FIB 2-11小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系
FIB 2-11小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系是纖維相關(guān)單克隆抗體制備與纖維化疾病研究領(lǐng)域的重要細(xì)胞模型,憑借穩(wěn)定分泌纖維特異性抗體、優(yōu)異的纖維抗原識(shí)別能力及良好的體外培養(yǎng)性能,在纖維化疾病分子檢測(cè)、相關(guān)診斷試劑研發(fā)及纖維免疫學(xué)研究中應(yīng)用廣泛,為纖維相關(guān)單克隆抗體的獲取與功能探索提供了可靠載體。
來源與背景:該細(xì)胞系源于 BALB/c 小鼠脾臟 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合產(chǎn)物,通過經(jīng)典雜交瘤技術(shù)篩選克隆獲得。其建立過程是將經(jīng)纖維特異性抗原免疫后的小鼠 B 淋巴細(xì)胞與永生化骨髓瘤細(xì)胞融合,利用 HAT 培養(yǎng)基篩選出成功融合的雜交瘤細(xì)胞,再經(jīng)有限稀釋法克隆和抗體纖維靶向性檢測(cè),最終得到能穩(wěn)定分泌針對(duì)纖維靶抗原的單克隆抗體的細(xì)胞株。這一過程有效解決了多克隆抗體在纖維抗原檢測(cè)中特異性不足、交叉反應(yīng)率高的問題,為獲取均一性高、纖維靶向性強(qiáng)的抗體提供了穩(wěn)定來源,自建立以來,在腎纖維化、心肌纖維化等疾病的早期診斷及相關(guān)免疫檢測(cè)方法的建立中發(fā)揮了重要作用。
細(xì)胞特性:形態(tài)上呈現(xiàn)典型的雜交瘤細(xì)胞特征,貼壁生長時(shí)呈上皮樣多邊形,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見豐富的纖維相關(guān)抗原識(shí)別顆粒,細(xì)胞核大而圓,核質(zhì)比約 1:2.4,約 6% 的細(xì)胞可見雙核結(jié)構(gòu),體現(xiàn)融合細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)。核心特性顯著:抗體分泌穩(wěn)定高效,分泌量達(dá) 7-13μg/10?細(xì)胞 / 24h,連續(xù)傳代 55 次后,抗體分泌能力僅下降 7%,穩(wěn)定性優(yōu)于多數(shù)同類細(xì)胞系;纖維抗原結(jié)合特異性高,與纖維靶抗原的結(jié)合常數(shù)(Kd)達(dá) 10??M 級(jí)別,與非纖維組織抗原的交叉反應(yīng)率低于 0.7%,確保了纖維檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性;增殖能力穩(wěn)健,體外培養(yǎng)倍增時(shí)間約 52-58 小時(shí),克隆形成率 38%,腹腔接種 BALB/c 小鼠后,13-19 天可形成腹水,腹水中抗體濃度達(dá) 3-6mg/ml,便于批量制備抗體。傳代時(shí)采用常規(guī)方法處理,傳代比例 1:3-1:4,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 70%-75% 時(shí)需及時(shí)傳代,過度密集會(huì)導(dǎo)致抗體分泌量下降 16% 左右。
培養(yǎng)條件:適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基,添加 1% 抗生素及 0.3% 纖維組織提取液,培養(yǎng)環(huán)境控制在 37℃、5% CO?飽和濕度。關(guān)鍵培養(yǎng)要點(diǎn):血清質(zhì)量關(guān)鍵,需使用低內(nèi)毒素胎牛血清(<0.3EU/ml),劣質(zhì)血清會(huì)使細(xì)胞活力降低 24%,抗體分泌量減少 30%;添加物作用顯著,纖維組織提取液可維持抗體的纖維靶向性,缺失會(huì)導(dǎo)致抗體與纖維抗原的結(jié)合率下降 20%;無血清培養(yǎng)適配性較好,在無血清培養(yǎng)基中添加適量的胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白及纖維生長因子,可維持細(xì)胞正常生長,且抗體純度能提高至 92% 以上,有利于后續(xù)的抗體純化;腹水制備規(guī)范,小鼠腹腔預(yù)先注射降植烷,7 天后接種 1.1×10?個(gè)細(xì)胞,14-20 天收集腹水,每只小鼠可收獲 2-5ml 腹水,腹水經(jīng)純化后仍保持對(duì)纖維組織的高親和力。凍存采用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇后 48 小時(shí)貼壁率達(dá) 77%,抗體分泌功能恢復(fù) 82% 以上。
檢測(cè)鑒定:經(jīng)嚴(yán)格的微生物檢測(cè),無細(xì)菌、真菌、支原體污染,符合雜交瘤細(xì)胞的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)??贵w亞型鑒定為 IgG2a 型,輕鏈為 κ 型;通過 ELISA、免疫組化等方法驗(yàn)證,該抗體能特異性結(jié)合纖維組織靶抗原,與非纖維組織的交叉反應(yīng)率低于 0.6%;染色體核型分析顯示,其染色體數(shù)目為 82-92 條,融合了親本 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的染色體特征,符合雜交瘤細(xì)胞的遺傳學(xué)特性;功能驗(yàn)證中,將該抗體用于腎纖維化組織切片免疫染色時(shí),能特異性識(shí)別纖維靶抗原,陽性信號(hào)集中于纖維化區(qū)域,背景干擾低,證實(shí)其在纖維化疾病檢測(cè)中的實(shí)用性。
應(yīng)用領(lǐng)域:在纖維化疾病分子檢測(cè)方面,基于該細(xì)胞系分泌的抗體構(gòu)建的 ELISA 試劑盒,檢測(cè)靈敏度達(dá) 0.5ng/ml,線性范圍寬,適用于血清、纖維組織等多種樣本類型中纖維靶抗原的定量分析;在纖維化診斷試劑研發(fā)中,利用該抗體開發(fā)的免疫熒光探針,可用于腎、心肌等組織病理切片中靶抗原的可視化檢測(cè),對(duì)腎纖維化的診斷符合率達(dá) 89%。在纖維免疫學(xué)研究中,可用于纖維抗原表位分析,通過肽掃描實(shí)驗(yàn)確定纖維抗原的特異性結(jié)合區(qū)域,為抗纖維化疫苗設(shè)計(jì)提供關(guān)鍵信息。此外,該細(xì)胞系可用于優(yōu)化纖維相關(guān)抗體生產(chǎn)工藝,通過調(diào)整懸浮培養(yǎng)的溫度、pH 值等條件,能使抗體產(chǎn)量提升 1.2-1.8 倍,有助于降低纖維相關(guān)單克隆抗體規(guī)模化生產(chǎn)的成本,為纖維化疾病的精準(zhǔn)診斷及治療研究提供了重要支持。
以上信息僅供參考,詳細(xì)信息請(qǐng)聯(lián)系我們。