FIB 2-11小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系
FIB 2-11小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系是纖維相關(guān)單克隆抗體制備與纖維化疾病研究領(lǐng)域的重要細(xì)胞模型，憑借穩(wěn)定分泌纖維特異性抗體、優(yōu)異的纖維抗原識(shí)別能力及良好的體外培養(yǎng)性能，在纖維化疾病分子檢測(cè)、相關(guān)診斷試劑研發(fā)及纖維免疫學(xué)研究中應(yīng)用廣泛，為纖維相關(guān)單克隆抗體的獲取與功能探索提供了可靠載體。
來源與背景：該細(xì)胞系源于 BALB/c 小鼠脾臟 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合產(chǎn)物，通過經(jīng)典雜交瘤技術(shù)篩選克隆獲得。其建立過程是將經(jīng)纖維特異性抗原免疫后的小鼠 B 淋巴細(xì)胞與永生化骨髓瘤細(xì)胞融合，利用 HAT 培養(yǎng)基篩選出成功融合的雜交瘤細(xì)胞，再經(jīng)有限稀釋法克隆和抗體纖維靶向性檢測(cè)，最終得到能穩(wěn)定分泌針對(duì)纖維靶抗原的單克隆抗體的細(xì)胞株。這一過程有效解決了多克隆抗體在纖維抗原檢測(cè)中特異性不足、交叉反應(yīng)率高的問題，為獲取均一性高、纖維靶向性強(qiáng)的抗體提供了穩(wěn)定來源，自建立以來，在腎纖維化、心肌纖維化等疾病的早期診斷及相關(guān)免疫檢測(cè)方法的建立中發(fā)揮了重要作用。
細(xì)胞特性：形態(tài)上呈現(xiàn)典型的雜交瘤細(xì)胞特征，貼壁生長時(shí)呈上皮樣多邊形，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見豐富的纖維相關(guān)抗原識(shí)別顆粒，細(xì)胞核大而圓，核質(zhì)比約 1:2.4，約 6% 的細(xì)胞可見雙核結(jié)構(gòu)，體現(xiàn)融合細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)。核心特性顯著：抗體分泌穩(wěn)定高效，分泌量達(dá) 7-13μg/10?細(xì)胞 / 24h，連續(xù)傳代 55 次后，抗體分泌能力僅下降 7%，穩(wěn)定性優(yōu)于多數(shù)同類細(xì)胞系；纖維抗原結(jié)合特異性高，與纖維靶抗原的結(jié)合常數(shù)（Kd）達(dá) 10??M 級(jí)別，與非纖維組織抗原的交叉反應(yīng)率低于 0.7%，確保了纖維檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；增殖能力穩(wěn)健，體外培養(yǎng)倍增時(shí)間約 52-58 小時(shí)，克隆形成率 38%，腹腔接種 BALB/c 小鼠后，13-19 天可形成腹水，腹水中抗體濃度達(dá) 3-6mg/ml，便于批量制備抗體。傳代時(shí)采用常規(guī)方法處理，傳代比例 1:3-1:4，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 70%-75% 時(shí)需及時(shí)傳代，過度密集會(huì)導(dǎo)致抗體分泌量下降 16% 左右。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 1% 抗生素及 0.3% 纖維組織提取液，培養(yǎng)環(huán)境控制在 37℃、5% CO?飽和濕度。關(guān)鍵培養(yǎng)要點(diǎn)：血清質(zhì)量關(guān)鍵，需使用低內(nèi)毒素胎牛血清（<0.3EU/ml），劣質(zhì)血清會(huì)使細(xì)胞活力降低 24%，抗體分泌量減少 30%；添加物作用顯著，纖維組織提取液可維持抗體的纖維靶向性，缺失會(huì)導(dǎo)致抗體與纖維抗原的結(jié)合率下降 20%；無血清培養(yǎng)適配性較好，在無血清培養(yǎng)基中添加適量的胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白及纖維生長因子，可維持細(xì)胞正常生長，且抗體純度能提高至 92% 以上，有利于后續(xù)的抗體純化；腹水制備規(guī)范，小鼠腹腔預(yù)先注射降植烷，7 天后接種 1.1×10?個(gè)細(xì)胞，14-20 天收集腹水，每只小鼠可收獲 2-5ml 腹水，腹水經(jīng)純化后仍保持對(duì)纖維組織的高親和力。凍存采用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液，程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇后 48 小時(shí)貼壁率達(dá) 77%，抗體分泌功能恢復(fù) 82% 以上。
檢測(cè)鑒定：經(jīng)嚴(yán)格的微生物檢測(cè)，無細(xì)菌、真菌、支原體污染，符合雜交瘤細(xì)胞的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?？贵w亞型鑒定為 IgG2a 型，輕鏈為 κ 型；通過 ELISA、免疫組化等方法驗(yàn)證，該抗體能特異性結(jié)合纖維組織靶抗原，與非纖維組織的交叉反應(yīng)率低于 0.6%；染色體核型分析顯示，其染色體數(shù)目為 82-92 條，融合了親本 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的染色體特征，符合雜交瘤細(xì)胞的遺傳學(xué)特性；功能驗(yàn)證中，將該抗體用于腎纖維化組織切片免疫染色時(shí)，能特異性識(shí)別纖維靶抗原，陽性信號(hào)集中于纖維化區(qū)域，背景干擾低，證實(shí)其在纖維化疾病檢測(cè)中的實(shí)用性。
應(yīng)用領(lǐng)域：在纖維化疾病分子檢測(cè)方面，基于該細(xì)胞系分泌的抗體構(gòu)建的 ELISA 試劑盒，檢測(cè)靈敏度達(dá) 0.5ng/ml，線性范圍寬，適用于血清、纖維組織等多種樣本類型中纖維靶抗原的定量分析；在纖維化診斷試劑研發(fā)中，利用該抗體開發(fā)的免疫熒光探針，可用于腎、心肌等組織病理切片中靶抗原的可視化檢測(cè)，對(duì)腎纖維化的診斷符合率達(dá) 89%。在纖維免疫學(xué)研究中，可用于纖維抗原表位分析，通過肽掃描實(shí)驗(yàn)確定纖維抗原的特異性結(jié)合區(qū)域，為抗纖維化疫苗設(shè)計(jì)提供關(guān)鍵信息。此外，該細(xì)胞系可用于優(yōu)化纖維相關(guān)抗體生產(chǎn)工藝，通過調(diào)整懸浮培養(yǎng)的溫度、pH 值等條件，能使抗體產(chǎn)量提升 1.2-1.8 倍，有助于降低纖維相關(guān)單克隆抗體規(guī)模化生產(chǎn)的成本，為纖維化疾病的精準(zhǔn)診斷及治療研究提供了重要支持。
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