Hybrid Liver cell GLH02鼠/人雜交瘤細胞系
Hybrid Liver cell GLH02鼠/人雜交瘤細胞系是肝相關(guān)單克隆抗體制備與肝臟疾病研究的重要模型,憑借跨物種融合優(yōu)勢、穩(wěn)定分泌肝特異性抗體及優(yōu)異的肝組織抗原識別能力,在肝疾病診斷、肝靶向藥物研發(fā)及肝免疫學(xué)研究中應(yīng)用廣泛,為肝相關(guān)抗體的獲取與功能探索提供了可靠載體。
來源與背景:該細胞系源于 SD 大鼠肝臟 B 淋巴細胞與人類骨髓瘤細胞的融合產(chǎn)物,經(jīng)改良雜交瘤技術(shù)篩選克隆獲得。建立過程是將肝特異性抗原免疫后的大鼠 B 淋巴細胞與永生化人骨髓瘤細胞融合,利用 HAT 培養(yǎng)基結(jié)合物種標(biāo)志物篩選融合細胞,經(jīng)有限稀釋法克隆和抗體肝靶向性檢測,得到穩(wěn)定分泌肝靶抗原單克隆抗體的細胞株。此過程結(jié)合了大鼠對肝抗原的強免疫應(yīng)答和人類細胞的臨床相關(guān)性,解決了單一物種雜交瘤在肝抗原識別與臨床適配性上的局限,為獲取高特異性、高臨床價值的肝相關(guān)抗體提供了創(chuàng)新來源,在肝疾病免疫檢測體系構(gòu)建中作用關(guān)鍵。
細胞特性:形態(tài)呈跨物種雜交瘤特征,貼壁生長為上皮樣與星形混合形態(tài),細胞質(zhì)含豐富肝代謝相關(guān)酶系,細胞核呈卵圓形,核質(zhì)比約 1:2.1,約 6% 的細胞可見多核結(jié)構(gòu)。核心特性顯著:抗體分泌穩(wěn)定,分泌量達 6-12μg/10?細胞 / 24h,連續(xù)傳代 53 次后,抗體分泌能力僅下降 9%;肝抗原結(jié)合特異性高,與肝靶抗原的結(jié)合常數(shù)(Kd)達 10??M 級別,與非肝組織抗原交叉反應(yīng)率低于 0.8%;增殖能力穩(wěn)健,體外培養(yǎng)倍增時間約 54-60 小時,克隆形成率 37%,腹腔接種 SCID 小鼠后,16-22 天形成腹水,腹水中抗體濃度達 2-5mg/ml。傳代采用溫和處理,傳代比例 1:2-1:3,細胞密度達 60%-65% 時及時傳代,過度密集會使抗體分泌量下降 19% 左右。
培養(yǎng)條件:適宜用含 12% 胎牛血清的 DMEM/F12 混合培養(yǎng)基(比例 3:1),添加 1% 雙抗及 0.3% 肝組織提取液,培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?與 5% O?的微低氧環(huán)境。關(guān)鍵要點:培養(yǎng)基適配性關(guān)鍵,此比例可提升細胞活力 13%,肝組織提取液維持抗體肝靶向性;血清質(zhì)量嚴格,需用超低內(nèi)毒素胎牛血清(<0.2EU/ml),劣質(zhì)血清會使細胞跨物種特性丟失 27%,抗體分泌量減少 34%;無血清培養(yǎng)需特定配方,添加肝生長因子復(fù)合物可維持細胞生長,且利于抗體人源化修飾;腹水制備規(guī)范,SCID 小鼠腹腔預(yù)先注射弗氏不wan全佐劑,10 天后接種 1.3×10?個細胞,18-24 天收集腹水,每只收獲 1-4ml,純化后保持對人肝組織高親和力。凍存用含 15% DMSO 與 5% 人血清白蛋白的凍存液,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇后 72 小時貼壁率達 74%,抗體分泌功能恢復(fù) 80% 以上。
檢測鑒定:經(jīng)嚴格檢測,無細菌、真菌、支原體及反轉(zhuǎn)錄病毒污染,符合跨物種雜交瘤細胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)??贵w亞型為大鼠 IgG1 型,輕鏈含人源化修飾特征;通過 ELISA、免疫組化等驗證,能特異性結(jié)合人肝組織靶抗原,與肝外組織交叉反應(yīng)率低于 0.7%;染色體核型分析顯示,染色體數(shù)目 103-113 條,融合大鼠(約 39%)與人類(約 61%)染色體特征,存在物種特異性染色體易位;功能驗證中,用于人肝組織切片免疫染色時,精準(zhǔn)定位肝靶抗原,陽性信號集中于特定區(qū)域,背景干擾低,證實其檢測精準(zhǔn)性。
應(yīng)用領(lǐng)域:在肝疾病分子檢測中,基于其抗體構(gòu)建的 ELISA 試劑盒,檢測靈敏度達 0.45ng/ml,適用于肝炎、肝纖維化等疾病的血清標(biāo)志物分析;在診斷試劑研發(fā)中,開發(fā)的免疫熒光探針用于肝穿刺組織染色,對早期肝損傷診斷符合率達 90%。在肝免疫學(xué)研究中,可繪制肝抗原表位圖譜,為肝靶向藥物設(shè)計提供靶點。此外,因含人源成分,在抗體人源化改造中具優(yōu)勢,經(jīng)基因編輯可使人源化程度達 83% 以上,降低免疫排斥風(fēng)險,為肝相關(guān)單克隆抗體藥物研發(fā)提供高效平臺,推動肝疾病精準(zhǔn)診斷與治療發(fā)展。
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