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細(xì)胞凍存操作步驟2022/03/15: 細(xì)胞凍存操作步驟：1、預(yù)先配制凍存液：凍存液比例多種，根據(jù)細(xì)胞的特性進(jìn)行調(diào)整凍存液的比例：5%—10%DMSO+20%—90%血清+0%—70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液；2、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗1-2次；去掉培養(yǎng)瓶里的殘余血清；3、加入適量胰酶（濃度一般為0.25%），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶，放入培養(yǎng)箱消化；4、細(xì)胞消化0.5-2min（具體時(shí)間根據(jù)鏡下形態(tài)判斷），顯微鏡下觀察細(xì)胞，細(xì)胞胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間不再連接成片，此時(shí)加入*培養(yǎng)基終止消化；5、用巴氏吸管輕輕吹打細(xì)胞，形成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞

?抗體的特異性免疫反應(yīng)有幾種2022/03/07: 抗體是由各種抗原激活淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞進(jìn)一步分化成熟為漿細(xì)胞而產(chǎn)生的，是機(jī)體的特異性免疫反應(yīng)，抗原可以包括以下幾種：第一、各種病原微生物感染之后，微生物的表面的蛋白可以作為抗原激活體內(nèi)的淋巴細(xì)胞，產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗體；第二、可以是致敏原，這種致敏原進(jìn)入到體內(nèi)之后可以產(chǎn)生抗體IgE，等到再次接觸過(guò)敏原的時(shí)候可以引起過(guò)敏反應(yīng)，即變tai反應(yīng)；第三、先天存在的，比如ABO血型的抗原，所以針對(duì)ABO血型的抗體也是先天存在的，一般是IgM抗體，對(duì)于病原微生物進(jìn)入到體內(nèi)之后可以產(chǎn)生兩種抗體，一種是I

簡(jiǎn)介蛋白定量主要的兩種方法2022/03/01: 蛋白定量的方法有很多種，應(yīng)用較多的主要有兩種：BCA蛋白定量檢測(cè)法和Bradford蛋白定量檢測(cè)法，市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測(cè)方法而開(kāi)發(fā)的。兩種方法均需配制蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，蛋白與定量試劑經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的反應(yīng)（BCA法反應(yīng)為37℃、20-30min，Bradford法反應(yīng)一般為37℃，5min），酶標(biāo)儀讀取樣品的OD值，繪制的蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算WB蛋白的濃度。兩種檢測(cè)方法相比BCA法，Bradford法不僅節(jié)省反應(yīng)時(shí)間，也無(wú)需配置反應(yīng)試劑，簡(jiǎn)單、快速、好用，推薦Bradford

細(xì)胞因子根據(jù)主要功能分類2022/02/22: 1.白細(xì)胞介素(interleukin,IL)1979年開(kāi)始命名。由淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞或其它非單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，在細(xì)胞間相互作用、免疫調(diào)節(jié)、造血以及炎癥過(guò)程中起重要調(diào)節(jié)作用，凡命名的白細(xì)胞介素的cDNA基因克隆和表達(dá)均已成功，已報(bào)道有三十余種(IL-1―IL-38)。2.集落刺激因子(colonystimulatingfactor,CSF)根據(jù)不同細(xì)胞因子刺激造血干細(xì)胞或分化不同階段的造血細(xì)胞在半固體培養(yǎng)基中形成不同的細(xì)胞集落，分別命名為G(粒細(xì)胞)-CSF、M(巨噬細(xì)胞)-CSF、GM

單克隆抗體的制備凍存及純化2022/02/15: 單克隆抗體的制備和凍存：篩選出的陽(yáng)性細(xì)胞株應(yīng)及早進(jìn)行抗體制備，因?yàn)槿诤霞?xì)胞隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，發(fā)生污染、染包體丟失和細(xì)胞死亡的機(jī)率增加?？贵w制備有兩種方法。一是增量培養(yǎng)法，即將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)液中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設(shè)備，一般應(yīng)用無(wú)血清培養(yǎng)基，以利于單克隆抗體的濃縮和純化。*普遍采用的是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠，先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射，一周后將雜交瘤細(xì)胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周后即有明顯的腹水產(chǎn)生，每只小鼠可收集5～10ml的腹

穩(wěn)定細(xì)胞株篩選2022/01/27: 方法一：先把質(zhì)粒整合到染色體上后，用相應(yīng)的質(zhì)粒DNA中的抗性標(biāo)志來(lái)篩選該細(xì)胞系，單克隆篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。第一步：篩選濃度測(cè)定，以10~14天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；第二步：進(jìn)行細(xì)胞接種，轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長(zhǎng)率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)到60%~80%覆蓋；第三步：進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染第四步：利用質(zhì)粒上含有的抗性選擇進(jìn)行篩選，并鑒定篩選結(jié)果。方法二：應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒轉(zhuǎn)染，篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。慢病毒可以攜帶外源基因隨機(jī)整合進(jìn)基因組。轉(zhuǎn)染得到穩(wěn)定

冷凍切片實(shí)驗(yàn)操作步驟及注意點(diǎn)2022/01/20: 操作步驟：1、取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍臺(tái)上冰凍，用吸熱器壓住組織，至包埋劑與組織凍結(jié)成白色冰體即可切片（1~3分種）。2、將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機(jī)持承器上，啟動(dòng)粗進(jìn)退鍵，轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕，將組織修平。3、調(diào)好欲切的厚度，根據(jù)不同的組織而定，原則上是細(xì)胞密集的薄切，纖維多細(xì)胞稀的可稍為厚切，一般在5～10μm間。4、調(diào)好防卷板。制作冰凍切片，關(guān)鍵在于防卷板的調(diào)節(jié)上，這就要求操作者要細(xì)心，準(zhǔn)確地將其調(diào)較好，調(diào)校至適當(dāng)?shù)奈恢?。切片時(shí)，以切出完整、平滑的切片為準(zhǔn)。切好的組織

小鼠鈣衛(wèi)蛋白elisa試劑盒試劑配制過(guò)程2022/01/11: 1、標(biāo)準(zhǔn)品(1)從試劑盒中取出支標(biāo)準(zhǔn)品，于6000-10000rpm離心30。用1ml樣本稀釋液溶解，并用吸頭對(duì)準(zhǔn)凍存管底部反復(fù)吸打5次以助溶解，充分混勻得到標(biāo)準(zhǔn)品S7，放置備用。(2)取7個(gè)1.5ml離心管(S0-S6)依次排列，各加入250μl樣本稀釋液。吸取250μl標(biāo)準(zhǔn)品S7到*個(gè)離心管中(S6)，輕輕吹打混勻。從S6中吸取250μl到第二個(gè)EP管中(S5)，輕輕吹打混勻。以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋。S0為樣本稀釋液。2、洗液工作液濃洗滌液按1:25倍用去離子水進(jìn)行稀釋。例如用量筒量取

小鼠細(xì)胞培養(yǎng)方法有哪些2022/01/05: 小鼠細(xì)胞培養(yǎng)方法：1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗-2次；②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；③-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；④將細(xì)胞懸液000RPM左右條件下離心4min，棄上清；⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；⑥懸浮細(xì)胞直接離心

逆轉(zhuǎn)錄RT-PCR具體操作步驟2021/12/27: 逆轉(zhuǎn)錄RT-PCR原理:提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo(dT)或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而獲得目的基因或檢測(cè)基因表達(dá)。RT-PCR使RNA檢測(cè)的靈敏性提高了幾個(gè)數(shù)量級(jí)，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。逆轉(zhuǎn)錄RT-PCR操作步驟：一、RNA逆轉(zhuǎn)錄cDNA（反應(yīng)體系要20ul）依次加入1、Oligo（dT）加入1ul。2、RNA（體積即上一步驟計(jì)算出來(lái)的）3、剩下的用無(wú)Rnase水補(bǔ)齊共12ul65℃水浴5m

為什么溫度是微生物生長(zhǎng)最重要影響因素2021/12/22: 微生物與所處的環(huán)境之間具有復(fù)雜的相互影響和相互作用:一方面,各種各樣的環(huán)境因素對(duì)微生物的生長(zhǎng)和繁殖有影響,另一方面,微生物生長(zhǎng)繁殖也會(huì)影響和改變環(huán)境.研究環(huán)境因素與微生物之間的關(guān)系,可以通過(guò)控制環(huán)境條件來(lái)利用微生物有益的一面,同時(shí)防止它有害的一面。溫度是影響微生物生長(zhǎng)的最重要因素之一。溫度對(duì)微生物的影響具體表現(xiàn)在：1、影響酶活性，溫度變化影響酶促反應(yīng)速率，最終影響細(xì)胞合成。2、影響細(xì)胞膜的流動(dòng)性，溫度高，流動(dòng)性大，有利于物質(zhì)的運(yùn)輸，溫度低，流動(dòng)性降低，不利于物質(zhì)運(yùn)輸，因此，溫度3、變化影響營(yíng)養(yǎng)物

介紹細(xì)胞因子受體相關(guān)常識(shí)2021/12/15: 細(xì)胞因子通過(guò)結(jié)合細(xì)胞表面相應(yīng)的細(xì)胞因子受體而發(fā)揮生物學(xué)作用。細(xì)胞因子和其受體的結(jié)合是細(xì)胞因子介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的啟動(dòng)刺激。已知的細(xì)胞因子受體絕大多數(shù)是跨膜蛋白，由胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞漿區(qū)組成。細(xì)胞因子與其受體結(jié)合后啟動(dòng)復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)分子間的相互作用，zui終引起細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄的變化，這一過(guò)程稱為細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。細(xì)胞因子和其受體的結(jié)合是細(xì)胞因子介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的啟動(dòng)刺激。已知的細(xì)胞因子受體絕大多數(shù)是跨膜蛋白，由胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞漿區(qū)組成。胞膜外區(qū)為識(shí)別結(jié)合細(xì)胞因子的部位，胞漿區(qū)啟動(dòng)受體激活后的信號(hào)

有關(guān)ELISA試劑盒使用操作方法2021/12/09: 在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以，有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的elisa試劑盒這次測(cè)定為陽(yáng)性，下次測(cè)定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。ELISA試劑盒操作方法：各種類型ELISA測(cè)定時(shí)一般需經(jīng)過(guò)這些步驟：固相包被→加待測(cè)樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→

簡(jiǎn)述ELISA基本原理2021/11/29: 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)?；驹硭捎每乖c抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶連接，然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測(cè)定。測(cè)定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：1、固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）2、酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）3、酶作用的底物（顯色劑）測(cè)量時(shí)，抗原（抗體）先結(jié)合在固相載體上，但仍

了解細(xì)胞培養(yǎng)中關(guān)鍵步驟2021/11/24: 1、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等。2、取材在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過(guò)程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動(dòng)物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實(shí)際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個(gè)體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容

讓細(xì)胞活躍的六個(gè)實(shí)用對(duì)策2021/11/17: 細(xì)胞，生物學(xué)名詞，生物體的結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。一般具有細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜。植物細(xì)胞的細(xì)胞膜外還有細(xì)胞壁。體形極微，在顯微鏡下始能窺見(jiàn)。形狀多種多樣，主要由細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)構(gòu)成，表面有薄膜。動(dòng)植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)大致相同。植物細(xì)胞質(zhì)膜外有細(xì)胞壁，細(xì)胞壁中常有質(zhì)體，動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)中常有中心體，而高等植物細(xì)胞中則無(wú)。細(xì)胞有運(yùn)動(dòng)、營(yíng)養(yǎng)和繁殖等機(jī)能。細(xì)胞是許多生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的主角。如果細(xì)胞心情不好，那么實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也不會(huì)好到哪兒去。如何讓細(xì)胞快樂(lè)？下面就仔細(xì)了解一下吧!1.確保所有實(shí)驗(yàn)室材料都無(wú)菌交叉污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大

詳述標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制步驟2021/11/08: 標(biāo)準(zhǔn)溶液的定義：標(biāo)準(zhǔn)溶液指的是具有準(zhǔn)確已知濃度的試劑溶液，在滴定分析中常用滴定劑。在其他的分析方法中用標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制工作曲線或作計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度標(biāo)定：標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度標(biāo)定因配置溶液不同而有所不同。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法有兩種：1、直接配制法在分析天平上準(zhǔn)確稱取一定量已干燥的基準(zhǔn)物溶于水后，轉(zhuǎn)入已校正的容量瓶中用水稀釋至刻度，搖勻，即可算出其準(zhǔn)確濃度。2、標(biāo)定法很多物質(zhì)不符合基準(zhǔn)物生物條件，不能直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。一般先將這些物質(zhì)配成近似所需濃度溶液，再用基準(zhǔn)物測(cè)定其準(zhǔn)確濃度。標(biāo)定的方法有直接標(biāo)定和

選擇合適的抗體的實(shí)用方法2021/11/03: 抗體(英語(yǔ):antibody)，抗體是一類能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌，被免疫系統(tǒng)用來(lái)鑒別與中和外來(lái)物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中，及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面。一、一抗的選擇檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮的因素：1.實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的類型一般抗體說(shuō)明書(shū)都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WB/IHC/ICC/ELISA分析等

不同實(shí)驗(yàn)對(duì)抗體有什么要求2021/10/26: 科研工作離不開(kāi)抗體，WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體，那么這幾種實(shí)驗(yàn)技術(shù)都需要什么樣的抗體呢？1.WBWB的蛋白經(jīng)過(guò)加熱變性之后都變成線性的結(jié)構(gòu)。因此*好的抗體是采用非常特異序列的人工合成多肽的方法來(lái)做實(shí)驗(yàn)，結(jié)果也非常特異。2.IP/CHIP我們用抗體去結(jié)合生理狀態(tài)下的蛋白質(zhì)，因此IP的抗體最好使用純化的天然蛋白制作的抗體來(lái)做，也可以用純化的重組蛋白的抗體。最好不要用人工合成多肽制作的抗體，因?yàn)檫@種抗體識(shí)別的位點(diǎn)可能被深深地藏在了蛋白的內(nèi)心深處。CHIP和IP沒(méi)有太大的區(qū)別

酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA）檢測(cè)的三條基本原理2021/10/20: 免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個(gè)部分組成：免疫識(shí)別，信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。ELISA的基本原理有三條：1、抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；2、抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；3、酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏

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