellsandhybridomas鏈接，輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫。數(shù)據(jù)庫中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述，包括細(xì)胞的來源，培養(yǎng)和凍存條件，以及相關(guān)文獻(xiàn)等資料。2.如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣容易生長?？傊?，優(yōu)先MEM、DMEM做貼壁細(xì)胞培

間質(zhì)干細(xì)胞的表面抗原和培養(yǎng)原理2022/01/05: 間質(zhì)干細(xì)胞的表面抗原通過流式細(xì)胞儀分析，間充質(zhì)干細(xì)胞特異性表面抗原有：SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、CD124。BMSC：是骨髓中除HSC以外的非造血性干細(xì)胞，骨髓中絕大多數(shù)是HSC，BMSC只占骨髓有核細(xì)胞的0.001%～0.01%。因此鑒定BMSC的方法是在骨髓的干細(xì)胞中排除HSC——BMSC：CD45-、CD34-、CD29+、CD14+/HSC：CD34+。間質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)原理概述間質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstemcell，MS

抗體的儲存條件2022/01/04: 抗體由于性質(zhì)和所使用的儲存條件不同，其存儲的“保質(zhì)期”可能從幾周到幾年不等。盡管每個抗體存儲的最佳條件是*的，但我們還是能夠總結(jié)出一些關(guān)于抗體存儲建議和一般準(zhǔn)則?？贵w的儲存時間取決于抗體固有的性質(zhì)和儲存條件?？贵w（尤其是酶）必須存放在適當(dāng)?shù)臏囟群蚿H值范圍。為了維持蛋白質(zhì)的活性、防止其聚集，經(jīng)常保存在一定濃度的甘油，蔗糖，或類似的物質(zhì)里面。1、低溫儲存對于抗體的保存至關(guān)重要一般來說，抗體最好存放在≤4℃的清潔，滅菌的玻璃或塑料管。貯存在室溫下通常會由于微生物的生長導(dǎo)致抗體退化和/或失活?？贵w儲存

細(xì)胞培養(yǎng)過程中添加劑起什么作用？2021/12/31: 能量來源：谷氨酰胺L－谷氨酰胺是一種氨基酸，細(xì)胞的重要能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。同時L-谷氨酰胺不穩(wěn)定，在中性的水溶液中會自發(fā)降解；降解產(chǎn)物對細(xì)胞有毒性（對干細(xì)胞，原代細(xì)胞影響尤其大）。能影響細(xì)胞活性、蛋白表達(dá)水平及糖基化模式等。那如何解決呢？方案有二：選擇不含谷氨酰胺的培養(yǎng)基，自己添加選擇穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物經(jīng)過科學(xué)家不斷努力，終于找到了穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物：glutaGRO。它有何方功能呢？原來，它是由L-丙氨酸和L-谷氨酰胺縮合形成的二肽，穩(wěn)定性高，可在室溫下保存，2年穩(wěn)定（谷

無血清培養(yǎng)基的知識與應(yīng)用2021/12/30: 1、基本介紹無血清培養(yǎng)基是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比，既能滿足細(xì)胞在體外長時間培養(yǎng)的要求，又能避免動物血清所帶來的不利因素。無血清培養(yǎng)基的發(fā)展歷程一般分為無血清培養(yǎng)基（Serum-FreeMedium，SFM）、無動物源培養(yǎng)基（AnimalComponentFreeMedium，ACFM）、無蛋白培養(yǎng)基（Protein-FreeMedium，PFM）及化學(xué)成分限定培養(yǎng)基（ChemicallyDefinedMedium，CDM）等四類。這里所提到的主要指第一類無血清培養(yǎng)基。

如何預(yù)防干細(xì)胞老化？2021/12/29: 干細(xì)胞老化的表現(xiàn)細(xì)胞胞漿內(nèi)特別是在核區(qū)附近出現(xiàn)黑色顆粒，表示細(xì)胞開始出現(xiàn)老化；細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡，則表明該細(xì)胞已老化或者已經(jīng)開始分化（在全部細(xì)胞中出現(xiàn)少數(shù)老化細(xì)胞是正常的）；細(xì)胞立體感逐漸消失，細(xì)胞間的間隔不清，部分細(xì)胞扁平狀，細(xì)胞的形狀趨向多樣；貼壁性減退，出現(xiàn)一些漂浮的細(xì)胞；部分分泌強(qiáng)的細(xì)胞分泌物增多，細(xì)胞表面會比較臟；細(xì)胞增殖速度明顯下降，分裂相的細(xì)胞明顯減少。干細(xì)胞老化的原因和預(yù)防1)接種密度的影響：部分干細(xì)胞具有一定的分泌性能，能夠分泌一些對細(xì)胞有支持能力的因子類物質(zhì)；所以必須維持一定

血清出現(xiàn)沉淀如何處理？2021/12/28: 血清沉淀是什么？血清中經(jīng)常會出現(xiàn)肉眼可見的沉淀，其成分有多種類型，產(chǎn)生的原因有很多，主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。1.纖維蛋白（Fibrin）血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中，血清采集、過濾（3次0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成,此時血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后,血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集，形成肉眼可見的沉淀。2.磷酸鈣（CalciumPhosphate）這是一種常見的沉淀成分，通常會造成血清出現(xiàn)云霧狀

細(xì)胞培養(yǎng)時如何適應(yīng)無血清培養(yǎng)基？2021/12/27: 許多細(xì)胞系容易適應(yīng)無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基，而對環(huán)境要求過高的其它細(xì)胞卻難以適應(yīng)變化，這就需要更為專業(yè)的方法來適應(yīng)變化。而根據(jù)細(xì)胞系的特性，有兩種方法可使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。第一種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法；另一種方法是直接適應(yīng)。一、連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法第一種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法。通過一系列的血清還原步驟，使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。這是優(yōu)先選用的方法，且不對細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境形成太過惡劣的變化。連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法——方法1使原培養(yǎng)基內(nèi)的細(xì)胞連續(xù)地經(jīng)過以下幾個階段：階段1：75%補(bǔ)加血清的培養(yǎng)

使用胰酶時，有哪些注意事項2021/12/24: 胰酶的作用原理是什么呢？胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上和培養(yǎng)皿結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時細(xì)胞在自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力的作用下成為球形。使用胰酶時需注意哪些細(xì)節(jié)問題？在使用胰酶（Trypsins）細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差，做流式時的CDMarker也可能會下降。胰酶進(jìn)行分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用

細(xì)胞培養(yǎng)問題匯總答疑2021/12/23: 復(fù)蘇細(xì)胞的正確打開方式？復(fù)蘇過程應(yīng)快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結(jié)晶。凍存細(xì)胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在1分鐘內(nèi)全部融化（不要超過3分鐘）。解凍后的細(xì)胞可以直接接種到含有*培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng)，24小時后再用新鮮*培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。如果細(xì)胞對冷凍保護(hù)劑特別敏感，解凍后的細(xì)胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護(hù)劑，然后再接種到含*生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。注：操作時戴好手套，防止凍傷；帶上防護(hù)眼鏡可以防止液氮罐里剛剛拿出來的管子液氮爆炸

細(xì)胞培養(yǎng)不好怎么辦？2021/12/22: 培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因1.胰蛋白酶消化過度；2.支原體污染；3.培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；4.細(xì)胞老化；5.接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。解決方法1.縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；2.分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；3.使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2；4.啟用新的保種細(xì)胞；5.調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。懸浮細(xì)胞成簇可能原因1.培養(yǎng)液中含鈣,鎂離子；2.支原體污染；3.蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解；4.DNA污染。解決方法1.用無鈣

細(xì)胞培養(yǎng)遇到支原體污染，應(yīng)當(dāng)怎么應(yīng)對？2021/12/20: 細(xì)胞培養(yǎng)物被支原體污染是極普遍的問題，面對支原體污染給細(xì)胞培養(yǎng)帶來的巨大難題，世界各國開始重視，并相繼建立了細(xì)胞庫，對細(xì)胞質(zhì)量進(jìn)展控制，支原體污染的問題得以限制。目前已知能污染細(xì)胞的支原體有20多種以上，其中95％以上的支原體污染是口腔支原體。目前已知的主要污染源是動物血清、胰酶和已污染培養(yǎng)物的氣溶膠，例如，豬鼻支原體通過胰酶，在消化細(xì)胞時進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)物，并造成污染。在原代細(xì)胞與傳代細(xì)胞的檢測中，原代細(xì)胞與傳代細(xì)胞分離出支原體的頻率是有明顯差異的，傳代次數(shù)越多的細(xì)胞，污染支原體的可能性就越大，這

碳吸附胎牛血清的特點和作用2021/12/17: 碳吸附型血清是一款低水平類固醇類的血清產(chǎn)品，通過碳吸附可降低血清中許多激素及生長因子的濃度，如雌二醇、皮質(zhì)醇、皮質(zhì)酮、B類維生素、T3、T4、前列腺素等，該血清適用于上述一些分子可能干擾實驗結(jié)果的實驗中對于那些需要這些分子的細(xì)胞培養(yǎng)，可能降低細(xì)胞生長性能。【產(chǎn)品特性】1、內(nèi)毒素含量低，三次納米級過濾2、嚴(yán)格控制批次差異3、來源可靠、可溯源4、每個批次提供相應(yīng)檢驗檢疫報告5、適合各種常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)6、干冰運(yùn)輸，建議存儲溫度為-20℃至-10℃血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組

細(xì)胞生長緩慢有哪些影響因素？2021/12/16: 細(xì)胞生長緩慢是實驗人員在培養(yǎng)細(xì)胞時常遇見的問題，那么究竟是哪些因素影響？又如何改善呢？一.個別人的培養(yǎng)體系出現(xiàn)問題1.檢查你所培養(yǎng)的細(xì)胞是否存在污染。（a）如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素(必須添加!),細(xì)胞污染則是不可避免的。1）用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查2）如果細(xì)胞被污染則要棄掉。（b）由于支原體污染不容易覺察到，因此必須定期檢測（c）檢測可能污染的途徑和原因2.檢查你用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10X儲存液，而現(xiàn)在購買的培養(yǎng)基更換為1X液體，而隨

培養(yǎng)細(xì)胞的時候出現(xiàn)黑膠蟲污染怎么辦？2021/12/15: “黑膠蟲”可寄生于動物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代?？梢姟昂谀z蟲”是一種異養(yǎng)生物。我們在細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑膠蟲后污染怎么辦？下面有幾個處理建議，我們一起來了解下吧！1．換好一點的血清，這樣可以有效減少“小黑點”的形成。一般的血清都不要去滅活處理，為什么呢？因為經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱滅活

雙抗和胰酶的使用方法2021/12/14: 雙抗一、什么是雙抗？青霉素加上鏈霉素，俗稱“雙抗”。二、培養(yǎng)液中需要加入雙抗嗎？加不加雙抗不是絕對的，視實際情況而定。如果你實驗室條件足夠好，如果你操作足夠規(guī)范，就盡量不要加雙抗了。相反，如果你實驗條件不夠，操作也沒有絕對把握，還是加的好。好的方法是做個實驗對照，看有沒有必要加雙抗。三、如何加雙抗？加在DMEM里，因為如果是直接在換液傳代滴加的話，那個雙抗的濃度實在不好控制，如果加多了話對細(xì)胞毒性太大，如果擔(dān)心時效，可以Z在培養(yǎng)液配好后分裝于100ml的小玻璃瓶中，在每啟用一瓶之前加，加了之后應(yīng)

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