兔外周血白細(xì)胞運(yùn)輸和保存

發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

（2）收到細(xì)胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。

兔外周血白細(xì)胞接受后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

2） 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基。

4） 如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代。

5） 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備基礎(chǔ)培養(yǎng)基100%；北美胎牛血清5%，添加劑1%；雙抗1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1）選用原代細(xì)胞生長狀態(tài)好（90－95％），生長數(shù)量大于5×105進(jìn)行傳代。

2）吸除原代細(xì)胞培養(yǎng)液。用含雙抗的1×PBS（pH7.4）清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶2次。

3）3ml細(xì)胞消化液加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶，輕輕搖動，使細(xì)胞消化液覆細(xì)胞培養(yǎng)瓶底。

注：推薦客戶用鈥飛生物原代細(xì)胞消化液。

4）細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于5%CO2、95%空氣、37oC培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)2分鐘后，在顯微鏡下觀察原代細(xì)胞的消化狀態(tài)。

請記?。喝缳N壁細(xì)胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后，用手指輕輕拍打細(xì)胞培養(yǎng)側(cè)部至大部分貼壁細(xì)胞懸浮，加入3ml血清終止液，終止細(xì)胞消化。每種原代細(xì)胞的消化時間是有差異的。

5）吹打培養(yǎng)瓶中懸浮細(xì)胞若干次，再吸出細(xì)胞懸浮液，轉(zhuǎn)入15ml離心管中，1000rpm離心5分鐘。注：推薦客戶用鈥飛生物原代細(xì)胞培養(yǎng)體系。

6）棄離心管中液體，加入原代細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。細(xì)胞計數(shù)，確定細(xì)胞數(shù)量。

7）細(xì)胞分瓶后，加入適量原代細(xì)胞培養(yǎng)液至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于5%CO2、95%空氣、37oC培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24小時。

武漢鈥飛生物科技有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

        一、原代細(xì)胞服務(wù)：
               各類模式哺乳動物的多種原代細(xì)胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源
               原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗外包服務(wù)

        

        二、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶定制服務(wù)等