試劑名稱：Coelenterazine H（腔腸素 H）

儲存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運輸。

產地：西安強化生物

CAS：50909-86-9

分子式：C26H21N3O2

分子量：407.46

一、描述與基本特性：

Coelenterazine H（腔腸素 H）是天然腔腸素的去羥基衍生物，外觀為黃色固體，可溶于甲醇、乙醇、丙二醇，但不溶于 DMSO。

光學特性：紫外吸收峰（λmax）為 433 nm，熒光發(fā)射峰為 466 nm（藍光）。

腔腸素 H 是雙功能分子，兼具兩種核心作用：

熒光素酶底物：

作為海腎熒光素酶（Rluc）、高斯熒光素酶（Gluc）等的作用底物，在氧氣存在下被氧化，產生高能中間體并發(fā)射 450–480 nm 藍光，發(fā)光強度為天然腔腸素的 10–20 倍 。

光蛋白輔因子：

與水母發(fā)光蛋白結合形成復合物。當鈣離子結合（需 3 個鈣離子）時，腔腸素 H 被氧化生成 Coelenteramide，釋放 CO2和 466 nm 藍光，實現(xiàn)對鈣離子濃度的超靈敏檢測。

二、作用機制

腔腸素 H 是海洋生物發(fā)光系統(tǒng)的核心底物，其作用機制主要依賴兩類生物分子：熒光素酶和發(fā)光蛋白。

1. 作為熒光素酶底物（報告基因分析）

發(fā)光原理：

在氧氣存在下，熒光素酶催化腔腸素 H 氧化，生成高能量中間體 Coelenteramide，同時釋放光子（藍光，峰值波長 466 nm）。

優(yōu)勢：

發(fā)光強度比天然腔腸素 高10倍以上，靈敏度提升。

無需ATP，適用于活體成像和體內報告基因檢測。

2. 作為水母發(fā)光蛋白輔因子（鈣離子檢測）

鈣敏感機制：

腔腸素 H 與水母發(fā)光蛋白（Aequorin）結合形成復合物。當 Ca2+ 結合該復合物時，觸發(fā)腔腸素 H 氧化發(fā)光，發(fā)光強度與 Ca2+濃度呈 三次冪正相關。

檢測優(yōu)勢：

對 Ca2+ 的敏感性高于天然腔腸素，可檢測 0.1 μM ~ >100 μM 的微小濃度變化。

無自體熒光干擾，背景信號低，適用于活細胞鈣振蕩監(jiān)測。

3. 非酶促氧化反應（活性氧檢測）

在 活性氧（ROS） 存在下，腔腸素 H 可發(fā)生自發(fā)氧化并發(fā)光，用于定量細胞/組織內 ROS 水平。

4. 生物發(fā)光共振能量轉移（BRET）

腔腸素 H 被熒光素酶氧化產生的藍光（~466 nm）可激發(fā)鄰近的 熒光受體蛋白（如GFP、EYFP），實現(xiàn)能量轉移（發(fā)射綠光，~530 nm）。

應用：

研究蛋白質相互作用（如GPCR信號通路）。

消除細胞數(shù)量/類型差異對信號的干擾，適用于藥物高通量篩選。

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用于科研相關領域，不能用于人體實驗！

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