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2023
10-26

液體培養(yǎng)基的常見問題有哪些？
液體培養(yǎng)基是最為常見的培養(yǎng)基類型，它具有可進(jìn)行通氣培養(yǎng)或振蕩培養(yǎng)的優(yōu)勢，因?yàn)樗牧鲃有员阌诰_控制培養(yǎng)基的溶液溫度、營養(yǎng)濃度和氣體含量等；它對細(xì)胞生長時的附著能力要求小，細(xì)胞可快速擴(kuò)增；當(dāng)需要大量細(xì)胞培養(yǎng)時也更經(jīng)濟(jì)高效。那么你知道液體培養(yǎng)基的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、液體培養(yǎng)基為什么顏色不一樣酚紅加量不同，導(dǎo)致顏色差異：DMEM＞MEM＞DMEM/F12＞RPMI1640＞F12&F10。二、培養(yǎng)基放冰箱里顏色變深空氣中CO2濃度低，培養(yǎng)基內(nèi)CO2會逐漸溢出，HCO3-減少，造成
2023
10-25

你知道什么是瓊脂糖凝膠電泳嗎？
你知道什么是你知道什么是瓊脂糖凝膠電泳嗎？讓我們一起來看看吧！一、瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)核酸分子是兩性解離分子，在高于其等電點(diǎn)的電泳緩沖液中，其堿基不解離，而磷酸基團(tuán)全部解離，核酸分子因而帶負(fù)電荷，電泳時向正極遷移。瓊脂糖主要從海洋植物瓊脂中提取而來并經(jīng)糖基化修飾，為一種聚合鏈線性分子，使用瓊脂糖凝膠作為電泳支持介質(zhì)，發(fā)揮分子篩功能，使得大小和構(gòu)象不同的核酸分子的遷移率出現(xiàn)較大差異，從而達(dá)到分離的目的。因此，目前多用瓊脂糖為電泳支持物進(jìn)行平板電泳，其優(yōu)點(diǎn)如下。（1）瓊脂糖凝膠電泳操作簡單，電泳速度快，
2023
10-25

瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的試驗(yàn)方法是什么？注意事項(xiàng)有什么？
你知道瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法是什么嗎？有什么注意事項(xiàng)呢？讓我們一起來看看吧！一、瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)方法1.擇適合樣品預(yù)期片段大小的瓊脂糖凝膠濃度百分比。將瓊脂糖粉末與用于運(yùn)行凝膠的相同類型的緩沖液（TAE）結(jié)合起來，加熱使混合物融化，避免沸騰。2.選擇所需尺寸的凝膠澆注模具和梳子，為樣品和marker提供足夠數(shù)量的孔，以及容納每個待裝樣品數(shù)量的孔容量。3.膠凝固后，將凝膠放入電泳儀中，電泳液沒過凝膠，根據(jù)加入量的多少，決定混合多少ul的lodingbuffer，將樣液混合lodingbuf
2023
10-25

如何選擇DNA提取方法
DNA的提取可以簡單的分為裂解和純化兩大步驟，裂解是破壞樣品細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而使樣品中的DNA游離在裂解體系中的過程，純化則是使DNA與裂解體系中的其它成分，如蛋白質(zhì)、鹽及其它雜質(zhì)分離的過程。那么該如何選擇DNA提取方法呢？讓我們一起來看看吧！一、酚氯仿抽提法酚氯仿抽提是去除蛋白質(zhì)的有效手段，但如果蛋白質(zhì)含量超過了其飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)就不會被一次性去除，需要進(jìn)行多次反復(fù)抽提，而每次的抽提均會導(dǎo)致核酸的損失。酚氯仿抽提的優(yōu)勢是成本低廉，對實(shí)驗(yàn)條件要求較低。二、高鹽沉淀法高鹽沉淀法是酚氯仿抽提方
2023
10-24

熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟是什么？
熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一門新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性原位雜交技術(shù)。那么你知道熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1.實(shí)驗(yàn)用具及材料（1）人的MyoD1（MYF3)基因探、人外周血中期染色體細(xì)胞標(biāo)本；（2）指甲油、甲酰胺、氯化鈉、檸檬酸鈉、氫氧化鈉、吐溫20等；（3）恒溫水浴鍋、培養(yǎng)箱、染色缸、載玻片、Nikon
2023
10-24

蛋白表達(dá)的常見問題有哪些？
蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)的時，有時候?qū)嶒?yàn)會覺得參考實(shí)驗(yàn)方法和克隆的蛋白基因序列wan全沒有問題，但蛋白電泳就是沒有結(jié)果。下面讓我們一起來看看蛋白表達(dá)的常見問題有哪些吧！1、載體構(gòu)建錯誤，很多克隆新人經(jīng)常弄錯讀碼框。比如Qiagen的pQE系列載體，其克隆位點(diǎn)常有一兩個堿基的區(qū)別；另外有些酶產(chǎn)生粘端有些酶產(chǎn)生平端，這些都容易導(dǎo)致讀碼框錯誤，從而表達(dá)不出來。2、宿主菌選擇不當(dāng)，不同的宿主菌其基因型是不一樣的。有些經(jīng)過特殊修飾的載體，或者特殊用途的載體，或者有特殊啟動子的載體，必須選擇合適的宿主菌進(jìn)行表達(dá)。因此，
2023
10-23

PCR反應(yīng)體系主要是什么？
你知道PCR反應(yīng)體系主要包含那些嗎？讓我們一起來看看吧！一、模板（template)模板即擴(kuò)增用的DNA，可以是任何來源DNA(如基因組DNA、質(zhì)粒DNA等)或RNA（如總RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等），但必須符合兩個條件：一是純度必須較高，二是濃度不能太高以免抑制。模板是待擴(kuò)增的目的基因或特異片段，如診斷病人是否攜帶有突變基因時，其模板就是提取的病人血液中的DNA或RNA片段。PCR對模板DNA的純度不要求很高，但應(yīng)盡量不含有對PCR反應(yīng)有抑制作用的雜質(zhì)存在，如蛋白酶、核
2023
10-23

PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么？
你知道PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、PCR技術(shù)基本原理PCR是一種選擇性體外快速擴(kuò)增DNA片段的方法。在體外以類似于細(xì)胞內(nèi)DNA的半保留復(fù)制過程，以擬擴(kuò)增的模板DNA分子，與模板DNA互補(bǔ)的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應(yīng)體系，經(jīng)過重復(fù)地變性一退火一延伸三步，擴(kuò)增新的目的DNA鏈，這個過程通過控制反應(yīng)體系的溫度來實(shí)現(xiàn)。PCR包含下列三步反應(yīng)：1、變性(denaturation)將反應(yīng)體系混合物經(jīng)加熱至94℃左右，維持較短的時
2023
10-20

如何選擇免疫組化中的一抗？
免疫組化實(shí)驗(yàn)看似容易，但真想把結(jié)果做漂亮，還是需要花上很長一段時間去積累和摸索經(jīng)驗(yàn)。一味按照網(wǎng)上操作流程來做，結(jié)果往往并不理想，最終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果。那么如何選擇免疫組化實(shí)驗(yàn)中的一抗呢？讓我們一起來看看吧！一、單克隆和多克隆抗體的選擇存在于抗原表面的，決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)稱為抗原決定簇，又稱抗原表位。一個抗原可以有一種或多種不同的抗原表位，每種表位只有一種抗原特異性。用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物，可刺激機(jī)體多個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對多種抗原表位的抗體，就是多克隆抗體（poly
2023
10-20

細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么？
你知道細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞計數(shù)將培養(yǎng)好的細(xì)胞收集于15mL離心管并計數(shù)；500g離心4min，去上清。二、制備單細(xì)胞懸液將收集的細(xì)胞用1mL0.5%BSA/PBS溶液重懸，400g離心3min，去上清，重復(fù)2次；用0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞至濃度1x106個細(xì)胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl細(xì)胞懸液，400g離心5min去上清。三、固定每孔加入100μl細(xì)胞固定劑重懸細(xì)胞，2-8°孵育20min。四、洗滌400g離心5min，去上清后加入2
2023
10-19

免疫細(xì)胞（ICC）實(shí)驗(yàn)步驟有哪些？
免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)是一種使用熒光抗體或染料來檢測細(xì)胞內(nèi)靶抗原的技術(shù)。那么你知道免疫細(xì)胞（ICC）實(shí)驗(yàn)步驟有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞培養(yǎng)/固定很多抗原在離體組織中只存在很短時間，自溶（autolysis）和壞死（necrosis）使得抗原進(jìn)一步降解，組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)被破壞。樣品浸泡在合適的固定液中，固定液完quan滲透組織，使蛋白失去活性，并且使組織被保存、穩(wěn)定在接近invivo狀態(tài)。二、通透處理通透即為對細(xì)胞膜進(jìn)行打孔處理，使抗體能進(jìn)入到細(xì)胞中和抗原發(fā)生結(jié)合。通常，當(dāng)抗體檢測細(xì)胞內(nèi)
2023
10-19

免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問題有哪些？
免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry，IHC)是一種綜合定性、定位和定量；形態(tài)、機(jī)能和代謝密切結(jié)合為一體的研究和檢測技術(shù)。在原位檢測出病原的同時，還能觀察到組織病變與該病原的關(guān)系，確認(rèn)受染細(xì)胞類型，從而有助于了解疾病的發(fā)病機(jī)理和病理過程。那么你知道免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、石蠟切片再染色過程出現(xiàn)脫片現(xiàn)象1.烤片時間不夠，或溫度不夠，可以延長烤片時間和提高烤片溫度；2.用含有多聚賴氨酸的玻片，可以購買到或這自己做；3.有些組織本身就容易掉片，如骨組織等
2023
10-18

二代測序（NGS）的原理
DNA測序技術(shù)一直是分子生物學(xué)相關(guān)研究中常用的技術(shù)手段之一，從一定程度上推動了該領(lǐng)域的快速發(fā)展。每一代測序技術(shù)的更替都標(biāo)志著生物學(xué)中基因芯片、數(shù)據(jù)分析、表面化學(xué)、生物工程等技術(shù)領(lǐng)域有了新的突破，使測序向著高通量、低成本、高安全性和商業(yè)化的方向發(fā)展。那么二代測序(NGS)的原理是什么？讓我們一起來看看吧！第二代測序(NGS)又稱為高通量測序(High-throughputsequencing)，是基于PCR和基因芯片發(fā)展而來的DNA測序技術(shù)。二代測序引入了可逆終止末端，從而實(shí)現(xiàn)邊合成邊測序。二代測
2023
10-18

支原體污染的檢測方法有哪些？
支原體污染一般在顯微鏡下不可見，很難察覺，但細(xì)胞會受到極大的損傷，主要通過以下途徑影響細(xì)胞生長及功能。那么支原體污染的檢測方法有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、分離培養(yǎng)法檢測方法：將待檢樣品接種到適合支原體生長的液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基中，如有支原體污染，液體培養(yǎng)基顏色會改變，固體培養(yǎng)基將會有菌落生長。優(yōu)點(diǎn)：該方法被稱為支原體培養(yǎng)法的金標(biāo)準(zhǔn)，可以檢測絕大多數(shù)支原體。缺點(diǎn)：支原體生長到一定數(shù)量才能判斷是否有污染，檢測時間長，無法實(shí)現(xiàn)對支原體的快速檢測二、原位染色法檢測方法：通過染色試劑（如DAPI、
2023
10-18

細(xì)胞被支原體污染，該怎么辦？
支原體是目前為止發(fā)現(xiàn)的最小的原核生物，支原體污染一般在顯微鏡下不可見，很難察覺，但細(xì)胞會受到極大的損傷，主要通過以下途徑影響細(xì)胞生長及功能。那么細(xì)胞被支原體污染，該怎么辦呢？讓我們一起來看看吧！一、支原體污染的來源1.環(huán)境污染：如細(xì)胞培養(yǎng)房、細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈工作臺內(nèi)已被支原體污染；2.實(shí)驗(yàn)器材的污染：移液槍、移液管、細(xì)胞培養(yǎng)皿、水浴鍋等；3.細(xì)胞培養(yǎng)試劑的污染：培養(yǎng)基、胰酶、血清、細(xì)胞凍存液等；二、處理方法1.及時更換培養(yǎng)液：可以減緩支原體的污染，但不能wan全清除；2.使用抗生素類去除試劑：抗
2023
10-18

夾心法與競爭法的ELISA檢測原理是什么？
ELISA的原理是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。那么你知道夾心法與競爭法的ELISA檢測原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、夾心法原理夾心法使用的是兩個抗體夾抗原或者兩個抗原夾抗體的方法，這種復(fù)合物被稱之為三明治夾心結(jié)構(gòu)，利用一對配對wan全的抗體，可以特異性檢測抗原，當(dāng)然主要針對的是具有至少2個以上抗原表位的抗原，抗體的配對可是門技術(shù)活，很多公司可以生產(chǎn)抗體，但是
2023
10-18

直接法與間接法的ELISA檢測原理是什么？
在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。那么你知道直接法與間接法的ELISA檢測原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、直接法原理直接法是利用包被抗原，檢測抗體或者進(jìn)行重組蛋白的活性驗(yàn)證，利用蛋白與板材（即微孔板底）通過疏水鍵、流水/離子鍵的被動吸附,通過引入其它活性基團(tuán)如氨基和碳基的共價結(jié)合，以及通過表面改性后的親水鍵結(jié)合等等，當(dāng)然也有利用親和素預(yù)包被的板材，通過親和素與生物素的共價
2023
10-17

細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死的不同點(diǎn)有哪些？
你知道細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死的不同點(diǎn)有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、定義細(xì)胞凋亡：細(xì)胞凋亡是一種正常的基因程序性細(xì)胞死亡，其中衰老細(xì)胞在其生命周期結(jié)束時收縮，其剩余片段被吞噬而沒有任何炎癥反應(yīng)。細(xì)胞壞死：壞死是由于存在外部因素（如真菌或細(xì)菌毒素）而產(chǎn)生的信號導(dǎo)致細(xì)胞過早死亡。二、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡：當(dāng)細(xì)胞發(fā)出DNA損傷或促凋亡和抗凋亡蛋白失衡的信號時，它就會被誘導(dǎo)。細(xì)胞壞死：它是由感染、外傷和毒素等外部存在因素引起的。三、形態(tài)變化細(xì)胞凋亡：可能會發(fā)生膜出血，但會保持膜的完整性。細(xì)胞壞死：細(xì)胞最終會失去其
2023
10-17

ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果異常的因素有哪些？
ELISA運(yùn)用了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色原理，需要將抗原或抗體預(yù)包被在固相載體表面，使后來形成的抗原-抗體-酶（熒光基團(tuán)）-底物復(fù)合物黏附在載體上，通過檢測OD值或發(fā)光值，來檢測靶蛋白的含量。ELISA適合用于定量檢測胞外的分泌性蛋白，檢測大分子抗原和特異性抗體等。那么ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果異常的因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、樣品樣品是檢測的前提，樣品質(zhì)量會直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果?？梢杂肊LISA來檢測的樣品很多，根據(jù)檢測項(xiàng)目不同可以是血清、血漿、唾液、尿液等，但大部分還是以血清為樣品。作為血清樣
2023
10-17

如何選擇ELISA試劑盒？
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay,ELISA)技術(shù)從1970年代發(fā)展至今已近半個世紀(jì)，是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室最基本的免疫檢測技術(shù)，被廣泛的應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗(yàn)。那么面對市面上數(shù)以千計的試劑盒，數(shù)百家供應(yīng)商，該如何選擇適合的ELISA試劑盒呢？讓我們一起來看看吧！一、明確研究種屬一般來說，廠家都會在產(chǎn)品名稱上標(biāo)明種屬，且為shou個單詞，檢索種屬的常用語言為英文。如果您需對不同物種的同一因子進(jìn)行定量，建議優(yōu)先尋找適用于多個種屬的ELISA試劑盒，產(chǎn)品介紹中

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