BY-1007 HB BrE-2小鼠雜交瘤細胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1007
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/7/22 10:51:17
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HB BrE-2小鼠雜交瘤細胞系
HB BrE-2小鼠雜交瘤細胞系是乳腺相關(guān)單克隆抗體制備與乳腺癌診斷研究領(lǐng)域的特色細胞模型，憑借穩(wěn)定分泌乳腺特異性抗體、優(yōu)異的乳腺抗原識別能力及良好的體外培養(yǎng)性能，在乳腺疾病分子檢測、乳腺癌診斷試劑研發(fā)及乳腺免疫學研究中應(yīng)用廣泛，為乳腺相關(guān)單克隆抗體的獲取與功能探索提供了可靠載體。
來源與背景：該細胞系源于 BALB/c 小鼠脾臟 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞的融合產(chǎn)物，通過經(jīng)典雜交瘤技術(shù)篩選克隆獲得。其建立過程是將經(jīng)乳腺特異性抗原免疫后的小鼠 B 淋巴細胞與永生化骨髓瘤細胞融合，利用 HAT 培養(yǎng)基篩選出成功融合的雜交瘤細胞，再經(jīng)有限稀釋法克隆和抗體乳腺靶向性檢測，最終得到能穩(wěn)定分泌針對乳腺靶抗原的單克隆抗體的細胞株。這一過程有效解決了多克隆抗體在乳腺抗原檢測中特異性不足、交叉反應(yīng)率高的問題，為獲取均一性高、乳腺靶向性強的抗體提供了穩(wěn)定來源，自建立以來，在乳腺癌早期診斷及乳腺疾病免疫檢測方法的建立中發(fā)揮了重要作用。
細胞特性：形態(tài)上呈現(xiàn)典型的雜交瘤細胞特征，貼壁生長時呈上皮樣多邊形，細胞質(zhì)內(nèi)可見乳腺相關(guān)抗原識別相關(guān)顆粒，細胞核大而圓，核質(zhì)比約 1:2.4，約 5% 的細胞可見雙核結(jié)構(gòu)，體現(xiàn)融合細胞的形態(tài)特點。核心特性顯著：抗體分泌穩(wěn)定高效，分泌量達 7-13μg/10?細胞 / 24h，連續(xù)傳代 55 次后，抗體分泌能力僅下降 7%，穩(wěn)定性優(yōu)于多數(shù)同類細胞系；乳腺抗原結(jié)合特異性高，與乳腺靶抗原的結(jié)合常數(shù)（Kd）達 10??M 級別，與非乳腺組織抗原的交叉反應(yīng)率低于 0.7%，確保了乳腺檢測結(jié)果的準確性；增殖能力穩(wěn)健，體外培養(yǎng)倍增時間約 52-58 小時，克隆形成率 38%，腹腔接種 BALB/c 小鼠后，13-19 天可形成腹水，腹水中抗體濃度達 2-6mg/ml，便于批量制備抗體。傳代時采用常規(guī)方法處理，傳代比例 1:3-1:4，當細胞密度達到 70%-75% 時需及時傳代，過度密集會導致抗體分泌量下降 16% 左右。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 1% 抗生素及 0.3% 乳腺組織提取液，培養(yǎng)環(huán)境控制在 37℃、5% CO?飽和濕度。關(guān)鍵培養(yǎng)要點：血清質(zhì)量關(guān)鍵，需使用低內(nèi)毒素胎牛血清（<0.3EU/ml），劣質(zhì)血清會使細胞活力降低 24%，抗體分泌量減少 30%；添加物作用顯著，乳腺組織提取液可維持抗體的乳腺靶向性，缺失會導致抗體與乳腺抗原的結(jié)合率下降 20%；無血清培養(yǎng)適配性較好，在無血清培養(yǎng)基中添加適量的胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白及乳腺生長因子，可維持細胞正常生長，且抗體純度能提高至 92% 以上，有利于后續(xù)的抗體純化；腹水制備規(guī)范，小鼠腹腔預先注射降植烷，7 天后接種 1.1×10?個細胞，14-20 天收集腹水，每只小鼠可收獲 2-4ml 腹水，腹水經(jīng)純化后仍保持對乳腺組織的高親和力。凍存采用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液，程序降溫后液氮保存，復蘇后 48 小時貼壁率達 77%，抗體分泌功能恢復 82% 以上。
檢測鑒定：經(jīng)嚴格的微生物檢測，無細菌、真菌、支原體污染，符合雜交瘤細胞的質(zhì)量標準?？贵w亞型鑒定為 IgG2a 型，輕鏈為 κ 型；通過 ELISA、免疫組化等方法驗證，該抗體能特異性結(jié)合乳腺組織靶抗原，與非乳腺組織的交叉反應(yīng)率低于 0.6%；染色體核型分析顯示，其染色體數(shù)目為 82-92 條，融合了親本 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞的染色體特征，符合雜交瘤細胞的遺傳學特性；功能驗證中，將該抗體用于乳腺癌組織切片免疫染色時，能特異性識別乳腺靶抗原，陽性信號集中于病變區(qū)域，背景干擾低，證實其在乳腺疾病檢測中的實用性。
應(yīng)用領(lǐng)域：在乳腺疾病分子檢測方面，基于該細胞系分泌的抗體構(gòu)建的 ELISA 試劑盒，檢測靈敏度達 0.5ng/ml，線性范圍寬，適用于血清、乳腺組織等多種樣本類型中乳腺靶抗原的定量分析；在乳腺癌診斷試劑研發(fā)中，利用該抗體開發(fā)的免疫熒光探針，可用于乳腺病理切片中靶抗原的可視化檢測，對乳腺癌的診斷符合率達 89%。在乳腺免疫學研究中，可用于乳腺抗原表位分析，通過肽掃描實驗確定乳腺抗原的特異性結(jié)合區(qū)域，為乳腺癌疫苗設(shè)計提供關(guān)鍵信息。此外，該細胞系可用于優(yōu)化乳腺相關(guān)抗體生產(chǎn)工藝，通過調(diào)整懸浮培養(yǎng)的溫度、pH 值等條件，能使抗體產(chǎn)量提升 1.2-1.8 倍，有助于降低乳腺相關(guān)單克隆抗體規(guī)?；a(chǎn)的成本，為乳腺疾病的精準診斷及乳腺癌的早期篩查提供了重要支持。
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