BY-1009 FIB 2-11小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1009
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- 廠商性質 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/7/22 10:57:58
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FIB 2-11小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞系
FIB 2-11小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞系是纖維相關單克隆抗體制備與纖維化疾病研究領域的重要細胞模型，憑借穩(wěn)定分泌纖維特異性抗體、優(yōu)異的纖維抗原識別能力及良好的體外培養(yǎng)性能，在纖維化疾病分子檢測、相關診斷試劑研發(fā)及纖維免疫學研究中應用廣泛，為纖維相關單克隆抗體的獲取與功能探索提供了可靠載體。
來源與背景：該細胞系源于 BALB/c 小鼠脾臟 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞的融合產(chǎn)物，通過經(jīng)典雜交瘤技術篩選克隆獲得。其建立過程是將經(jīng)纖維特異性抗原免疫后的小鼠 B 淋巴細胞與永生化骨髓瘤細胞融合，利用 HAT 培養(yǎng)基篩選出成功融合的雜交瘤細胞，再經(jīng)有限稀釋法克隆和抗體纖維靶向性檢測，最終得到能穩(wěn)定分泌針對纖維靶抗原的單克隆抗體的細胞株。這一過程有效解決了多克隆抗體在纖維抗原檢測中特異性不足、交叉反應率高的問題，為獲取均一性高、纖維靶向性強的抗體提供了穩(wěn)定來源，自建立以來，在腎纖維化、心肌纖維化等疾病的早期診斷及相關免疫檢測方法的建立中發(fā)揮了重要作用。
細胞特性：形態(tài)上呈現(xiàn)典型的雜交瘤細胞特征，貼壁生長時呈上皮樣多邊形，細胞質內可見豐富的纖維相關抗原識別顆粒，細胞核大而圓，核質比約 1:2.4，約 6% 的細胞可見雙核結構，體現(xiàn)融合細胞的形態(tài)特點。核心特性顯著：抗體分泌穩(wěn)定高效，分泌量達 7-13μg/10?細胞 / 24h，連續(xù)傳代 55 次后，抗體分泌能力僅下降 7%，穩(wěn)定性優(yōu)于多數(shù)同類細胞系；纖維抗原結合特異性高，與纖維靶抗原的結合常數(shù)（Kd）達 10??M 級別，與非纖維組織抗原的交叉反應率低于 0.7%，確保了纖維檢測結果的準確性；增殖能力穩(wěn)健，體外培養(yǎng)倍增時間約 52-58 小時，克隆形成率 38%，腹腔接種 BALB/c 小鼠后，13-19 天可形成腹水，腹水中抗體濃度達 3-6mg/ml，便于批量制備抗體。傳代時采用常規(guī)方法處理，傳代比例 1:3-1:4，當細胞密度達到 70%-75% 時需及時傳代，過度密集會導致抗體分泌量下降 16% 左右。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 1% 抗生素及 0.3% 纖維組織提取液，培養(yǎng)環(huán)境控制在 37℃、5% CO?飽和濕度。關鍵培養(yǎng)要點：血清質量關鍵，需使用低內毒素胎牛血清（<0.3EU/ml），劣質血清會使細胞活力降低 24%，抗體分泌量減少 30%；添加物作用顯著，纖維組織提取液可維持抗體的纖維靶向性，缺失會導致抗體與纖維抗原的結合率下降 20%；無血清培養(yǎng)適配性較好，在無血清培養(yǎng)基中添加適量的胰島素、轉鐵蛋白及纖維生長因子，可維持細胞正常生長，且抗體純度能提高至 92% 以上，有利于后續(xù)的抗體純化；腹水制備規(guī)范，小鼠腹腔預先注射降植烷，7 天后接種 1.1×10?個細胞，14-20 天收集腹水，每只小鼠可收獲 2-5ml 腹水，腹水經(jīng)純化后仍保持對纖維組織的高親和力。凍存采用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液，程序降溫后液氮保存，復蘇后 48 小時貼壁率達 77%，抗體分泌功能恢復 82% 以上。
檢測鑒定：經(jīng)嚴格的微生物檢測，無細菌、真菌、支原體污染，符合雜交瘤細胞的質量標準。抗體亞型鑒定為 IgG2a 型，輕鏈為 κ 型；通過 ELISA、免疫組化等方法驗證，該抗體能特異性結合纖維組織靶抗原，與非纖維組織的交叉反應率低于 0.6%；染色體核型分析顯示，其染色體數(shù)目為 82-92 條，融合了親本 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞的染色體特征，符合雜交瘤細胞的遺傳學特性；功能驗證中，將該抗體用于腎纖維化組織切片免疫染色時，能特異性識別纖維靶抗原，陽性信號集中于纖維化區(qū)域，背景干擾低，證實其在纖維化疾病檢測中的實用性。
應用領域：在纖維化疾病分子檢測方面，基于該細胞系分泌的抗體構建的 ELISA 試劑盒，檢測靈敏度達 0.5ng/ml，線性范圍寬，適用于血清、纖維組織等多種樣本類型中纖維靶抗原的定量分析；在纖維化診斷試劑研發(fā)中，利用該抗體開發(fā)的免疫熒光探針，可用于腎、心肌等組織病理切片中靶抗原的可視化檢測，對腎纖維化的診斷符合率達 89%。在纖維免疫學研究中，可用于纖維抗原表位分析，通過肽掃描實驗確定纖維抗原的特異性結合區(qū)域，為抗纖維化疫苗設計提供關鍵信息。此外，該細胞系可用于優(yōu)化纖維相關抗體生產(chǎn)工藝，通過調整懸浮培養(yǎng)的溫度、pH 值等條件，能使抗體產(chǎn)量提升 1.2-1.8 倍，有助于降低纖維相關單克隆抗體規(guī)?；a(chǎn)的成本，為纖維化疾病的精準診斷及治療研究提供了重要支持。
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