丙二醛（MDA）檢測試劑盒     BB-4709

丙二醛（MDA）檢測試劑盒

   使用方法：

• 樣品處理

①血清、血漿、尿液、腦脊液樣本：從待測樣本中分理出的血清或血漿不應有溶血，直接檢測，如超過線性范圍，用生理鹽水稀釋后檢測。

②組織、細胞等樣本：組織或細胞可以使用PBS或貝博的Western及IP細胞裂解液等進行勻漿或裂解。勻漿或裂解組織時，組織重量占勻漿液或裂解液的比例應為10% 。勻漿或裂解等樣品制備步驟宜在冰浴或4℃進行操作。樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續(xù)計算單位蛋白重量組織或細胞內的MDA含量。

1. 試劑配制：

TBA工作液的配制： 稱取適量TBA，用TBA稀釋液配制成濃度為0.68%的TBA工作液。TBA工作液需*溶解后再使用，可以加熱到60－70℃促溶，并可通過反復劇烈Vortex促溶。配制好的TBA工作液4℃避光保存，至少3－4個月內有效。

1. MDA檢測工作液的配制：臨檢測前，根據(jù)待測定的樣品數(shù)(含對照)，參考下表新鮮配制適量的MDA檢測工作液。

1.  稀釋標準品：

取適量標準品用恰當溶液稀釋至1、2、5、10、20、50μM(如果進行簡易快速檢測，標準品直接稀釋10μM)。注意：待測樣品為血清、血漿時，標準品宜用生理鹽水稀釋；待測樣品由勻漿液、裂解液、PBS獲得時，標準品宜用相同溶液稀釋。其原則是保證空白管、標準管、測定管具有可比性。

1. 樣品測定: 

離心管或其它適當容器內加入0.1ml勻漿液、裂解液、PBS、生理鹽水等適當溶液作為空白對照(注意：待測樣品為血清、血漿時，標準品宜用生理鹽水稀釋；待測樣品由勻漿液、裂解液、PBS獲得時，標準品宜用相同溶液稀釋。加入0.1ml 上述不同濃度標準品用于制作標準曲線，加入0.1ml樣品用于測定；隨后加入4.14mlMDA檢測工作液。

在帶蓋試管中按下表配制檢測反應體系：

1. 混勻, 加蓋，95℃水浴煮沸40min，加熱時務必注意避免液體暴沸濺出。如果使用加熱塊(Heat block)進行加熱注意用重物壓緊離心管蓋；如果使用沸水浴，則需使用可把蓋子鎖死的離心管或螺旋蓋離心管，或用Parafilm封住離心管口，用針頭刺一小孔。zui方便和準確的加熱方法是使用帶有熱蓋并可以加熱金屬浴。
2. 水浴或流水冷卻至室溫。
3. 3500-4000rpm離心10分鐘。
4. 取上清，蒸餾水調零，用分光光度計或酶標儀檢測532nm或535nm處吸光值。如果用分光光度計，比色杯光徑應為1cm，加入的上清量因根據(jù)比色杯的zui小量程而定；如果用酶標儀，96孔板每孔應加200μl上清液。如果不方便測定532nm或535nm的吸光度，也可以測定530-540nm之間的吸光度。

結果處理：

血清中MDA含量（umol/L）=（測定管吸光度-空白管吸光度）÷（標準管吸光度-空白管吸光度）×10 ×樣品測試前稀釋倍數(shù)

組織細胞中MDA含量（umol/mg）=（測定管吸光度-空白管吸光度）÷（標準管吸光度-空白管吸光度）× 10 ÷ 樣品蛋白濃度（mg/ml）

參考取樣量：

血清（漿）尿液取0.1ml；低密度脂蛋白懸液取0.1~0.2 ml。

食用油取0.03ml；細胞懸液細胞上清0.1~0.2 ml。

肝組織、心肌、肌肉組織等，取5%或10%勻漿0.1~0.2 ml較好。

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