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一抗的選擇2010/07/29

一抗的選擇檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮如下幾種因素：分析試驗應用的類型l樣本蛋白的結構性質(zhì)l樣本的種屬l抗體宿主的種類l抗體的標記和檢測l1.分析試驗應用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應用于WBIHCICCELASA分析等，如果抗體說明書沒有提及的應用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗驗證，如果抗體不適用某些分析試驗，則會在抗體說明書上標注出來不適于某

miRNA的特征、功能及識別方法等詳解2010/07/29

miRNA的特征、功能及識別方法等詳解什么是miRNAMicroRNAs（miRNAs）是一種大小約21—23個堿基的單鏈小分子RNA，是由具有發(fā)夾結構的約70-90個堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（雙鏈）但是和siRNA密切相關。據(jù)推測，這些非編碼小分子RNA（miRNAs）參與調(diào)控基因表達，但其機制區(qū)別于siRNA介導的mRNA降解。*個被確認的miRNA是在線蟲中發(fā)現(xiàn)的lin-4和let-7，隨后多個研究小組在包括人類、果蠅、植物等多種生物物種中鑒別出

生物化學實驗基本技術：破碎技術 2010/07/26

生物化學實驗基本技術：破碎技術除了某些細胞外的多肽激素和某些蛋白質(zhì)與酶以外，對于細胞內(nèi)或多細胞生物組織中的各種生物大分子的分離純化，都需要事先將細胞和組織破碎，使生物大分子充分釋放到溶液中，并不丟失生物活性。不同的生物體或同一生物體的不同部位的組織，其細胞破碎的難易不一，使用的方法也不相同，如動物臟器的細胞膜較脆弱，容易破碎，植物和微生物由于具有較堅固的纖維素、半纖維素組成的細胞壁，要采取專門的細胞破碎方法。1.機械破碎（1）研磨研磨是將剪碎的動物組織置于研缽或勻漿器中，加入少量石英砂研磨或勻漿

大鼠TNF-B酶聯(lián)免疫分析ELISA 2010/07/23

大鼠TNF-B酶聯(lián)免疫分析ELISA預期應用ELISA法定量測定大鼠血清、血漿或其它相關液體中TNF-B含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中TNF-B水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入TNF-B、生物素化的抗TNF-B抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TNF-B呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算

酶的提取，分離純化和生產(chǎn)方法2010/07/22

酶的提取，分離純化和生產(chǎn)方法酶的提取，分離純化（一）細胞破碎處理許多酶都存在于細胞內(nèi)。為了提取這些胞內(nèi)酶，首先需要對細胞進行破碎處理。細胞破碎的方法很多，主要包括機械破碎法、物理破碎法、化學破碎法和酶學破碎法等。機械破碎法是指利用搗碎機、研磨器或勻漿器等將細胞破碎。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細胞破碎?；瘜W破碎法是指利用甲醛、丙酮等有機溶劑或表面活性劑作用于細胞膜，使細胞膜的結構遭到破壞或透性發(fā)生改變。酶學破碎法是指選用合適的酶，使細胞壁遭到破壞，進而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎。

細菌數(shù)量的測定方法2010/07/21

細菌數(shù)量的測定方法1、計數(shù)器測定法即用血細胞計數(shù)器進行計數(shù)。取一定體積的樣品細胞懸液置于血細胞計數(shù)器的計數(shù)室內(nèi)，用顯微鏡觀察計數(shù)。由于計數(shù)室的容積是一定的（0.1mm3），因而根據(jù)計數(shù)器刻度內(nèi)的細菌數(shù)，可計算樣品中的含菌數(shù)。本法簡便易行，可立即得出結果。本法不僅適于細菌計數(shù)，也適用于酵母菌及霉菌孢子計數(shù)。2、電子計數(shù)器計數(shù)法電子計數(shù)器的工作原理是測定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個細胞，當一個細胞通過這個小孔時，電阻明顯增加，形成一個脈沖，自動記錄在電子記錄裝置上。該法測定結果較準確，但它

白細胞介素-2（IL-2）生物學活性測定2010/07/21

白細胞介素-2（IL-2）生物學活性測定實驗目的1.掌握IL-2生物學活性測定的原理。2.熟悉IL-2生物學活性測定的實驗方法和結果計算。實驗原理IL-2是由Th細胞產(chǎn)生的淋巴因子，在淋巴細胞增殖分化過程中起到非常重要的作用。IL-2活性測定基于IL-2能維持IL-2依賴細胞的代謝和存活，促進這類細胞的增殖。細胞在增殖時能量代謝活躍，可產(chǎn)生大量的能量以供合成多種大分子物質(zhì)和細胞分裂所需，能量代謝的水平與細胞合成DNA水平基本平行，因此，測定細胞能量代謝的水平可以間接地反映細胞增殖情況。MTT（四

地高辛配基隨機標記DNA探針2010/07/21

地高辛配基隨機標記DNA探針1．標記DNA探針每次標準的反應可標記10ng至3?線性的DNA，也可標記更大量的DNA，但所有的成分和體積要相應增加。（1）DNA探針熱變性，煮沸10min，迅速冷卻于冰/乙醇中5min以上，待用。（2）取Eppendorf管（1.5ml）置于冰上，加下列及試劑：新鮮變性的DNA1-3?六聚核苷酸混合物2?（管5）dNTP標記用混合底物2?（管6）加無菌重蒸水至19?DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow）1?（管7）（3）在37℃保溫至少60min，可到20h。（4）

胰蛋白酶的制備及活力的測定2010/07/20

胰蛋白酶的制備及活力的測定實驗原理胰蛋白酶是以無活性的酶原形式存在于動物胰臟中，在Ca2+的存在下，被腸激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活，從肽鏈N端賴氨酸和異亮氨酸殘基之間的肽鍵斷開，失去一段六肽，分子構象發(fā)生一定改變后轉變?yōu)橛谢钚缘囊鹊鞍酌?。胰蛋白酶原的分子量約為24000，其等電點約為pH8.9，胰蛋白酶的分子量與其酶原接近（23300），其等電點約為pH10.8，zui適pH7.6～8.0，在pH=3時zui穩(wěn)定，低于此pH時，胰蛋白酶易變性，在pH5時易自溶。Ca2+離子對胰蛋白酶有穩(wěn)定作

流式細胞儀血小板分析 2010/07/19

流式細胞儀血小板分析流式細胞儀血小板分析應用范圍通過分析信號傳遞、細胞骨架結構、顆粒釋放、糖蛋白構形、膜磷脂、與抗凝因子的結合和微粒形成，分析血小板活化，血小板對刺激物的反應性通過分析受激后表面結合蛋白觸發(fā)凝血鏈式反應和表面糖蛋白缺陷檢測，分析血小板止血功能的獲得性和遺傳性缺陷結合血小板大小，檢測血小板RNA含量，分析血小板成熟度，計數(shù)網(wǎng)織血小板發(fā)現(xiàn)血小板抗體，做定性和定量分析血小板分析的臨床應用血小板活化導致的血栓前綜合癥：如糖尿病、非免疫性血小板活化血管缺陷導致的血小板活化：如動脈粥樣硬化、

免疫組化操作應用規(guī)程2010/07/16

免疫組化操作規(guī)程（一）、儀器設備1）18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫(yī)用微波爐；2）水浴鍋（二）、試劑1）PBS緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L。2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB，pH6.0，1000ml）：檸檬酸三鈉3g，檸檬酸0.4g。3）0.5mol/LEDTA緩沖液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10mmol/LNaOH調(diào)至pH8.

細胞冷凍和復蘇 2010/07/16

細胞冷凍和復蘇基本原理：在長期的細胞培養(yǎng)過程中可能會出現(xiàn)微生物污染或基因型改變等情況，會導致具有優(yōu)良特性細胞系的丟失。為防止這些細胞的丟失，細胞可以經(jīng)快速冷凍并幾乎無限期保存在非常低的溫度下，如液氮（-176℃）。試劑和設備：冷凍液:90%滅活血清+10%DMSO（或甘油），用0.45μm微孔濾膜過濾除菌，4℃保存；培養(yǎng)液；臺盼藍溶液（0.4%溶解于PBS）；70%乙醇；組織培養(yǎng)瓶；15-50ml無菌圓錐底離心試管；離心機；血球計數(shù)板；超凈工作臺；光學顯微鏡；37℃水浴；冷凍管；-80℃冰箱；液

血清的質(zhì)量標準2010/07/16

血清的質(zhì)量標準血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素：一是取材對象，二是取材過程。用于取材的動物應健康無病并且在的出生天數(shù)之內(nèi)，取材過程應嚴格按照操作規(guī)程執(zhí)行，制備出的血清要經(jīng)過嚴格的質(zhì)量鑒定。WHO公布的《用動物細胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求：1.牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。2.有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。3.證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。4.血清要通過濾膜過濾除菌，保證無菌。5.無細菌、霉菌、支原體和病毒

蛋白酶保存2010/07/15

蛋白酶保存問：我要提取一種蛋白水解酶，打算保存在－80度。用時取出凍融，這樣對酶活性有影響么？這種低溫保存的酶怎樣放置使用時活性的喪失呢？答：-80應該可以，再有幾個建議：盡量以高濃度保存，使用時再稀釋成工作濃度；分裝成小管，每次只用一小管別全凍融；加一定量的甘油（10-50%）有助于保護酶的活性。

抗體與免疫球蛋白有什么不同？2010/07/15

抗體與免疫球蛋白有什么不同？生物科技發(fā)展在中國整個科技史都處于落后狀態(tài)，近年來，國家科技迅猛發(fā)展，取的了可喜的成績，過去有很長一段時間有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分，故曾把抗體統(tǒng)稱為兩種（γ）球蛋白。后來發(fā)現(xiàn)，抗體并不都在γ區(qū)；并且位于γ區(qū)的球蛋白，也不一定都具有抗體活性。1964年，世界衛(wèi)生組織舉行專門會議，將具有抗體活性以及與抗體相關的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白（Ig），如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血癥、冷球蛋白血癥等患者血清中存在的異常免疫球蛋白以及正常人天然存在的免疫球蛋白亞單位等。因

invitrogen產(chǎn)品現(xiàn)貨2010/06/21

上海嶸崴達專業(yè)經(jīng)營進品實驗室試劑，耗材，以下為invitrogen產(chǎn)品現(xiàn)貨M32701GoatAnti-MouseIgG3（gamma）HumanAds.FITC200-800T0.5mL￥1,010M2AFPMouseIgG2aFITC+MouseIgG2aR-PE2color50T0.5mL￥1,310R302rhodamine12325mg￥1,310MH1041MouseAnti-HumanIgG4FcPurified[MouseIgG1K:HP6025]0.5mL0.25mg￥1,56

PeproTech細胞因子使用2010/04/02

PeproTech細胞因子中不含載體蛋白（CarrierProtein）或其他添加劑（如BSA、HAS或蔗糖等），并且通常以zui少量的鹽來進行凍干處理，因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi)，形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后，務必在開蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底（此時能否見到白色沉淀均屬正?，F(xiàn)象）。1．離心：高速離心（10,000rpm）20-30秒，或低速離心（2,000rpm）5分鐘。2．溶解（Reconstitution）：用去離子水或其它緩沖液（

抗體的制備方法與原理 2010/03/18

抗體的制備方法與原理一、抗血清的制備有了質(zhì)量好的抗原，還必須選擇適當?shù)拿庖咄緩?，才能產(chǎn)生質(zhì)量好（特異性強和效價高）的抗體。（一）用于免疫的動物作免疫用的動物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據(jù)抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數(shù)量，如一般制備抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因動物反應良好，而且能夠提供足夠數(shù)量的血清，用于免疫的動物應適齡，健壯，無感染性疾患，為///雄性，此外還需十分注意動物的飼養(yǎng)，以消除動物的個體

常用抗體的應用范圍及選用2010/03/08

常用抗體的應用范圍及選用在臨床活檢工作中，對于各種腫瘤的正確判斷，歷來是外科病理學的核心問題。因它關系到患者的治療和預后的問題。在免疫組化技術沒開展以前，主要靠HE，特殊染色和組織化學來進行鑒別和診斷各種腫瘤，這些在當時雖然解決了不少的問題，但是對于較為復雜，較為多型性的腫瘤，就不能對其起源及所含的成分作出正確的判斷。隨著免疫組化工作的開展，給許多以往有待于解釋原因的病理診斷上帶來了福音。許多以往無法解釋原因的病例，經(jīng)現(xiàn)今免疫組化染色技術的處理后，能夠?qū)ζ淦鹪?，相關的抗原或抗體成份給予顯示出來，

抗體選擇指南2010/03/04

抗體選擇指南檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮如下幾種因素：?分析試驗應用的類型?樣本蛋白的結構性質(zhì)?樣本的種屬?抗體宿主的種類?抗體的標記和檢測1.分析試驗應用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應用于WBIHCICCELASA分析等，如果抗體說明書沒有提及的應用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗驗證，如果抗體不適用某些分析試驗，則會在抗體說明書上標注出來不適于