細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測試劑盒     BB-48113-1

細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測試劑盒   

使用方法：

使用注意事項：

• 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。
• 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
• 染色后立即進(jìn)行分析。
• BBcellProbe^TM FL4探針容易受潮，穩(wěn)定性較差，注意干燥保存。
• BBcellProbe^TM FL4探針母液時要用干燥的新吸頭，不能使用含水的吸頭。
• 未使用完的BBcellProbe^TM FL4探針母液請擰緊螺旋蓋，避免受潮失效。母液遇水極易分解，如果*不用，建議根據(jù)每次使用量分裝保存，用封口膜封口，并用鋁箔紙包裹，放在一個密閉性能好的塑料袋中，并放入一包干燥劑，在≤-20℃密封避光保存。
• BBcellProbe^TM FL4探針工作液含水，配制后不可以*保存，須現(xiàn)配現(xiàn)用。
• BBcellProbe^TM FL4融解后離心至管底部再打開螺旋蓋，防止開蓋時損失。
• 可以在染色溶液中加入等體積的20% Pluronic F127溶液（可選步驟），Pluronic F127 可以幫助BBcellProbe^TM FL4更快進(jìn)入細(xì)胞，不建議在Pluronic F127中*保存BBcellProbe^TM FL4溶液。
• 標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實(shí)驗(yàn)前，請先確定*條件。以下方法僅供參考。

1. 染色工作液的配制：

用 HBSS 稀釋 BBcellProbe^TM FL4溶液400倍-4000倍，配制成BBcellProbe^TM FL4染色工作液。

【注】：*該探針加載濃度在400-4000倍稀釋，具體的使用濃度需根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行優(yōu)化。

為了避免過度加載造成細(xì)胞毒性，建議在取得有效結(jié)果的基礎(chǔ)上盡量使用zui低探針濃度。

工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復(fù)凍存。

1. 收集培養(yǎng)好的待測細(xì)胞樣本，用HBSS洗滌細(xì)胞3次。
2. 離心去上清后，將 BBcellProbe^TM FL4染色工作液加入細(xì)胞，在37℃孵育20 -60分鐘。

【注】：關(guān)于孵育的時間，*預(yù)實(shí)驗(yàn)不能確定，建議先孵育30分鐘。

根據(jù)熒光效果：如果太強(qiáng)，適當(dāng)縮短時間；如果熒光強(qiáng)度太弱，適當(dāng)延長時間。

染色工作液加入量以覆蓋細(xì)胞即可。

1. 加入 5 倍體積的含有1%胎牛血清的 HBSS，再繼續(xù)孵育40分鐘。
2. 用HBSS洗滌細(xì)胞2-3次。用HBSS重懸細(xì)胞
3. 37℃下孵育10 分鐘，然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子檢測。激發(fā)波長 488-495nm，發(fā)射波長516nm。

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