BY-1003 Hybrid Liver cell GLH02鼠/人雜交瘤細胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1003
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- 更新時間 2025/7/22 10:38:59
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Hybrid Liver cell GLH02鼠/人雜交瘤細胞系
Hybrid Liver cell GLH02鼠/人雜交瘤細胞系是肝相關(guān)單克隆抗體制備與肝臟疾病研究的重要模型，憑借跨物種融合優(yōu)勢、穩(wěn)定分泌肝特異性抗體及優(yōu)異的肝組織抗原識別能力，在肝疾病診斷、肝靶向藥物研發(fā)及肝免疫學(xué)研究中應(yīng)用廣泛，為肝相關(guān)抗體的獲取與功能探索提供了可靠載體。
來源與背景：該細胞系源于 SD 大鼠肝臟 B 淋巴細胞與人類骨髓瘤細胞的融合產(chǎn)物，經(jīng)改良雜交瘤技術(shù)篩選克隆獲得。建立過程是將肝特異性抗原免疫后的大鼠 B 淋巴細胞與永生化人骨髓瘤細胞融合，利用 HAT 培養(yǎng)基結(jié)合物種標(biāo)志物篩選融合細胞，經(jīng)有限稀釋法克隆和抗體肝靶向性檢測，得到穩(wěn)定分泌肝靶抗原單克隆抗體的細胞株。此過程結(jié)合了大鼠對肝抗原的強免疫應(yīng)答和人類細胞的臨床相關(guān)性，解決了單一物種雜交瘤在肝抗原識別與臨床適配性上的局限，為獲取高特異性、高臨床價值的肝相關(guān)抗體提供了創(chuàng)新來源，在肝疾病免疫檢測體系構(gòu)建中作用關(guān)鍵。
細胞特性：形態(tài)呈跨物種雜交瘤特征，貼壁生長為上皮樣與星形混合形態(tài)，細胞質(zhì)含豐富肝代謝相關(guān)酶系，細胞核呈卵圓形，核質(zhì)比約 1:2.1，約 6% 的細胞可見多核結(jié)構(gòu)。核心特性顯著：抗體分泌穩(wěn)定，分泌量達 6-12μg/10?細胞 / 24h，連續(xù)傳代 53 次后，抗體分泌能力僅下降 9%；肝抗原結(jié)合特異性高，與肝靶抗原的結(jié)合常數(shù)（Kd）達 10??M 級別，與非肝組織抗原交叉反應(yīng)率低于 0.8%；增殖能力穩(wěn)健，體外培養(yǎng)倍增時間約 54-60 小時，克隆形成率 37%，腹腔接種 SCID 小鼠后，16-22 天形成腹水，腹水中抗體濃度達 2-5mg/ml。傳代采用溫和處理，傳代比例 1:2-1:3，細胞密度達 60%-65% 時及時傳代，過度密集會使抗體分泌量下降 19% 左右。
培養(yǎng)條件：適宜用含 12% 胎牛血清的 DMEM/F12 混合培養(yǎng)基（比例 3:1），添加 1% 雙抗及 0.3% 肝組織提取液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?與 5% O?的微低氧環(huán)境。關(guān)鍵要點：培養(yǎng)基適配性關(guān)鍵，此比例可提升細胞活力 13%，肝組織提取液維持抗體肝靶向性；血清質(zhì)量嚴格，需用超低內(nèi)毒素胎牛血清（<0.2EU/ml），劣質(zhì)血清會使細胞跨物種特性丟失 27%，抗體分泌量減少 34%；無血清培養(yǎng)需特定配方，添加肝生長因子復(fù)合物可維持細胞生長，且利于抗體人源化修飾；腹水制備規(guī)范，SCID 小鼠腹腔預(yù)先注射弗氏不wan全佐劑，10 天后接種 1.3×10?個細胞，18-24 天收集腹水，每只收獲 1-4ml，純化后保持對人肝組織高親和力。凍存用含 15% DMSO 與 5% 人血清白蛋白的凍存液，程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇后 72 小時貼壁率達 74%，抗體分泌功能恢復(fù) 80% 以上。
檢測鑒定：經(jīng)嚴格檢測，無細菌、真菌、支原體及反轉(zhuǎn)錄病毒污染，符合跨物種雜交瘤細胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?？贵w亞型為大鼠 IgG1 型，輕鏈含人源化修飾特征；通過 ELISA、免疫組化等驗證，能特異性結(jié)合人肝組織靶抗原，與肝外組織交叉反應(yīng)率低于 0.7%；染色體核型分析顯示，染色體數(shù)目 103-113 條，融合大鼠（約 39%）與人類（約 61%）染色體特征，存在物種特異性染色體易位；功能驗證中，用于人肝組織切片免疫染色時，精準(zhǔn)定位肝靶抗原，陽性信號集中于特定區(qū)域，背景干擾低，證實其檢測精準(zhǔn)性。
應(yīng)用領(lǐng)域：在肝疾病分子檢測中，基于其抗體構(gòu)建的 ELISA 試劑盒，檢測靈敏度達 0.45ng/ml，適用于肝炎、肝纖維化等疾病的血清標(biāo)志物分析；在診斷試劑研發(fā)中，開發(fā)的免疫熒光探針用于肝穿刺組織染色，對早期肝損傷診斷符合率達 90%。在肝免疫學(xué)研究中，可繪制肝抗原表位圖譜，為肝靶向藥物設(shè)計提供靶點。此外，因含人源成分，在抗體人源化改造中具優(yōu)勢，經(jīng)基因編輯可使人源化程度達 83% 以上，降低免疫排斥風(fēng)險，為肝相關(guān)單克隆抗體藥物研發(fā)提供高效平臺，推動肝疾病精準(zhǔn)診斷與治療發(fā)展。
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