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2021
12-01

新買的細(xì)胞收到后如何處理
首先，觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否漏液渾濁。如有，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系尚恩生物技術(shù)支持。用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。由于運(yùn)輸問題，可能會(huì)存在一些貼壁細(xì)胞會(huì)從瓶壁脫落的情況，需將細(xì)胞放在細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，第二天取出觀察。仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞形態(tài)、培養(yǎng)基、血清比例、細(xì)胞因子等細(xì)胞相關(guān)信息。培養(yǎng)瓶中多余的培養(yǎng)基可轉(zhuǎn)移到50毫升無菌離心管備用；細(xì)胞傳代時(shí)，培養(yǎng)基可與客戶自備的培養(yǎng)基按一定比例混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。在確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好后，應(yīng)及時(shí)凍存細(xì)胞，方可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，
2021
11-17

胎牛血清與小牛血清的區(qū)別
胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然，胎牛血清是品質(zhì)*高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分*少。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質(zhì)含量3.5%~5.0%(w/v)3、血紅蛋白含量≤0.02%(w/v)4、無菌檢驗(yàn)陰性5、支原體檢驗(yàn)陰性6、細(xì)菌內(nèi)毒素≤5(EU/ml)7、牛腹瀉病毒陰性8、大腸桿菌噬菌體陰性9、支持細(xì)胞增殖(Sp2/0-Ag14)生長(zhǎng)曲線(接種濃度)*大
2021
11-12

原代細(xì)胞的培養(yǎng)應(yīng)用及分離注意事項(xiàng)
原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用：1、為研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的手段；2、為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；3、服務(wù)于臨床實(shí)踐，用于藥物篩選等。原代細(xì)胞培養(yǎng)之分離注意事項(xiàng)：組織塊培養(yǎng)法：1)組織塊接種后的前3天，在觀察和移動(dòng)的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng)，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。2)加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來。3)當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。4)為促進(jìn)
2021
11-09

人紅白血病細(xì)胞培養(yǎng)及凍存操作
人紅白血病細(xì)胞培養(yǎng)操作：1.換液周期2-3天；2.培養(yǎng)基體積T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml；3.傳代比例1:2-1:4(具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定)；4.傳代方法1.混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清；5.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；6.補(bǔ)足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。注意事項(xiàng)：懸浮細(xì)胞會(huì)附著瓶底，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)基或者吹打細(xì)胞面就會(huì)脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細(xì)胞操作，吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，
2021
11-06

如何儲(chǔ)存和解凍胎牛血清及如何避免沉淀介紹
如何儲(chǔ)存和解凍胎牛血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清，并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)(由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10%，必須預(yù)留此膨脹體
2021
11-02

胎牛血清的質(zhì)量要求
隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和生活水平的不斷提高對(duì)生物醫(yī)藥產(chǎn)品的質(zhì)量要求也越來越高，所以對(duì)制備工藝中所涉及到的各種原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求也越來越高，特別是對(duì)用于細(xì)胞培養(yǎng)基中的主要天然成份――胎牛血清的質(zhì)量要求也不斷提高。牛血清包括胎牛血清、新生牛血清和成牛血清。(一)、WHO公布的《用動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求：1.胎牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。2.有些國(guó)家還要求牛血清來自未用過反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。3.證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的
2021
10-23

a549細(xì)胞凍存方式
a549細(xì)胞正常狀態(tài)下都呈長(zhǎng)梭形,從你提供的細(xì)胞圖片看,圓形細(xì)胞較多,可能是細(xì)胞生長(zhǎng)過密,相互擠壓所致!還有許多突起,估計(jì)是有其他細(xì)胞污染,或是培養(yǎng)液使用時(shí)間過長(zhǎng)，有污染所致，建議更換新鮮培養(yǎng)液，用新瓶傳代,密度不要過高!近來關(guān)于細(xì)胞過度傳代的問題也引起了較為普遍的關(guān)注，由于過度傳代造成遺傳性狀的不穩(wěn)定性和一些表型的喪失使得體外生物學(xué)效應(yīng)的偏差也日益增大，因此盡量在購(gòu)買或者引進(jìn)細(xì)胞株的時(shí)候盡量多多凍存低代次的細(xì)胞，以獲得接近原始建株細(xì)胞的生物學(xué)特性。a549細(xì)胞凍存方式：1．將細(xì)胞消化下來，移入
2021
10-19

原代細(xì)胞復(fù)蘇的基本操作方法
原代細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:(1)儀器：凈化工作臺(tái)、離心機(jī)、恒溫水浴箱、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱、液氮冰箱(2)玻璃器皿：吸管(彎頭、直頭)、培養(yǎng)瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、廢液缸(3)塑料器皿：吸頭、槍頭、膠塞、移液管(10ml)、15ml離心管、凍存管(1～2ml)(4)其他物品：微量加樣槍、紅血球計(jì)數(shù)板、記號(hào)筆、醫(yī)用橡皮膏、移液槍(5)試劑：PBS、小牛血清、培養(yǎng)液、雙抗(青霉素、鏈霉素)、胰蛋白酶(0.08%)原代細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟:(1)從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并
2021
10-11

不同胎牛血清對(duì)動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)的影響
細(xì)胞培養(yǎng)過程中，若血清選擇不當(dāng)不僅會(huì)造成試驗(yàn)的失敗，而且造成的人力、物力和財(cái)力的損失，特別是對(duì)異地珍惜動(dòng)物品種，更是難以想象。但是，目前市場(chǎng)上血清種類繁多，質(zhì)量參差不齊。因此研究不同種類的血清對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。目的就是追求高效率、低成本，通過對(duì)比試驗(yàn)在短時(shí)間內(nèi)找到培養(yǎng)細(xì)胞的血清，從而達(dá)到省時(shí)、省力、省資源的目的。胎牛血清中含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)成分，血清在體外可以再造適于細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖、黏附和分化的生理環(huán)境，是組織細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基，在動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)中起著十
2021
10-11

PBS磷酸鹽緩沖鹽溶液的作用
PBS是磷酸鹽緩沖鹽溶液(phosphatebufferedsaline)，一般作為溶劑，起溶解保護(hù)試劑的作用。它是生物化學(xué)研究中使用最為廣泛的一種緩沖液，主要成分為Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4有二級(jí)解離，緩沖的pH值范圍很廣，而NaCl和KCl主要作用為增加鹽離子濃度。如有需要PBS還可以補(bǔ)加1mmol/LCaCl2和0.5mmol/LMgCl2，以提供二價(jià)陽(yáng)離子。PBS是磷酸緩沖鹽溶液的簡(jiǎn)稱，不僅偽狂犬病毒要用它稀釋，一般的有活性的生物制劑
2021
09-27

細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)（一）
環(huán)境保持相信很多新手朋友都會(huì)遇到這種情況，自己培養(yǎng)的細(xì)胞養(yǎng)的好好的，突然有一天細(xì)胞培養(yǎng)基渾濁了、變黃、飄著一些霉菌團(tuán)或者顯微鏡下全是樹枝樣的霉菌菌絲，起初還只是一兩個(gè)培養(yǎng)瓶有這種情況，過段時(shí)間就大面積都出現(xiàn)這種情況了。出現(xiàn)以上情況的時(shí)候，很多剛開始接觸細(xì)胞培養(yǎng)的人都不知道怎么污染的，更不知道如何處理。那么接下來，小編就帶你們看看怎么從環(huán)境上降低細(xì)胞被污染的概率。首先我們要知道，造成細(xì)胞污染的污染物不是憑空產(chǎn)生的，而是環(huán)境或者人為帶入的，那么我們就要從環(huán)境和個(gè)人方面入手。接下來，就讓我們?cè)敿?xì)的了解
2021
09-26

胰酶的作用
促進(jìn)消化、增進(jìn)食欲。胰酶是一種促進(jìn)消化的藥物，其主要成分包括胰蛋白酶，胰淀粉酶和胰脂肪酶。其中胰蛋白酶能夠使蛋白轉(zhuǎn)化為蛋白肽，胰淀粉酶可以使淀粉轉(zhuǎn)化為糊精與糖，胰脂肪酶則可以使脂肪分解為甘油和脂肪酸。在腸液中促進(jìn)消化淀粉，蛋白質(zhì)及脂肪，從而起到促進(jìn)消化和增進(jìn)食欲的作用。在臨床上該藥物主要用于消化不良，食欲不振及肝、胰腺疾病引起的消化障礙。需要注意的是該藥物在急性胰腺炎早期患者禁止使用。胰酶的注意事項(xiàng)：1.該產(chǎn)品經(jīng)過2道0.22um無菌過濾，經(jīng)檢測(cè)無菌、無其他污染。使用時(shí)應(yīng)注意無菌操作，避免污染。
2021
09-24

游離脂肪酸對(duì)非洲綠猴腎細(xì)胞凋亡的影響
非洲綠猴腎細(xì)胞被成功的用來培養(yǎng)狂犬病疫苗、乙腦疫苗等多種疫苗，在非典期間又為研究冠狀病毒做出貢獻(xiàn)，在醫(yī)藥研究種廣泛應(yīng)用。非洲綠猴腎細(xì)胞探討脂肪酸對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。利用不同種類不同濃度脂肪酸處理體外培養(yǎng)細(xì)胞，利用光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，后經(jīng)Hoechst/PI熒光染色和染色體DNA梯度電泳觀察細(xì)胞形態(tài)改變并確定細(xì)胞凋亡；同時(shí)應(yīng)用蛋白免疫印跡反應(yīng)檢測(cè)淘亡相關(guān)Bc1-2、Bax、Fas、P53和Caspase-3蛋白質(zhì)表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：（1）光鏡觀察顯示：細(xì)胞經(jīng)脂肪酸處理后有形態(tài)上的改變，細(xì)胞產(chǎn)生不同程度
2021
09-16

BV2細(xì)胞*培養(yǎng)基使用注意事項(xiàng)
BV2細(xì)胞*培養(yǎng)基本產(chǎn)品可保持BV2細(xì)胞最佳的生長(zhǎng)狀態(tài)，已包含BV2細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于BV2細(xì)胞的體外培養(yǎng)。僅供進(jìn)一步科研使用，不得用于診斷、治療、臨床、家庭及其它用途。BV2細(xì)胞*培養(yǎng)基注意事項(xiàng)：1.收貨后盡快放入保存溫度，避免長(zhǎng)時(shí)間常溫保存；2.謹(jǐn)慎操作，避免污染，開封后重新保存時(shí)需要在瓶口封上封口膜避免污染；3.內(nèi)含足量血清及雙抗，可以直接用于細(xì)胞培養(yǎng)，特殊情況下需要額外添加血清或者雙抗；4.部分內(nèi)容物如谷氨酰胺、葉酸等易降解，因此不要保存時(shí)間過長(zhǎng)，盡早使
2021
09-14

原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞的三大不同之處
一、概念1、原代細(xì)胞：指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。2、傳代細(xì)胞：適應(yīng)在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞稱為傳代細(xì)胞。二、來源1、原代細(xì)胞：指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng)。2、傳代細(xì)胞：幼年動(dòng)物的腎、肺、肝、卵巢、上皮、肌肉與腫瘤等組織的細(xì)胞。三、培養(yǎng)步驟1、原代細(xì)胞：將動(dòng)物組織從機(jī)體中取出離散成單個(gè)細(xì)胞(常用胰蛋白酶)，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖。2、傳代細(xì)胞：原代細(xì)胞基礎(chǔ)上通過胰酶等物質(zhì)消化后
2021
09-09

原代細(xì)胞復(fù)蘇的基本操作
原代細(xì)胞復(fù)蘇的操作步驟：(1)從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。(2)從37℃水浴中取出凍存管，75%酒精消毒后，打開蓋子，用吸管吸出細(xì)胞懸液，加到離心管中。PriCells推薦接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。(3)離心，1000rpm，5min。PriCells推薦不離心。(4)棄去上清液，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。PriCells推薦小牛血清濃度依據(jù)原代細(xì)胞種類。(5)次日更換一次1/2培養(yǎng)
2021
09-09

raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)分享
raw264.7細(xì)胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。sIg-,Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測(cè)到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性?？梢园嬛行约t并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對(duì)腫瘤靶細(xì)胞無作用。raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)：1.基本情況：小鼠來源白血病毒誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞，屬于巨噬細(xì)胞，貼壁生長(zhǎng)。下圖是ATCC來源。主流觀點(diǎn)是以橢圓圓形細(xì)胞為主，激活分化后才有觸角。形態(tài)以類圓形和不規(guī)
2021
08-24

293細(xì)胞購(gòu)入時(shí)建議先大量?jī)龃?/a>
293細(xì)胞是轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞系，293T細(xì)胞由293細(xì)胞派生，同時(shí)表達(dá)SV40大T抗原，含有SV40復(fù)制起始點(diǎn)與啟動(dòng)子區(qū)的質(zhì)?？梢詮?fù)制。用Ca3(PO4）2轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)50%。蛋白表達(dá)水平高，轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較容易地檢測(cè)到表達(dá)的蛋白。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞是過表達(dá)蛋白并獲得細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外（分泌的或膜）蛋白的便捷方式。通常轉(zhuǎn)染效率與代數(shù)相關(guān)，建議選擇代數(shù)低的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。如果質(zhì)粒中含SV40復(fù)制起始點(diǎn)，可以選擇293T或293T/17。這些細(xì)胞貼壁不牢，特別是溫度

2021
08-09

人支氣管成纖維細(xì)胞是氣道與外界環(huán)境接觸的一道屏障
人支氣管成纖維細(xì)胞是氣道與外界環(huán)境接觸的一道屏障，在慢性阻塞性肺疾病、哮喘、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機(jī)制中均起著重要的作用，逐漸受到人們的重視。支氣管上皮細(xì)胞不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子，從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)，而體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細(xì)胞由于與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上存在很大的相似性，支氣管上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)成為研究呼吸道上皮功能的必要條件。人支氣管成纖維細(xì)胞試驗(yàn)方法：1.體外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞株
2021
08-09

科研用細(xì)胞系鑒定的6大要求
一種新細(xì)胞系，不論是從原代培養(yǎng)衍生或是從已有的細(xì)胞系衍生，很難估計(jì)它未來的價(jià)值。通常要經(jīng)過一段時(shí)間的應(yīng)用、傳播以后，該細(xì)胞系真正的重要性才體現(xiàn)出來。這時(shí)，需要有關(guān)其起源的詳細(xì)信息，然而已經(jīng)為時(shí)太晚，無法回顧性的收集信息。因此，從組織分離或得到一種新的細(xì)胞系開始，充分記錄有關(guān)細(xì)胞系的起源和處理的詳細(xì)資料，是至關(guān)重要的。這些記錄形成該細(xì)胞系的“身世”，記錄越詳細(xì)，價(jià)值越大。隨著細(xì)胞系通過細(xì)胞庫(kù)和私人聯(lián)系廣泛傳播到已遠(yuǎn)離其起源的各研究室及商業(yè)公司，細(xì)胞培養(yǎng)工作中細(xì)胞系起源方面的問題也變得尤其重要，特別

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