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微量移液器的實驗室簡單檢測與校準2010/12/18

（一）氣密性檢測移液器吸滿液體后，手持垂直放置15s，檢查吸嘴的尖頭有無液滴，如有，則說明漏氣。（二）準確性檢測1）量程小于1ul，建議使用分光光度法檢測。將移液器調(diào)至目標體積，然后移取染料溶液，加入一定體積的蒸餾水中，測定溶液的稀釋度（334nm或340nm），重復幾次移液操作，計算移液器的度。2）量程大于l／ul，可以用稱重法檢測。通過對水的稱重，轉(zhuǎn)換成體積（體積＝質(zhì)量／密度），鑒別移液器的準確性。由于水的密度是隨著溫度變化而變化，且稱量天平本身度不符合檢測要求，檢測又大多在一個開放式空間內(nèi)

微量移液器的拆卸和安裝的具體步驟2010/12/18

（1）拆卸的具體步驟1）往下按緊脫卸按鈕，用力拉出脫卸套筒?？墒褂秒S移液器提供的小工具對下半支進行拆卸。2）向左旋轉(zhuǎn)下半支移液器，使其脫離把手。3）按活塞固定器并移走（活塞有可能受彈簧彈力作用彈出）。4）卸下活塞和彈簧。（2）安裝的具體步驟1）把活塞和彈簧裝入移液器下半部。2）把活塞固定器放在活塞上面，并把它按進下半部分的溝槽。3）把下半部旋緊到上半部手柄（不要使用小工具）。4）按下脫卸按鈕，裝上脫卸筒套。

抗精子抗體（antispermatozoa antibody，ASA）檢測2010/12/18

男性體內(nèi)的血睪屏障可使精子與免疫系統(tǒng)隔離。但當此種屏障因疾病或創(chuàng)傷而受損時，精子或其可溶性抗原逸出，可導致機體產(chǎn)生自身抗精子抗體（antispermatozoaantibody，ASA），從而抑制精子產(chǎn)生，造成男性不育。女性生殖道具有酶系統(tǒng)，能降解進入的精子抗原，使其不能達免疫系統(tǒng)。此種酶系統(tǒng)的缺陷可使精子抗原保持完整而刺激同種抗精于抗體產(chǎn)生。大約10％～30％原因不明的女性不孕癥可能由于ASA所致。測定ASA的方法很多，目前常用的有熒光抗體法，淺盤微量凝集法，伊紅Y染色法，試管或玻片凝集法，固

微量加樣器（移液器）使用的一般原則2010/12/18

在免疫測定及其他生物醫(yī)學研究中，加樣器的使用離不開一次性的塑料吸頭，盡管一次性塑料吸頭的使用增加了實驗費用，但降低了實驗技術(shù)人員接觸傳染性病原體及有害實驗材料如放射性核素的可能性，并且避免了吸頭多次重復使用所必需的清潔過程和腐蝕性去垢劑的使用。此外，在有些應用上，如PCR測定中，吸頭必須是一次性的，以避免潛在污染發(fā)生的可能性。加樣器根據(jù)使用的要求，也在不斷發(fā)展。如可整體高壓滅菌加樣器的出現(xiàn)。使用UV線穩(wěn)定的塑料制作加樣器對于加樣器在許多方面的應用非常重要，使得在實際工作中，在超凈臺或抽風柜的紫外

抗核抗體（anti-nucleic antibody，ANA）2010/12/18

抗核抗體（anti-nucleicantibody，ANA）是以真核細胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱。細胞核內(nèi)含有許多不同成分如核蛋白、核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP）、脫氧核糖核酸（DNA）等。在某些因素，如細菌、病毒、藥物等作用下，可改變細胞核某些成分的性質(zhì)，激發(fā)機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生許多抗不同核成分的抗體。這些抗核抗體目前尚無統(tǒng)一命名，有些是以*個檢出該抗體的患者名字縮寫命名，如Sm、Ro等抗體；有些是以相關(guān)疾病命名，如SS-A、SS-B、類風濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)核抗原（R

phenol/chloroform 進行DNA 萃取2010/12/18

儀器用具：微量離心機藥品試劑：PlasmidDNA酵解產(chǎn)物：#1（pBlueGus/HindIII）,#2（pBlueGus/BamHI）；Phenol/chloroform/isoamylalcohol（25:24:1）以下簡稱為PCI；Chloroform/isoamylalcohol（24:1）以下簡稱為CI；3MNaOAc（醋酸鈉pH5.2）；純酒精及70%酒精方法步驟：◆注意！進行這一部份實驗的前，請先確定pBlueGus/HindIII與pBlueGus/BamHI兩者的酵解反應都已

以DIG 標定核酸2010/12/18

DNA探針一般可以用32P,35S或非放射性物質(zhì)如biotin及digoxigenin（DIG）加以標定；標定時利用DNA聚合酶的活性，在DNA聚合反應中，另加入[α-32P]dATP,[α-32P]dCTP或DIG-11-dUTP等標定物質(zhì)，所合成出來的即是被標定的核酸片段。目前常見的方法包括nicktranslation,randompriming與polymerasechainreaction（PCR）等。若須對DNA進行endlabeling時，可以進行kinase或filling-in

Random priming2010/12/18

DNA聚合酶要進行DNA聚合反應時一定要有引子（primer），因為它只能以引子所提供的3’-OH為起始點進行延伸（extension）的工作，而不能就地重新合成新的DNA（denovosynthesis）。一般實驗常以人工合成的寡核苷酸為引子進行DNA聚合反應，這時固然可以根據(jù)已知序列設計核酸引子，但也可以采用逢機引子（randomprimers）。所謂逢機引子即其序列為逢機序列，不經(jīng)特別設計，目前應用zui廣者是以自動化機器所合成的、六到八個核苷酸長的寡核苷酸混合物；反應進行中若有任何一條逢

甲醛洋菜膠體電泳2010/12/18

甲醛洋菜膠體電泳（formaldehyde-agarosegelelectrophoresis）甲醛是一種常用的RNA變性劑。在進行甲醛洋菜膠體電泳分析時，必須先配制含有甲醛的洋菜膠體，RNA也必須先以甲醛及formamide進行變性處理，以確保其二度結(jié)構(gòu)充分被打開。由于甲醛可能是一種致癌物質(zhì)，配制膠體及進行電泳分析時都應在抽氣櫥里小心操作；進行電泳時所使用的緩沖液為MOPS（3-[N-morpholino]propanesulfonicacid）。此外，含有甲醛的洋菜膠體比較滑溜，容易破裂，在

RT-PCR2010/12/09

cDNA產(chǎn)量的很低A:RNA模板質(zhì)量低B:對mRNA濃度估計過高C:反應體系中存在反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或反轉(zhuǎn)錄酶量不足D:反應體積過大2.擴增產(chǎn)物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺A:zui常見的原因在于反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系B:與反應起始時RNA的總量及純度有關(guān)C:建議在試驗中加入對照RNAD:*鏈的反應產(chǎn)物在進行PCR擴增時，在總的反應體系中的含量不要超過1/10E:建議用Oligo（dT）或隨機引物代替基因特異性引物（GSP）用于*鏈合成。由于RNA模板存在二級結(jié)構(gòu)，

般注意事項：2010/12/09

當PCR結(jié)果不甚滿意時，首先檢查以下幾方面并遵照執(zhí)行：將PCR反應的試管與反應板緊貼。當酶反應混合物以70℃“熱啟動”開始循環(huán)時，切記在加入酶后稍微振蕩一下，因為在0.2-ml的PCR管中不能均勻傳熱。不要隨意減少dNTP的用量，它是一個系統(tǒng)的因素，必須與其它成份保持平衡。對于有問題的PCR反應，例如模板的量少，模板不純和環(huán)狀模板等，先嘗試加Taq酶前的體系進行預變性，后加模板進行正常PCR擴增。沒有擴增產(chǎn)物：在提供MgCl2緩沖液中，以0.25mmol/L為梯度增加MgCl2濃度；無MgCl2

Trizol疑難解答2010/12/09

般注意事項：Trizol試劑含有苯酚，具有毒性和刺激性，注意操作。如皮膚接觸Trizol，請立即用大量去垢劑和水沖洗，如仍有不適，請聽取醫(yī)生意見。RNase污染的主要來源是操作過程中手和空氣中的浮沉，注意隨時勤換手套，樣品盡可能蓋嚴；盡量不要對著RNA樣品呼氣或說話。用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后滅菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%（體積比）diethyl-pyrocarbonate（DEPC）至重或MiliQ級水中，處理過夜，滅菌即成DEPC水。細胞裂解必需充分且操作迅速。

RNA操作指南2010/12/09

RNA抽提純化是分子生物學研究的基本工作內(nèi)容。但是由于RNA酶（RNase）的廣泛存在和難以滅活的特性，使RNA的抽提純化和后續(xù)工作十分困難。即使Trizol試劑和各類RNA抽提純化試劑盒的廣泛應用使RNA抽提和純化變得方便快捷，但是涉及RNA的工作仍然是分子生物學研究中zui讓人棘手的。為了保證您的工作成功，請仔細閱讀本操作指南，相信它能幫助您解決常見的問題。總而言之，RNA工作順利與否的關(guān)鍵是防止RNA酶的污染。RNase無處不在，在實驗操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不妥當?shù)牟僮鞫加锌赡茉?

基因組DNA抽提2010/12/09

.基因組DNA降解（1）樣品不新鮮：雖然DNA在分子結(jié)構(gòu)上較RNA穩(wěn)定，但樣品在分離后細胞內(nèi)的DNA酶同樣會作用于DNA分子。（2）樣品本身富含DNA酶；2.得率低或無基因組DNA（1）DNA未充分釋放：在分離到的相間沉淀中加BufferG-A后未充分振蕩釋放DNA。（2）BufferW2中未加入無水乙醇：未加乙醇的BufferW2是一種低鹽溶液，可溶解DNA。若直接用于洗滌DNA-prepTube將會溶解并去除結(jié)合在silica膜上的DNA。（3）DNA未充分洗脫：用于洗脫DNA的Eluent

質(zhì)粒抽提常見問題解答2010/12/09

產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱CAS#DNA測序*2010.11重組胰蛋白酶2010.11重組胰蛋白酶消化液2010.11引物合成訂購表測序訂單表格下載基因合成訂購表基因突變服務委托信息表DNA克隆服務委托信息表細菌16SrDNA菌種鑒定服務表基因特異性位點甲基化（methylation）檢測訂單引物設計工具常見密碼子表測序引物設計引物計算工具3'RACEPCR實時定量PCR的原理、探測化學物質(zhì)及探針優(yōu)化蛋白分子建模工具新聞快遞:在2010年11月1日-2011年1月31日開票并收到款的預付款全部給予10%的

PCR產(chǎn)物回收試劑盒可能出現(xiàn)問題及解決方法2010/12/09

1.無DNADNAWashBuffer沒有用無水乙醇稀釋；2.低DNA產(chǎn)量樣品中加入的BindingBuffer的量太少；請按照使用說明加入足夠量的BindingBuffer；若DNA片段長度小于200bp，可加入6倍體積的BindingBuffer；若DNA片段長度大于4kb，則加入3倍體積BindingBuffer后加入1倍體積的雙蒸水。3.OD值與瓊脂糖凝膠中的DNA產(chǎn)量不相符從柱子上洗脫下來的痕量雜質(zhì)增加了A260的值；請按照標準步驟操作；另一方面,還取決于瓊脂糖/EB電泳的質(zhì)量.4.點

膠回收常見問題及對策2010/12/09

1.沒有回收到DNA片段如在洗脫后，發(fā)現(xiàn)洗脫液中沒有DNA片段，請檢查是否按瓶身標簽，在洗滌液中加入了無水乙醇。2.提取率低1）融膠液為酸性緩沖液，如融膠后，其pH值升高將影響提取得率。請加入0.1倍體積的3M乙酸鉀（pH5.0）。2）長時間使用后沒有更換的電泳緩沖液，其pH值較高，將影響DNA的吸附。請更換新的電泳緩沖液后，再進行電泳，然后切膠。3）回收片斷大小影響回收效率（見下圖）；4）在洗脫前，將洗脫液于30～60℃溫浴，可提高提取效率適當延長洗脫時間可增加回收效率。5）正確估計膠大小，確

化學發(fā)光免疫測定（CLIA）技術(shù)2010/12/07

化學發(fā)光免疫測定（ChemiluminesentImmunoassay,CLIA）是免疫測定技術(shù)繼酶免技術(shù)（EIA）、放免技術(shù)（RIA）、熒光免疫技術(shù)（FIA）和時間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）之后發(fā)展的一項新興測定技術(shù)。要談化學發(fā)光免疫測定技術(shù)就必須先談化學發(fā)光。化學發(fā)光技術(shù)是近二、三十年來發(fā)展起來的一種測定方式，其利用化學反應釋放的自由能激發(fā)中間體（常用堿性磷酸酶－金剛烷胺），使其從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)，當中間體從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時會釋放等能級的光子，對光子進行測定而進行定量分析。化學發(fā)光具有熒光

降鈣素原（PCT）檢測及臨床意義2010/12/07

一、概述PCT是無激素活性的降鈣素前肽物質(zhì)，由116個氨基酸組成，分子量為13KD的糖蛋白。PCT的半衰期為25~30小時，在體外穩(wěn)定性很好。健康人血漿PCT含量極低（＜0.1ng·ml-1＝，0.5ng·ml-1被認為是檢測感染性疾病診斷的分界值。PCT選擇性地對系統(tǒng)性細菌感染、真菌感染及寄生蟲感染有反應，而對無菌性炎癥和病毒感染無反應或僅有輕度反應。許多學者研究發(fā)現(xiàn)，全身性細菌、真菌和寄生蟲感染時，PCT水平異常增高，增高的程度與感染的嚴重程度及預后相關(guān)，在全身性細菌感染和膿毒癥輔助鑒別診斷

測定血清中免疫球蛋白的臨床意義2010/12/07

免疫球蛋白（Ig）是抗體的表現(xiàn)形式和物質(zhì)基礎(chǔ),是具有抗體活性和結(jié)構(gòu)相似的血清球蛋白。免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)是4條肽鏈,2輕2重,肽鏈之間由二硫鍵相聯(lián)結(jié)。任何一種免疫球蛋白,只有一類別的重鏈、輕鏈相同。根據(jù)重鏈的不同,免疫球蛋白分為IgG、IgA、IgM、IgD和IgE5種。免疫球蛋白由漿細胞、前漿細胞或淋巴細胞產(chǎn)生,在血漿和血管外體液中的分布大致相等。循環(huán)中的免疫球蛋白,每日約更換1/4。健康成人每日合成免疫球蛋白2～5g,但在發(fā)生感染時,合成可增加7倍。正常成人血清中各種免疫球蛋的含量和某些特性