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qPCR常見問題及解決方案（建議收藏，文末有彩蛋哦~）2021/02/07: qPCR常見問題及解決方案（建議收藏，文末有彩蛋哦~）在RT-qPCR的實驗過程中，大家或多或少都會遇到擴(kuò)增曲線異常、溶解曲線異常、重復(fù)性差等問題。小翊給大家整理了SYBRGreen染料法的常見問題及解決方案，以供大家參考。Part1擴(kuò)增曲線異常正常的擴(kuò)增曲線一般呈S型，Ct值///好在20-30之間。異常的擴(kuò)增曲線包括Ct值偏大、無平臺期、平臺期下降等問題。1.Ct值偏大（如Ct值＞30）1）模板量低或基因表達(dá)豐度低，建議增加模板量觀察Ct值能否成相應(yīng)倍數(shù)減少。2）qPCR整個反應(yīng)條件不適宜或

僅需9.9元，解決lipo2000/3000轉(zhuǎn)染效率低難題2021/01/17: Polyplus-transfection®公司的jetOPTIMUS®轉(zhuǎn)染試劑是專門針對難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染試劑，原代細(xì)胞、干細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等都超過80%的轉(zhuǎn)染效率。產(chǎn)品性能簡介1.適合難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系：在難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞上獲得大的基因表達(dá)，實現(xiàn)了原代細(xì)胞（上皮、內(nèi)皮、肝細(xì)胞、成纖維）、干細(xì)胞（ES、iPS、MSC）超高的轉(zhuǎn)染效率。圖1實驗：在24孔板中轉(zhuǎn)染GFP質(zhì)粒到多種細(xì)胞系中，24h后熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果：jetOPTIMUS®在普通細(xì)胞和難轉(zhuǎn)染細(xì)胞上均可獲得更高的基因表達(dá)2.轉(zhuǎn)染效

還在為轉(zhuǎn)染效率低苦惱嗎?快來試用jetOPTIMUS®轉(zhuǎn)染試劑2021/01/17: 還在為lipo2000/3000轉(zhuǎn)染效率低苦惱嗎？快來試用jetOPTIMUS®轉(zhuǎn)染試劑吧！Polyplus-transfection®公司的jetOPTIMUS®轉(zhuǎn)染試劑是專門針對難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染試劑，原代細(xì)胞、干細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等都超過80%的轉(zhuǎn)染效率。產(chǎn)品性能簡介1.適合難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系：在難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞上獲得大的基因表達(dá)，實現(xiàn)了原代細(xì)胞（上皮、內(nèi)皮、肝細(xì)胞、成纖維）、干細(xì)胞（ES、iPS、MSC）超高的轉(zhuǎn)染效率。圖1實驗：在24孔板中轉(zhuǎn)染GFP質(zhì)粒到多種細(xì)胞系中，24h后熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)

聚焦細(xì)胞免疫療法，您上車（CAＲ）了嗎2020/12/12: 前言：免疫療法是目前腫瘤治療領(lǐng)域///具前景的發(fā)展方向之一，越來越多的研究靶點進(jìn)入CAR-T療法的臨床實驗。但這類細(xì)胞療法在部分患者中療效短暫、無法應(yīng)對實體瘤等問題依然困擾著科學(xué)家們。要實現(xiàn)CAR-T細(xì)胞更廣泛的治療應(yīng)用，就必須在多個層面進(jìn)行設(shè)計和控制，進(jìn)而提高療效和安全性。一、什么是CAR-T療法？CAR-T(ChimericantigenreceptorTcell)療法：是指通過基因改造技術(shù)，使患者T淋巴細(xì)胞表達(dá)嵌合抗原受體，進(jìn)而能特異性識別、結(jié)合腫瘤相關(guān)抗原靶點，并同時激活T淋巴細(xì)胞使其大

保姆式RNA提取試劑盒，打造11min提取神話2020/12/12: 保姆式RNA提取試劑盒，打造11min提取神話幾個月前，我們跑了一圈市場，發(fā)現(xiàn)許多朋友對“TRIzol類試劑”提取RNA的方式吐槽的非常激烈，支持和反對的聲音都有：這些言語，每一條都讓我感同身受，沒想到因為一個RNA提取實驗，引發(fā)了很多的思考和討論。說到底，定量實驗是分子實驗的基石，RNA提取又是定量實驗的開端。這種實驗總是會有說不完的辛酸歷史，講不盡的無奈故事。但是，我們想借翊圣生物MolPure®CellRNAKit（培養(yǎng)細(xì)胞RNA提取試劑盒），一個集使用簡便、安全無毒與11min超快體驗感

一夫當(dāng)關(guān)，莫如雙管齊下2020/10/17: 一夫當(dāng)關(guān)，莫如雙管齊下——聚焦熱啟動TaqDNA聚合酶雙封閉抗體當(dāng)下基于PCR技術(shù)的核酸檢測仍有其應(yīng)用難點難點→檢測試劑的穩(wěn)定性核酸檢測行業(yè)人都格外關(guān)注檢測試劑的穩(wěn)定性，不管是長期儲存穩(wěn)定性還是短期偏離正常保存條件的穩(wěn)定性，都直接影響檢測結(jié)果的有效性。而短期偏離正常保存條件的穩(wěn)定性在實際使用和運(yùn)輸過程中尤為重要，比如遇到樣本量大、適配自動化、排隊等待上機(jī)等情況，反應(yīng)體系需要在室溫或4℃放置，再比如遇到運(yùn)輸時間長，溫度難以控制，檢測體系就暴露在風(fēng)險之下。如何保證穩(wěn)定性，如何確保檢測結(jié)果有效、可信，

干貨分享|qPCR復(fù)孔平臺期熒光信號不同會影響實驗結(jié)果嗎？2020/10/17: 干貨分享|qPCR復(fù)孔平臺期熒光信號不同會影響實驗結(jié)果嗎？王老師：您好，近用你們的試劑跑qPCR，復(fù)孔平臺期的熒光信號不同，這樣的結(jié)果能用嗎？小翊：您好，老師。從圖中來看，復(fù)孔重復(fù)性是比較好的，△Ct值沒什么問題的。王老師：那為什么復(fù)孔的平臺期信號還有相差呢？有什么方法可以使復(fù)孔熒光信號一致嗎？近有不少客戶咨詢小翊類似的問題，擔(dān)心這樣的數(shù)據(jù)不可靠今天小翊就幫您解除疑慮！復(fù)孔平臺期不同不會影響實驗結(jié)果（△Ct0.5）*，理想的PCR擴(kuò)增是使DNA分子由1變2，2變4，以2n進(jìn)行擴(kuò)增的。但實際上，隨

高品質(zhì)、高成功率動物腸炎建模用Yeasen葡聚糖硫酸鈉鹽2020/10/10: 高品質(zhì)、高成功率動物腸炎建模用Yeasen葡聚糖硫酸鈉鹽穩(wěn)定、高效，物有所值！葡聚糖硫酸鈉鹽（dextransulfatesodiumsalt,DSS）是葡聚糖的聚陰離子衍生物，由葡聚糖和氯//磺//酸的酯化反應(yīng)形成，白色粉末，在水或鹽溶液中溶解得到澄清溶液翊圣生物利用*的生產(chǎn)工藝開發(fā)的DSS包含了分子量1,500~500,000Da范圍內(nèi)的多個產(chǎn)品，硫含量17-19%。其中分子量為36000-50000Da的DSS產(chǎn)品，可根據(jù)實驗?zāi)康恼{(diào)整DSS濃度和給藥時間，建立急性、慢性和急慢性交替性模型。

Carrier RNA常見類型、作用原理及優(yōu)缺點介紹2020/09/29: CarrierRNA常見類型、作用原理及優(yōu)缺點介紹1.CarrierRNA概念及作用熒光定量PCR是分子診斷主流技術(shù)，包括核酸提取和PCR擴(kuò)增兩個環(huán)節(jié)，兩者共同決定了該檢測方法的評測參數(shù)。以直觀關(guān)鍵的檢測靈敏度指標(biāo)來看，只有實現(xiàn)了提取環(huán)節(jié)///優(yōu)化和PCR擴(kuò)增環(huán)節(jié)///優(yōu)化的情況下，檢測靈敏度的結(jié)果才更可信。檢測靈敏度顯示了檢測試劑的檢測下限，對于熒光定量PCR而言，即一定樣本濃度下的病毒核酸檢出率。CarrierRNA，中文名載體RNA，又叫核酸助沉劑。在核酸提取環(huán)節(jié)，提取使用到的離心管壁多是

無需gDNA提取的基因分型產(chǎn)品，您值得擁有2020/09/28: 無需gDNA提取的基因分型產(chǎn)品，您值得擁有！基因分型是通過使用生物學(xué)試驗檢查個體的DNA序列的過程，也是將目標(biāo)序列與另一個體的序列或參考序列進(jìn)行比較來確定個體的基因型差異的過程。PCR是一種常見的基因分型方法，用于檢測轉(zhuǎn)基因研究確定目標(biāo)基因是否存在?；赑CR方法的基因分型一般需要處理樣本，抽提純化基因組DNA。當(dāng)待測樣本較多時，抽提純化基因組gDNA的過程費(fèi)時、操作重復(fù)，通量低并且實驗成本高。為了解決樣本抽提純化這一難題，翊圣生物通過改造TaqDNA聚合酶，優(yōu)化PCR反應(yīng)體系開發(fā)出無需基因組純

轉(zhuǎn)染效率低？小翊手把手教你做轉(zhuǎn)染實驗2020/09/28: 轉(zhuǎn)染效率低？小翊手把手教你做轉(zhuǎn)染實驗細(xì)胞膜是由磷脂雙分子層和鑲嵌蛋白組成的，帶有負(fù)電荷。因此帶有負(fù)電荷的DNA或RNA無法通過細(xì)胞膜。為了讓核酸（DNA或RNA）通過細(xì)胞膜，研究人員利用不同的方法，包括使用化學(xué)物質(zhì)和包被核酸的載體分子進(jìn)行中和，以及在細(xì)胞膜上開孔等物理方法，將核酸（DNA或RNA）直接運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)。這些就是轉(zhuǎn)染的過程，轉(zhuǎn)染的目的是促進(jìn)蛋白合成，調(diào)節(jié)基因表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞生長與發(fā)育等，目前越來越多地被用到功能研究中。圖1DNA/RNA轉(zhuǎn)染過程（圖片來源：圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）1.常見轉(zhuǎn)染方法

外泌體研究歷程，你知多少？2020/09/28: 外泌體研究歷程，你知多少？外泌體（Exosome）參與細(xì)胞之間的交流，物質(zhì)的運(yùn)輸以及正常生理過程的維持、還與疾病息息相關(guān)，越來越多的人做這方面的研究。關(guān)于外泌體提取、組成、“載體”和相應(yīng)功能的精///準(zhǔn)分子機(jī)制近些年越來越受到關(guān)注，而且發(fā)表的有關(guān)外泌體的文章也在逐年增加。外泌體（Exosome）的研究歷程主要包括外泌體提取與純化、外泌體鑒定與檢測、外泌體熒光標(biāo)記、和外泌體的蛋白組學(xué)以及下游機(jī)制研究等。下面我們就簡單介紹一下外泌體的研究歷程。1.什么是外泌體？外泌體（Exosome）是一種由活細(xì)胞

有了它們，細(xì)胞凋亡檢測再也不愁2020/09/25: 有了它們，細(xì)胞凋亡檢測再也不愁細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，是指在一定的生理或者病理條件下，細(xì)胞主動的、高度有序的、自己結(jié)束其生命的過程。它在生物體的進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。凋亡過程中伴隨著細(xì)胞膜、蛋白、DNA等各種變化，可通過各種手段檢測，具體介紹如下圖所示：圖1細(xì)胞凋亡歷程目前市場上出現(xiàn)多種細(xì)胞凋亡周期檢測試劑盒，國外品牌仍占據(jù)著該領(lǐng)域的半壁江山，但價格昂貴、規(guī)格小、物流慢，一定程度上限制科研進(jìn)程。為了打破這種局面，在國家大力扶持自主品牌的政策下，多家企業(yè)

Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit2020/09/23: 產(chǎn)品信息產(chǎn)品名稱產(chǎn)品編號規(guī)格價格（元）Hifair®PrecisionsgRNASynthesisKit11355ES2525T346511355ES5050T645511355ES60100T9945產(chǎn)品描述CRISPR/Cas9是一種由RNA指導(dǎo)Cas核酸酶對靶向基因進(jìn)行特定DNA修飾的技術(shù)，源于細(xì)菌和古細(xì)菌為應(yīng)對噬菌體和外源質(zhì)粒的攻擊而演化來的一種獲得性免疫防御機(jī)制。在現(xiàn)代生物技術(shù)研究中，此系統(tǒng)是通過人工優(yōu)化的具有引導(dǎo)作用的sgRNA(SingleGuideRNA)引導(dǎo)核酸酶Cas9蛋白在

Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit2020/09/23: 產(chǎn)品信息產(chǎn)品名稱產(chǎn)品編號規(guī)格價格（元）Hifair®T7HighYieldRNASynthesisKit10623ES5050T178210623ES60100T3382產(chǎn)品描述Hifair®T7HighYieldRNASynthesisKit進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系的優(yōu)化，試劑盒使用T7RNA聚合酶并以含有T7啟動子序列的線型雙鏈DNA為模板，以NTPs為底物，對啟動子下游的DNA序列進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，高效合成單鏈RNA。轉(zhuǎn)錄時可在底物中加入修飾的核苷酸，制備生物素或染料標(biāo)記的RNA。本試劑盒可以合成長轉(zhuǎn)錄

直接PCR——PCR反應(yīng)中的快速之“王”2020/09/14: 直接PCR——PCR反應(yīng)中的快速之“王”PCR技術(shù)是一種包括生命科學(xué)在內(nèi)多個領(lǐng)域頻繁使用的一種技術(shù)。而PCR技術(shù)在發(fā)展過程中有了幾次大的技術(shù)革新，如熱穩(wěn)定Taq酶的發(fā)現(xiàn)、自動控溫PCR儀的推出、PCRmix的出現(xiàn)，每一次革新的出現(xiàn)都使得PCR技術(shù)更加簡便與易于操作。Part1：直接PCR所謂何意？直接PCR（DirectPCR）是一種不經(jīng)核酸提取而直接使用動物或植物組織等直接進(jìn)行擴(kuò)增的反應(yīng)。在許多方面，直接PCR的工作方式類似于常規(guī)PCR。主要區(qū)別是直接PCR中使用的定制緩沖液，樣本可不經(jīng)過核酸

靶標(biāo)伴“His”，蛋白純化明明白白！2020/09/04: 靶標(biāo)伴“His”，蛋白純化明明白白！蛋白純化簡介蛋白純化是將目標(biāo)蛋白從實驗樣本的總蛋白中分離出來，同時仍保留目的蛋白的生物學(xué)活性及化學(xué)完整性。在構(gòu)建載體階段，除了一些必要的表達(dá)元件，還需要考慮的密碼子優(yōu)化以及標(biāo)簽的選擇。選擇合適的標(biāo)簽不但有利于蛋白的純化，促進(jìn)蛋白的可溶性，同時也不能影響蛋白的結(jié)構(gòu)功能和下游應(yīng)用。以下簡單列舉幾個常見蛋白標(biāo)簽：表1不同蛋白純化標(biāo)簽介紹標(biāo)簽大小kDa序列純化效價標(biāo)簽切除HIS標(biāo)簽~0.84HHHHHH+TEV蛋白酶GST26+3C蛋白酶/PSPMBP42+Facto

識破支原體污染，拯救你的細(xì)胞2020/08/24: 識破支原體污染，拯救你的細(xì)胞支原體（mycoplasma）是一種沒有細(xì)胞壁的小原核細(xì)胞。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，支原體污染率達(dá)到60%以上，當(dāng)細(xì)胞（特別是傳代細(xì)胞）被支原體污染后，細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，污染嚴(yán)重時細(xì)胞生長緩慢，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，并出現(xiàn)細(xì)胞病變。因而細(xì)胞培養(yǎng)過程中，防止支原體污染是一個世界性的難題。圖1支原體污染細(xì)胞后，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變（來源：該圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）支原體污染細(xì)胞后很難察覺，同時若細(xì)胞培養(yǎng)過程受到了支原體污染，*清除支原體也是非常困難的。因此在細(xì)胞培養(yǎng)過程

FFPE樣本建庫，你需要的修復(fù)試劑在這里2020/08/18: FFPE樣本是什么？做病理的小伙伴對FFPE樣本肯定不陌生，F(xiàn)FPE（Formalin-FixedａndParrffinEmbedded）樣本是福爾馬林固定石蠟包埋的樣本，固定包埋的方法能夠使組織在常溫保存很長時間。早FFPE樣本主要是用于病理形態(tài)學(xué)觀察，近些年，隨著精////準(zhǔn)醫(yī)療的滲透發(fā)展，F(xiàn)FPE樣本在臨床病理檢驗、腫瘤基因檢測中也得到廣泛使用。圖1FFPE樣本人們將FFPE樣本中的核酸提取出來進(jìn)行建庫，然后利用高通量測序技術(shù)對FFPE樣本的核酸進(jìn)行測序和分析，就能得到病理和腫瘤相關(guān)的很多

準(zhǔn)備一份好的核酸模板，真的非常有必要2020/08/18: “開弓沒有回頭箭”，核酸質(zhì)量是分子實驗成功的基礎(chǔ)核酸提取是實驗室蕞常見實驗，我們經(jīng)常會抽提基因組或者總RNA，少則幾份，多則上百份。準(zhǔn)備提取材料，加入TRIzol或裂解液，加入氯////仿、異丙醇，純化柱或手提進(jìn)行核酸沉淀和洗滌、洗脫，半小時后就可以得到核酸樣本。因為提取實驗太平常，以至于我們從來沒有思考過這個實驗背后的問題。大家通常測濃度、測比值，而教科書中已明確告知我們測出來數(shù)值（純粹核酸的比值范圍是固定的）代表了核酸品質(zhì)，但偏離標(biāo)準(zhǔn)范圍的數(shù)值往往被忽視，對實驗結(jié)果的影響往往得不到很好的解釋

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