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2022
07-19

l02細(xì)胞培養(yǎng)用什么培養(yǎng)基？
l02細(xì)胞作為固定相選擇性地吸附大黃30%乙醇提取液中的活性成分，采用高效液相色譜(HPLC)測定吸附前后的化學(xué)成分；根據(jù)對(duì)照品的保留時(shí)間及紫外光譜信息，對(duì)比鑒定各親和活性成分；并將篩選出的活性成分進(jìn)一步作用于L02肝脂肪變性細(xì)胞模型，驗(yàn)證其調(diào)血脂作用。結(jié)果從大黃30%乙醇提取液中共篩選出11種活性成分，分別為蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚和6種未知成分。蘆薈大黃素等蒽醌苷元能夠降低L02肝脂肪變性細(xì)胞中三酰甘油(triglyceride，TG)、總膽固醇(totalcholes
2022
07-19

原代細(xì)胞、細(xì)胞株與細(xì)胞系的解釋
從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。這類細(xì)胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的生長空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。原代細(xì)胞生長緩慢，一般認(rèn)為，原代細(xì)胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細(xì)胞的生長會(huì)出現(xiàn)停滯,大部分細(xì)胞衰老死亡。原代細(xì)胞(primarycell****)是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔
2022
07-15

【小尚教細(xì)胞】傳代細(xì)胞的常規(guī)培養(yǎng)
當(dāng)原代培養(yǎng)成功以后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長和細(xì)胞不斷分裂，一方面由于細(xì)胞密度過大，細(xì)胞與細(xì)胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制，生長速度減慢甚至停止將一方面也會(huì)因營養(yǎng)物枯竭和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。因此需要將培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行分離擴(kuò)大培養(yǎng)，細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶內(nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶的這個(gè)過程稱為傳代或者再培養(yǎng)。01傳代標(biāo)準(zhǔn)傳代時(shí)間一般通過兩個(gè)方面進(jìn)行確定：一是在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)培養(yǎng)液由于ph值下降而呈現(xiàn)黃色時(shí)，表明細(xì)胞已經(jīng)達(dá)到最大密度，需要換液或進(jìn)行傳代培養(yǎng)；二是觀察細(xì)胞形態(tài)，健康細(xì)胞形態(tài)飽滿，折光性
2022
07-08

如何繪制細(xì)胞生長曲線？
1.實(shí)驗(yàn)原理典型的生長曲線即可分為潛伏期、指數(shù)生長期、平頂期及退化衰老四個(gè)部分，其中的三個(gè)不同生長時(shí)期（潛伏期、指數(shù)生長期和平頂期）是每個(gè)細(xì)胞系所共有的特征。通過測定生長曲線,不僅可以了解培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)、測定細(xì)胞絕對(duì)生長數(shù)、判斷細(xì)胞活力，而且也可用于測定藥物等外來因素對(duì)細(xì)胞生長的影響。本實(shí)驗(yàn)采用計(jì)數(shù)法測定細(xì)胞生長曲線，通過連續(xù)對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)（通常為10天，一般應(yīng)每次計(jì)數(shù)3孔細(xì)胞取平均值），然后以存活細(xì)胞數(shù)對(duì)培養(yǎng)時(shí)間作圖，即得該種細(xì)胞的生長曲線。2.實(shí)驗(yàn)材料①小鼠胚胎成纖維細(xì)胞或雞胚成纖
2022
06-27

小鼠心肌細(xì)胞的復(fù)極過程可分為如下四期
小鼠心肌細(xì)胞復(fù)極過程：當(dāng)心室肌細(xì)胞去極化達(dá)到后，立即開始復(fù)極，但復(fù)極過程比較緩慢，可分為4期：1)快速復(fù)極初期(1期)：心肌細(xì)胞膜電位在除極達(dá)到后，有+30mV迅速下降至0mV，形成復(fù)極1期，歷時(shí)約10ms，并與0期除極構(gòu)成了鋒電位。形成機(jī)制：鈉離子的通透性迅速下降，鈉離子內(nèi)流停止。同時(shí)膜外鉀離子快速外流，形成瞬時(shí)性鉀離子外向電流，膜內(nèi)電位迅速降低，與0期構(gòu)成鋒電位。2)平臺(tái)期(2期)：表現(xiàn)為膜電位復(fù)極緩慢，電位接近于0mV水平，故成為平臺(tái)期。此期歷時(shí)100~150ms。此期為心室肌細(xì)胞區(qū)別于神
2022
06-27

大鼠滑膜細(xì)胞的制備方法
大鼠滑膜細(xì)胞的制備方法：滑膜細(xì)胞的培養(yǎng)：將分離的滑膜組織用含青霉素200kU/L、鏈霉素200mg/L的D-Hank's液漂洗3次以減少污染機(jī)會(huì)；去掉脂肪組織，將16個(gè)滑膜組織樣本平均分為A、B兩份。將A份不加處理分為A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8八個(gè)樣品，將B份用手術(shù)剪剪碎后分為B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8八個(gè)樣品。分別采取4種不同方法進(jìn)行處理。1)不加消化酶消化法：分別將A1、A2、B1、B2離心洗滌2次(2500r/min，離心6min)，吸棄上清液，加入
2022
06-24

細(xì)胞傳代后增殖變慢的原因
細(xì)胞傳代后增殖變慢，即使添加血清也未見明顯增殖是什么原因？細(xì)胞傳代后增殖速度改變主要是因?yàn)榕囵B(yǎng)條件不適或者傳代受損死亡過多。由于不同品牌、批次的培養(yǎng)基及血清實(shí)際培養(yǎng)效果差異，細(xì)胞在更換培養(yǎng)條件后可能生長狀態(tài)改變，生長速度變慢、甚至不長的情況時(shí)有發(fā)生，此時(shí)建議及時(shí)更換合適的培養(yǎng)基及血清，或使用尚恩生物原裝培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)比。T25瓶加10-12ml培養(yǎng)基，10cm皿加12-15ml，2-3天換液一次。細(xì)胞傳代受損一般會(huì)伴隨傳代死亡偏多、碎片增多等情況，傳代受損的細(xì)胞增殖活力會(huì)明顯下降甚至不長，此時(shí)
2022
06-20

關(guān)于胎牛血清您了解多少？
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。胎牛血清采用健康母牛懷孕的八月齡胎牛血液為原料，經(jīng)無菌采集、分離、微孔過濾后而成。所以胎牛血清高，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分少。用作真核細(xì)胞體外細(xì)胞培養(yǎng)的生長補(bǔ)充劑。動(dòng)
2022
06-17

玩轉(zhuǎn)不同類型細(xì)胞傳代方法
根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的培養(yǎng)細(xì)胞傳代方法。懸浮生長的細(xì)胞可以用直接吹打或離心分離后傳代，或自然沉降法吸除上清后，再吹打傳代。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代，部分貼壁生長的細(xì)胞用直接吹打即可傳代。細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)常用的酶為胰蛋白酶，它可以破壞細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與培養(yǎng)瓶之間的細(xì)胞連接或接觸，從而使它們之間的連接減弱或*消失。經(jīng)胰蛋白酶處理后的貼壁細(xì)胞在外力（如吹打）的作用下可以分散成單個(gè)細(xì)胞，再經(jīng)稀釋和接種后就可以為細(xì)胞生長提供足夠的營養(yǎng)和空間，達(dá)到細(xì)胞傳代培養(yǎng)的目的。01貼壁細(xì)胞的消化法傳代①吸除或倒掉瓶內(nèi)
2022
06-15

細(xì)胞容易污染？如何正確凍存細(xì)胞
隨著實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展，除了原代培養(yǎng)之外，還將建立開發(fā)或獲得眾多的細(xì)胞系。每一個(gè)細(xì)胞系均擴(kuò)大了其起源細(xì)胞的應(yīng)用，成為有價(jià)值的資源。若該細(xì)胞系頗為*，則其可能是不可替換的；替換至少也是昂貴與耗時(shí)的。因此，必須通過保存細(xì)胞系來保證這種重要投資。由于培養(yǎng)早期傳代培養(yǎng)的選擇，有限細(xì)胞系的衰老以及連續(xù)細(xì)胞系的遺傳和表現(xiàn)不穩(wěn)定性，使細(xì)胞系在連續(xù)培養(yǎng)時(shí)有變異傾向。此外，即使在管理好的實(shí)驗(yàn)室中也有可能發(fā)生儀器故障和污染。交叉污染以及錯(cuò)誤辨識(shí)的發(fā)生率也很高。因此，存在諸多理由進(jìn)行冷凍儲(chǔ)存細(xì)胞，總體概述有幾大不得
2022
05-27

jurkat細(xì)胞的冷凍保存方法
jurkat細(xì)胞冷凍保護(hù)體外培養(yǎng)物，除了必須有冷凍速率、合適的冷凍保護(hù)劑和凍存溫度外，在復(fù)蘇時(shí)也必須有合適的復(fù)溫速率，這樣才能保證獲得冷凍保存效果。復(fù)溫速率是指在細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)溫度升高的速度。復(fù)溫速率不當(dāng)也會(huì)降低凍存細(xì)胞存活率。一般來說，復(fù)溫速度越快越好。常規(guī)的做法是，在370C水浴中，于1-2分鐘內(nèi)完成復(fù)蘇。復(fù)溫速度過慢，細(xì)胞內(nèi)往往重新形成較大冰晶而造成細(xì)胞損傷。復(fù)溫時(shí)造成的細(xì)胞損傷非常快，往往在極短的時(shí)間內(nèi)發(fā)生。冷凍保護(hù)劑是指可以保護(hù)細(xì)胞免受冷凍損傷的物質(zhì)。冷凍保護(hù)劑常常配制成一定的溶液。一般來
2022
05-20

細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基一般應(yīng)具備以下三個(gè)條件
細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如MEM）和添加劑（如血清或無血清培養(yǎng)用的某些確定的激素及生長因子）組成，培養(yǎng)基的配方一直在改進(jìn)，其中包括抗生素和抗有絲分裂劑等等。絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液（BSS）基礎(chǔ)上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。廣泛應(yīng)用的培養(yǎng)基是Eearle'sMEM的混合物，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham'sF12也包括非必須氨基酸，維生素的范圍亦很廣，另外常規(guī)含有無機(jī)鹽和代謝添加劑（例如核苷酸）。MEM/F12這兩種培養(yǎng)基各取1/2，形成神
2022
05-10

大鼠滑膜細(xì)胞的背景及概述
大鼠滑膜細(xì)胞關(guān)節(jié)囊分為兩層，外層為纖維層，由致密結(jié)締組織構(gòu)成；內(nèi)層為滑膜，由薄層疏松結(jié)締組織構(gòu)成，有產(chǎn)生和吸收滑液的作用?；?nèi)富有血管、神經(jīng)，其游離面被覆1～4層滑膜細(xì)胞?；ぜ?xì)胞呈扁平或多邊形，細(xì)胞核為梭形、圓形或卵圓形?；ぜ?xì)胞呈疏松的上皮樣排列，無基膜。大鼠滑膜細(xì)胞有些滑膜細(xì)胞的表面具有分支的突起，這些突起沿表面水平伸展，相鄰細(xì)胞的突起彼此呈指狀交叉，有的表面具有少數(shù)絲狀偽足。在滑膜細(xì)胞之間的間隙內(nèi)有少量結(jié)締組織基質(zhì)，細(xì)胞間隙的基質(zhì)與滑液接觸，進(jìn)行物質(zhì)交換。根據(jù)電鏡研究，滑膜細(xì)胞可分為A
2022
05-10

細(xì)胞有小顆?；蛞伤萍?xì)菌污染怎么處理？
細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片和細(xì)胞代謝產(chǎn)物，通過處理可以去除一部分碎片，但細(xì)胞只要在生長代謝及傳代，就會(huì)有部分細(xì)胞死亡裂解產(chǎn)生碎片，該情況一直會(huì)存在，可以對(duì)比不同細(xì)胞庫照片觀察細(xì)胞代謝產(chǎn)物情況。貼壁細(xì)胞可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細(xì)胞密度70-80%左右消化處理細(xì)胞，消化完成后加*培養(yǎng)基終止消化，混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5mlPBS重懸細(xì)胞，再離心后，用*培養(yǎng)基重懸接種到
2022
04-20

原代細(xì)胞的培養(yǎng)問題
原代細(xì)胞培養(yǎng)問題：1、原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織第一次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞[Freshney,R.I.(1987).CultureofAnimalCells.AManualofBasicTechnique.(NewYork,AlanR.Liss,Inc.)].這類細(xì)胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會(huì)逐漸停止生長。原代細(xì)胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的最大生長空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。細(xì)胞系是不斷生長、分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致
2022
04-20

原代細(xì)胞培養(yǎng)上面會(huì)有哪些問題呢？
原代細(xì)胞培養(yǎng)問題：1、原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織第一次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞[Freshney,R.I.(1987).CultureofAnimalCells.AManualofBasicTechnique.(NewYork,AlanR.Liss,Inc.)].這類細(xì)胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會(huì)逐漸停止生長。原代細(xì)胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的最大生長空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。細(xì)胞系是不斷生長、分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致
2022
04-08

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)4大常用合成細(xì)胞培養(yǎng)基
體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞已經(jīng)有近百年的歷史，但該技術(shù)真正得以廣泛應(yīng)用及各種類型組織細(xì)胞大量體外培養(yǎng)成功是由于適合細(xì)胞體外生長需要的合成培養(yǎng)基的問世。合成培養(yǎng)基是對(duì)細(xì)胞體內(nèi)生存環(huán)境中各種已知物質(zhì)在體外人工條件下的模擬。這種模擬不是被動(dòng)的、不加選擇的。而是在體外反復(fù)實(shí)驗(yàn)和篩選，進(jìn)行強(qiáng)化和重新組合后形成的人工合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基種類很多，據(jù)報(bào)道已有數(shù)十種，每種合成培養(yǎng)基最初都是為培養(yǎng)某種細(xì)胞而設(shè)計(jì)的，但應(yīng)用后發(fā)現(xiàn)其他細(xì)胞也可以生長或經(jīng)改良也適合其他細(xì)胞的生長。1.199培養(yǎng)基199培養(yǎng)基是Morgan、Mo
2022
03-16

細(xì)胞系的建立過程
細(xì)胞建系的一般程序包括原代培養(yǎng)、第一次傳代、常規(guī)傳代、凍存與復(fù)蘇等過程。所涉及的原代培養(yǎng)、第一次傳代、常規(guī)傳代、凍存與復(fù)蘇等過程的具體方法與常規(guī)的原代培養(yǎng)等技術(shù)一樣。①取材：材料主要來源于外科手術(shù)或活檢瘤組織，取材時(shí)避免用壞死組織，要挑選瘤細(xì)胞集中和活力較好的部位，瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng)，因故不能立即培養(yǎng)者，可凍存。其培養(yǎng)方法及凍存方法同正常組織。②細(xì)胞的純化：在腫瘤組織中?；祀s有一些成纖維細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)能與瘤細(xì)胞同時(shí)生長，并常壓過癌細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞生長受阻甚至消失，
2022
02-11

細(xì)胞系(或株)的鑒定和管理
①對(duì)已建立細(xì)胞系的鑒定：要求能提供細(xì)胞的一般和特殊的生物學(xué)性狀指標(biāo)。一般特性指標(biāo)包括：細(xì)胞的一般形態(tài)、特異性結(jié)構(gòu)、細(xì)胞生長曲線和分裂指數(shù)、倍增時(shí)間、接種率、染色體分析、同工崩檢查、DNA指紋圖譜等。特異性指標(biāo)常依據(jù)細(xì)胞種類和功能的特異性進(jìn)行鑒定，比如，若為腺細(xì)胞則一般鑒定是否有特殊產(chǎn)物包括分泌蛋白或激素產(chǎn)生；若為腫瘤細(xì)胞還應(yīng)能夠證明細(xì)胞確系來源于腫瘤組織而非其他，并仍保留有腫瘤組織的特性，為此常需做集落形成實(shí)驗(yàn)、裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn)以及對(duì)正常組織的侵襲實(shí)驗(yàn)等。a.正常細(xì)胞系的鑒定：鑒定細(xì)胞的種系來源，常
2021
12-20

細(xì)胞運(yùn)輸方式有哪幾種
由于培養(yǎng)細(xì)胞株(系)的商品化，細(xì)胞培養(yǎng)室之間的交流、交換和購買已成為生命科學(xué)研究中的一個(gè)重要組成部分，培養(yǎng)細(xì)胞的運(yùn)輸成為研究工作的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。如果不了解所要細(xì)胞的性狀、培養(yǎng)液特點(diǎn)及培養(yǎng)注意事項(xiàng)，運(yùn)輸時(shí)不注意使用特殊容器或溫度等，就可能影響細(xì)胞的生長，或出現(xiàn)差錯(cuò)，或?qū)е屡囵B(yǎng)失敗等。裝運(yùn)細(xì)胞的主要方法如下所述：1)冷凍儲(chǔ)存運(yùn)輸法這是一種利用特殊容器內(nèi)盛液氮或干冰的運(yùn)輸方法。保存效果較好，但缺點(diǎn)是比較麻煩，不宜長時(shí)間運(yùn)輸，多需空運(yùn)，代價(jià)較大。2)充液法此種方法較為簡單。一般選擇生長良好的細(xì)胞，以生長

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