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上海源葉生物科技有限公司
初級會員 | 第16年
甲胎蛋白時間分辨熒光免疫分析2010/12/07
近年發(fā)展的時間分辨熒光測量技術(shù)以稀土離子為示蹤材料，具有測量靈敏度高、操作簡便、示蹤物穩(wěn)定、定量分析量程寬、無放射性污染和應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點。我們采用時間分辨熒光測量技術(shù)，建立了AFP時間分辨熒光免疫分析（time-resolvedfluoroimmunoassay，TRFIA）。一、材料與方法1.材料與試劑：抗AFP單克隆抗體A137和A47由無錫市第二制藥廠提供。Eu3+標(biāo)記盒、Eu3+發(fā)光增強液、AFPTRFIA藥盒和AFP參考標(biāo)準(zhǔn)，EG－G-Wallac產(chǎn)品。CA199、CA125和CA1
前列腺特異抗原的幾個臨床應(yīng)用問題2010/12/07
前列腺癌（prostatecancer，PCa）在歐美男性癌癥中列第二位，腫瘤致死的原因中列第三位。我國男性中PCa發(fā)病率也逐年升高，20世紀(jì)60年代，上海地區(qū)PCa發(fā)病率為0．48／10萬，至1995年即達(dá)3．7／10萬。長春市8家大型醫(yī)院統(tǒng)計，1999～2001年P(guān)Ca病例數(shù)較1986～1988年增加了4．6倍。作為PCa的血清標(biāo)志物，早年曾以Schulman等于1964年自前列腺組織中分離的具有前列腺特異性的酸性磷酸酶（prostaticacidphosphatase，PAP）為代表，但臨
2010年 第09期2010/12/07
目錄研究報告含氟吲哚吡喃類手性潛體化合物合成研究12-苯甲?；摎渌上惝惲蚯杷狨サ暮铣膳c光譜性質(zhì)[Nd（6-OHnicH）3（H2O）6]n配合物的合成和晶體結(jié)構(gòu)研究對硝基氯苯與牛血清白蛋白的相互作用研究新型溫控離子液體綠色介質(zhì)生物催化合成乙酸辛酯香料微波輻射輔助合成4-甲基香豆素衍生物Mg，Al，F(xiàn)e粉催化苯甲醛的水相烯丙基化反應(yīng)研究2′-脫氧腺苷5′-N-[（2S）-2-（3-苯甲酰苯基）-1-氧代丙基]甘氨酸酯的合成碳酸二甲酯作甲基化試劑催化合成2-甲硫基苯并噻唑綜述與進(jìn)展離子液體雙水相萃
2010年 第10期2010/12/07
目錄研究報告N,O-羧甲基殼聚糖與鐠配合物的制備1-（4-氯苯基）-2-環(huán)丙基-1-乙酮的合成基于降冰片烯結(jié)構(gòu)的環(huán)狀雙酰胺的無溶劑微波合成綠色路線制備金納米Y型偶氮旋光聚合物的合成及熱光性能氨基脲分子印跡聚合物的合成及其吸附性能的研究黃曲霉毒素G族人工抗原的合成與免疫效果研究水楊醛縮對甲苯胺鈷（Ⅲ）配合物的合成、晶體結(jié)構(gòu)和熒光性質(zhì)2-二茂鐵基青霉烯的合成與表征綜述與進(jìn)展合成脂質(zhì)的研究進(jìn)展豆腐果苷衍生物的合成及藥理活性研究進(jìn)展分析與測試電化學(xué)法研究蛋白質(zhì)與鉻黑T的相互作用聚L-絲氨酸/碳納米管復(fù)合
2010年 第11期2010/12/07
目錄研究報告四-（2,3-二氟苯乙基）-1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷的合成氨基葡萄糖Schiff堿的制備及抑制真菌性能研究4-羥甲基-2（5H）-呋喃酮的合成及對銅綠假單胞菌生物膜的影響（E）-1,8-二甲氧基-3-（-3-氧代丁烯-1-基）-蒽-9,10-二酮合成苯甲醛縮2-氨基嘧啶席夫堿銅配合物的合成及其與DNA相互作用N-取代的3-氨甲基吡咯烷的合成三種星形咔唑衍生物的合成及光電性能N-吡啶香豆素類亞胺化合物的合成與表征綜述與進(jìn)展左旋甲狀腺素的合成研究進(jìn)展分析與測試氯冉酸荷移分光光度法
2010年 第12期2010/12/07
目錄研究報告兩種2-羥基-1-萘醛與雜環(huán)化合物的席夫堿的熱色性研究2-[4-（9H-9-咔唑）-苯基]蒽醌的合成與表征一種新型縮氨基硫脲及其金屬配合物的合成、表征與生物活性研究二二茂鐵基-1,3-丁二烯的合成、表征及其電化學(xué)性質(zhì)研究Co2+-NaX催化苯乙烯氧氣氧化機(jī)理的研究4，4′-二（直鏈?zhǔn)榛┒矫训暮铣梢环N新的寡聚酰胺體系的合成及表征1,3-雙[3-（2-噻吩基）-3-氧代丙?；鵠苯的合成與熱穩(wěn)定性研究新型雙酚A衍生物——1,1-二（4-羥苯基）-1-苯基乙烷的合成綜述與進(jìn)展大環(huán)三胺
結(jié)核分枝桿菌分子菌種鑒2010/12/03
①PCR菌種鑒定法。用各種分枝桿菌特異性引物對標(biāo)本DNA進(jìn)行一系列PCR擴(kuò)增或多重PCR擴(kuò)增，根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物所產(chǎn)生的特異性片段進(jìn)行鑒定；或先用分枝桿菌屬特異的外部引物擴(kuò)增，然后再用菌種特異的內(nèi)部引物進(jìn)行巢氏擴(kuò)增鑒定。該法靈敏、快速，但目前能夠鑒定的菌種尚不多，主要有MT、牛分枝桿菌、MT復(fù)合群、鳥分枝桿菌、副結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌。②PCR-直接測序鑒定法。用分枝桿菌屬特異的引物對標(biāo)本的16SrRNA或65ku抗原基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后直接測定擴(kuò)增產(chǎn)物的核苷酸序列，比較其核苷酸的差異來鑒定菌
布氏桿菌病病原2010/12/03
布氏桿菌屬（Brucella）是一類革蘭陰性的短小桿菌，牛、羊、豬等動物zui易感染，引起母畜傳染性流產(chǎn)。人類接觸帶菌動物或食用病畜及其乳制品，均可被感染，發(fā)生波浪熱。布氏桿菌病廣泛分布世界各地。我國部分地區(qū)曾有流行，現(xiàn)已基本控制。該菌屬早在1886年由Bruce從地中海一名弛張熱病人尸體脾臟標(biāo)本中用顯微鏡觀察到，1887年獲得純培養(yǎng)，為了紀(jì)念他，定名為Brucella屬。當(dāng)時雖從病人分出此菌，但傳染源仍未解決，該地英軍發(fā)病率很高。1904-1907年，英軍醫(yī)Zammit奉命到島上調(diào)查病因，偶然
豬丹毒病原學(xué)流行病學(xué)和臨床特征2010/12/03
豬丹毒（quarantineofswineeryspelas）是由豬丹毒桿菌引起的一種急性、熱性傳染病。急性者常伴隨敗血癥；亞急性者以皮膚發(fā)生特異性疹塊為特點，俗稱“打火印”；慢性者以關(guān)節(jié)炎和疣狀心內(nèi)膜炎為特點。該病是豬的常發(fā)病之一，對養(yǎng)豬業(yè)危害很大。一、病原學(xué)豬丹毒桿菌是細(xì)長的革蘭陽性小桿菌，在動物組織中呈短斷頭發(fā)狀。該菌無芽孢和莢膜，無鞭毛不能運動。在血清瓊脂上長成針尖狀如露珠的透明細(xì)小菌落；在血液瓊脂上生長帶有狹窄的綠色溶血環(huán)的微小菌落；明膠穿刺線長成試管刷狀。該菌能發(fā)酵葡萄糖、果糖、半乳
豬丹毒血清學(xué)診斷技術(shù)2010/12/03
使用血清培養(yǎng)凝集試驗方法檢出率很高，而且快速，介紹如下。（1）血清培養(yǎng)凝集試驗在3％胰蛋白胨肉膏湯（或肝化湯）中，加人（1；40）一（1：80）的丹毒高免血清，同時每毫升再加入400leg卡那霉素50／lg慶大霉素及2Stag萬古霉素（缺乏抗生素時，可加0．05％疊氦鈉及o．0005％結(jié)晶紫），制成丹毒血清抗生素診斷液（如分裝安瓿瓶管置4~C冰箱內(nèi)可至少保存2個月）。生前取病豬耳尖血1滴，死后則蘸取病料少許于安瓿瓶管內(nèi)，37~C培養(yǎng)14-24h。凡管底出現(xiàn)凝集顆粒或團(tuán)塊時即判為陽性。（2）熒光抗
布氏桿菌病病原學(xué)2010/12/03
布氏桿菌屬（Brucella）是一類革蘭陰性的短小桿菌，牛、羊、豬等動物zui易感染，引起母畜傳染性流產(chǎn)。人類接觸帶菌動物或食用病畜及其乳制品，均可被感染，發(fā)生波浪熱。布氏桿菌病廣泛分布世界各地。我國部分地區(qū)曾有流行，現(xiàn)已基本控制。該菌屬早在1886年由Bruce從地中海一名弛張熱病人尸體脾臟標(biāo)本中用顯微鏡觀察到，1887年獲得純培養(yǎng)，為了紀(jì)念他，定名為Brucella屬。當(dāng)時雖從病人分出此菌，但傳染源仍未解決，該地英軍發(fā)病率很高。1904-1907年，英軍醫(yī)Zammit奉命到島上調(diào)查病因，偶然
電感受態(tài)大腸桿菌TGl的制備2010/11/29
器材和試劑]●大腸桿菌TGl菌株（Stratagen）●37℃孵育箱（NewBrunswickScientmc）●SorvatlRC5離心機(jī)（或同類型），GS3轉(zhuǎn)頭（均在4℃預(yù)冷）●預(yù)冷的500m1聚丙烯離心管●2L有擋板錐形瓶●基本培養(yǎng)瓊脂板[105gK2HP04、4．5gKH2P04、1g（NH4）2S04、0．5gNa3C6H5O72H2O、15g瓊脂加水至幾。高壓滅菌，冷卻至錐形瓶微溫；接著加入lmllmol/LMgS04、0．5ml1%維生素B：（硫胺）和10m120%右旋糖。●2×Y
電轉(zhuǎn)化連接物及構(gòu)建抗體文庫2010/11/29
[器材和試劑]●電感受態(tài)大腸桿菌TG1（●37℃孵育箱（NewBrunswick）●電轉(zhuǎn)化儀及0．2cm間距小杯（GenePulserTMBiorad）●16℃水浴●SOC培養(yǎng)基（將20g細(xì)菌培養(yǎng)用胰蛋白胨、5g酵母提取物及0．5gNaCl溶于950ml水中。加入10m1250mmol/LKCl，5mol/LNaOH調(diào)整pH至7．0并加入去離子水至IL。高壓滅菌。手感變涼后，再加入5ml2mol/LMgCl2和20mllmol/L葡萄糖）●100mm和150mm含100ug/m1氨芐青霉素和2%
制備用于抗原上選擇的噬菌體抗體2010/11/29
轉(zhuǎn)化后，就得到了菌苔形式的抗體文庫?？梢灾苽涑筛视蛢Υ嫖锉４嬗谝?0℃。這是一個原始文庫，象征著具有*價值的資源。的抗體文庫也是由這種原始文庫制備而來的。然而，當(dāng)用大培養(yǎng)板鋪板擴(kuò)增原始文庫時，會造成部分多樣性的丟失。因此在任何噬菌體制備或細(xì)菌擴(kuò)增步驟中，接種量必須總是大于5倍的文庫容量，從而保持文庫的多樣性。在大多數(shù)噬菌體展示載體中，抗體片段的表達(dá)是由lacZ啟動子啟動的。盡管這個啟動子存在某些漏洞并可以優(yōu)化，但以以下一些指導(dǎo)進(jìn)行操作，其效果依然良好。在噬菌體救援前，含有抗體文庫的細(xì)菌在葡萄糖存
自文庫甘油儲存料中制備噬菌體抗體2010/11/29
[器材和試劑]●500ml無菌聚丙烯離心瓶●2L培養(yǎng)錐形瓶●RC5離心機(jī)和GS3轉(zhuǎn)頭（Sorvall）●2×TY/amp/glu培養(yǎng)基●TYE/amp/glu平板●含有25ug/ml卡那霉素和2％葡萄糖的TYE平板（TYE/kan/glu）●含100ug/ml氨芐青霉素和25ug/m1卡那霉素的2×TY培養(yǎng)基（2×TY/amp/kan）●輔助噬菌體（VCSMl3、R408或M13K07Stratagene、NEB或AmershamBiosciences）●20％聚乙二醇（PEG）6000，2．5
用氯化銫離心法純化噬菌體2010/11/29
[器材和試劑]●L8—MBeckman超速離心機(jī)或與其相當(dāng)?shù)臋C(jī)型●吊桶式SWTi4l轉(zhuǎn)頭或相當(dāng)類型●氯化銫（Sigma）●PBS●純化的噬菌體樣本[方法]1．在每毫升zui后的噬菌體懸液（例如來自實驗方案13．11）中，加入0．45g氯化銫，充分混勻至溶解。2．用吊桶式轉(zhuǎn)頭（或與其相當(dāng)?shù)男吞枺╇x心溶液，15℃17h，噬菌體將濃縮在組分1和組分2中（。組分1的濃度較高，但組分2的體積較大。用巴氏滴管或塑料注射器吸取這些組分。如果是*次使用本實驗方案，那么先收集所有條帶并分別對其檢測將是明智之舉。3
胞外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)2010/11/25
由于RNA聚合酶一般由數(shù)個次單元組合而成，早先要在試管內(nèi)應(yīng)用RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄活性合成RNA并非易事，但這個問題在SP6,T3及T7等噬菌體的RNA聚合酶陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)以后，情況已*改觀。這主要是因為這類RNA聚合酶由一條多勝肽（polypeptides）所構(gòu)成，其在進(jìn)行轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時所須辨認(rèn)的啟動子長度僅20bp左右，而且轉(zhuǎn)錄起始位置非常明確，轉(zhuǎn)錄效能良好，成了目前進(jìn)行胞外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時的*選擇。要進(jìn)行胞外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時，僅需將目標(biāo)基因次選殖（subclone）至帶有SP6,T3或T7啟動子的轉(zhuǎn)錄載體，或者運
以DIG 標(biāo)定核酸探針2010/11/25
DNA探針一般可以用32P,35S或非放射性物質(zhì)如biotin及digoxigenin（DIG）加以標(biāo)定；標(biāo)定時利用DNA聚合酶的活性，在DNA聚合反應(yīng)中，另加入[α-32P]dATP,[α-32P]dCTP或DIG-11-dUTP等標(biāo)定物質(zhì)，所合成出來的即是被標(biāo)定的核酸片段。目前常見的方法包括nicktranslation,randompriming與polymerasechainreaction（PCR）等。若須對DNA進(jìn)行endlabeling時，可以進(jìn)行kinase或filling-in
Southern 轉(zhuǎn)印分析2010/11/25
在膠體中的DNA可利用毛細(xì)現(xiàn)象的作用將DNA牽引轉(zhuǎn)印至覆蓋在膠片上的濾膜，經(jīng)烘烤或UV照射后，可使DNA固定在膜上，以進(jìn)行探針的雜合（hybridization）反應(yīng)。儀器用具：玻璃缸;玻璃板或吸水海綿;Crosslinker（Stratalinker1800,Stratagene）藥品試劑：10×SSC（1.5MNaCl;0.15Msodiumcitrate）或20×SSC變性溶液（1.5MNaCl;0.5NNaOH）中和溶液（1MTris-Cl;1.5MNaCl,pH7.5）Nylonmem
重組質(zhì)體的限制酶分析2010/11/25
儀器用具：微量離心機(jī)冰浴MupidII迷你電泳槽及鑄膠器UVtransilluminator及影像分析系統(tǒng)防護(hù)面罩藥品試劑：限制酶：BamHI,HindIII（20U/μL,BioLabs）10×NEBufferBamHI（0.1MTris-HCl,pH7.9;0.1MMgCl2;1.5MNaCl;10mMdithiothreitol）100×BSA（10mg/mLbovineserumalbumin）使用前稀釋十倍成10×無菌水方法步驟：1）正反應(yīng)株，接種于3mLLB/Amp培養(yǎng)基，于37℃震
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