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2023
09-11

如何選擇蛋白表達(dá)系統(tǒng)？
在蛋白表達(dá)系統(tǒng)的相關(guān)研究中，從頭合成蛋白質(zhì)并不是一個(gè)可行的選擇。因此需要借助活細(xì)胞或細(xì)胞器用作生產(chǎn)和構(gòu)建蛋白質(zhì)的工廠。那么你知道該如何選擇蛋白表達(dá)系統(tǒng)嗎？讓我們一起來看看吧！目前，較為主流的表達(dá)宿主有大腸桿菌（E.coli）、畢赤酵母（P.pastoris）、昆蟲-桿狀病毒（Bac-to-Bac系統(tǒng)）以及哺乳動(dòng)物細(xì)胞系（CHO、HEK293）等。一、細(xì)菌優(yōu)點(diǎn)：1.遺傳背景清楚；2.繁殖快、成本低、抗污染能力強(qiáng)；3.表達(dá)量高、表達(dá)產(chǎn)物分離純化相對(duì)簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好；4.商品化的載體和菌株種類非常齊全、
2023
09-08

哪些因素影響電轉(zhuǎn)效率？
電轉(zhuǎn)，也稱電穿孔法，是通過脈沖電流在細(xì)胞膜上打孔，將外源分子（DNA、RNA、mRNA等）導(dǎo)入真核細(xì)胞內(nèi)，來改變細(xì)胞的特性，從而達(dá)到改造細(xì)胞的目的，是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究的重要工具。那么影響電轉(zhuǎn)效率的因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、電轉(zhuǎn)過程1）電轉(zhuǎn)的完整操作步驟包括電轉(zhuǎn)前操作，電轉(zhuǎn)執(zhí)行和電轉(zhuǎn)后培養(yǎng)。在進(jìn)行電轉(zhuǎn)前操作時(shí)，電轉(zhuǎn)試劑、細(xì)胞與轉(zhuǎn)染底物要進(jìn)行混勻，如果混勻時(shí)過于激烈，會(huì)破壞轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成，從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低；2）在進(jìn)行電轉(zhuǎn)前操作時(shí)，電擊緩沖液的選擇也很重要，由于細(xì)胞對(duì)
2023
09-08

超速離心機(jī)分為哪幾類？主要應(yīng)用于什么？
超速離心機(jī)是一種精密和*的離心機(jī)，它以極gao的速度運(yùn)行并分離出傳統(tǒng)離心機(jī)無法分離的較小分子。那么超速離心機(jī)分為哪幾類呢？主要應(yīng)用于什么呢？讓我們一起來看看吧！一、分析型超速離心機(jī)（AUC）顧名思義，分析離心機(jī)是用于分析樣品中存在的各種顆粒的超速離心機(jī)。分析超速離心(AUC)是一種用于定量分析溶液中大分子的通用且穩(wěn)健的方法這些超速離心機(jī)具有檢測(cè)系統(tǒng)，可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)顆粒的旋轉(zhuǎn)和位置，以確定沉降系數(shù)，這有助于根據(jù)形狀、大小和質(zhì)量分析顆粒。用于測(cè)定大分子的相對(duì)分子質(zhì)量的分析超速離心可以通過沉降速度方法或沉
2023
09-06

蛋白質(zhì)純化有哪些步驟呢？
蛋白質(zhì)純化是利用基因工程技術(shù)將編碼蛋白質(zhì)的核酸序列導(dǎo)入宿主細(xì)胞，使其大量表達(dá)，然后采用合適的純化方法進(jìn)行體外純化，以獲得高純度、高活性和高產(chǎn)量的蛋白質(zhì)的過程。那么你知道蛋白質(zhì)純化操作步驟嗎？讓我們一起來看看吧！1、構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒：目的基因PCR，載體酶切，連接，轉(zhuǎn)化，挑單克隆送測(cè)序；2、將構(gòu)建成功的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21（DE3）中，37℃培養(yǎng)過夜，挑單克隆小搖過夜；3、小誘導(dǎo)摸索最佳誘導(dǎo)條件：將搖過夜的菌液1:1000接種到3mLLB中，37℃搖4-5h至菌液OD600=0.6-0.8，加入不同
2023
09-06

如何區(qū)分非預(yù)染蛋白Marker和預(yù)染蛋白Marker？
蛋白Marker是蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，是一些已知分子量的蛋白質(zhì)的混合物，像“尺子”一樣用來指示蛋白質(zhì)條帶的大小。那么如何區(qū)分非預(yù)染蛋白Marker和預(yù)染蛋白Marker呢？讓我們一起來看看吧！非預(yù)染蛋白Marker：是幾種已知分子量并純化好的蛋白質(zhì)預(yù)混液，方便不同大小的蛋白比較。非預(yù)染的Marker使用上不如預(yù)染Marker好用，因?yàn)殡娪具^程中完quan看不到，電泳結(jié)束后經(jīng)過蛋白染色后才能起指示作用，無法在實(shí)驗(yàn)過程中起預(yù)示參照作用，屬于“后知后覺”型的。但是由于蛋白沒有附帶染料分子或者是標(biāo)記分子，所
2023
09-04

你知道如何正確使用移液槍嗎？
移液槍是實(shí)驗(yàn)室必*好工具，是檢驗(yàn)人的好朋友，配質(zhì)控、加樣都離不開移液槍的幫助，那么你知道怎么才能正確的使用移液槍嗎？讓我們一起來看看吧一、裝吸頭移液器套柄用力下壓，需要時(shí)小幅度旋轉(zhuǎn)即可。錯(cuò)誤操作：用力敲擊吸頭。此方法會(huì)帶來吸頭損壞甚至移液器套柄磨損，從而影響其密封性。不可以把槍頭提起來，再往下用力懟槍頭盒，這個(gè)非常錯(cuò)誤二、吸頭浸入角度吸液時(shí)盡量保持垂直狀態(tài)，傾斜角度不能超過20°三、吸液速度勻速連貫吸液，控制好吸液速度，太快會(huì)造成噴液，液體或者氣霧沖入移液器內(nèi)部，污染活塞等部件。沒有控制好速度，
2023
09-04

你知道什么是ELISA嗎？
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡(jiǎn)寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測(cè)定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)
2023
09-01

腺相關(guān)病毒（AAV）滴度快速檢測(cè)試劑盒的介紹
腺相關(guān)病毒（adeno-associatedvirus，AAV）,也稱腺伴隨病毒,屬于微小病毒科依賴病毒屬,是目前發(fā)現(xiàn)的一類結(jié)構(gòu)最jian單的單鏈DNA缺陷型病毒，需要輔助病毒（通常為腺病毒）參與復(fù)制。那么想要真正準(zhǔn)確可靠地檢測(cè)腺相關(guān)病毒（AAV）滴度該怎么辦呢？讓我們一起來看看吧！AAV基因組為4.8kb的線狀單鏈DNA；AAV免疫原性低，基因持續(xù)表達(dá)半年以上；AAV具有多種血清型，可以特異性靶向感染不同的組織或器官，是動(dòng)物活體基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的shou選工具！腺相關(guān)病毒血清型眾多（12種），不同血清
2023
09-01

免疫熒光（IF）實(shí)驗(yàn)常見問題有哪些？解決方案有什么？
免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。那么你知道在免疫熒光（IF）實(shí)驗(yàn)中會(huì)遇到那些問題以及這些問題的解決方法嗎？讓我們一起來看看吧！問題一：目標(biāo)蛋白熒光很弱，導(dǎo)致組間差異不顯著，導(dǎo)致假陰性結(jié)果解決方案：出現(xiàn)這種情況后，首先檢查抗體是否正確，是否適用于預(yù)處理的組織。有些抗體只適用于冰凍切片，但如果應(yīng)用于石蠟切片，則會(huì)出現(xiàn)弱標(biāo)記或無標(biāo)記現(xiàn)象。然后通過文獻(xiàn)了解目的蛋白在組織或細(xì)胞中的
2023
08-31

如何選擇熒光蛋白？
熒光標(biāo)記在生物學(xué)眾多的研究領(lǐng)域中有著十分廣泛的應(yīng)用，已經(jīng)成為研究體內(nèi)或細(xì)胞成像及生物細(xì)胞功能的重要工具。熒光標(biāo)記方式一般有兩種，一種是細(xì)胞表達(dá)的熒光蛋白，另外一種是化學(xué)合成的熒光分子，此外，螢光素酶也是細(xì)胞標(biāo)記的常用方法。每一種熒光分子都有其獨(dú)te的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)。螢光素酶不同于熒光分子，其發(fā)光機(jī)制是利用酶與底物的反應(yīng)，催化發(fā)出的化學(xué)發(fā)光，其發(fā)光并不需要激發(fā)光的參與，常用于體內(nèi)成像及螢光素酶報(bào)告基因的定量實(shí)驗(yàn)。熒光蛋白如何選擇呢？讓我們一起來看看吧！一、激發(fā)波長(zhǎng)/發(fā)射波長(zhǎng)每一種熒光蛋白都有其
2023
08-30

DNA提取試劑盒，應(yīng)該如何選？
實(shí)驗(yàn)室工作中，經(jīng)常會(huì)需要用到純化的DNA，這時(shí)我們通常需要使用一個(gè)商業(yè)的DNA提取試劑盒對(duì)目的DNA進(jìn)行分離純化。市面上有很多類型的提取試劑盒，當(dāng)使用不太熟悉的樣本類型時(shí)，選擇合適的盒子是尤為關(guān)鍵的，應(yīng)該如何選擇呢？讓我們一起來看看吧！一、試劑盒組分目前大多數(shù)DNA提取試劑盒遵循相同的基本步驟:裂解，柱純化，洗滌雜質(zhì)，柱洗脫。然而，不同的盒子在完成每個(gè)步驟的方式上有很大的不同。二、使用的樣本類型不同的DNA來源有不同的試劑盒，從實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞，到臨床樣本，土壤樣本，甚至指紋，也有許多專門用于某
2023
08-30

提取DNA方法的優(yōu)缺點(diǎn)，你知道嗎？
目前比較常用的提取DNA的方法有：苯酚氯仿抽提法、離心柱法和磁珠法，提取DNA的這些方法有哪些優(yōu)缺點(diǎn)呢？你都知道嗎？讓小編帶你來看看吧！一、苯酚氯仿抽提法苯酚氯仿提取DNA是利用酚是蛋白質(zhì)的變性劑，反復(fù)抽提，使蛋白質(zhì)變性，SDS(十二烷基磺酸鈉)將細(xì)胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白質(zhì)或多肽或小肽分子，變性降解核蛋白，使DNA從核蛋白中游離出來。而DNA易溶于水，卻不溶于有機(jī)溶劑。蛋白質(zhì)分子表面帶有親水基團(tuán)，也容易進(jìn)行水合作用，并在表面形成一層水化層，使蛋白質(zhì)分子能順利地進(jìn)入到水溶液
2023
08-28

抗體如何保存合適？
抗體保存好，實(shí)驗(yàn)失敗少。那抗體如何保存合適？讓我們一起來看看吧！一、保存溫度和條件很多抗體的最佳保存條件是分裝成小包裝凍存于-20°C或-80°C。分裝能使凍融引起的損失減到最小，同時(shí)可避免多次在一個(gè)管內(nèi)取樣而由槍頭引入的污染。分裝凍存的抗體，融解一次后剩余抗體應(yīng)保存于4°C。收到抗體后，應(yīng)10,000xg離心20秒，使管口螺紋內(nèi)的抗體溶液全部離心至管底，用低蛋白吸附性的微量離心管分裝。分裝量的多少取決于每次試驗(yàn)的使用量。分裝量不能少于10μl；分裝量越少，由于蒸發(fā)和吸附于管內(nèi)壁而引起的損失會(huì)越
2023
08-28

常用的轉(zhuǎn)染方法有哪些不同？
轉(zhuǎn)染方法很多，常見的有：DEAE－葡聚糖法、磷酸鈣法、陽(yáng)離子脂質(zhì)體法、陽(yáng)離子聚合物、逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA）、病毒介導(dǎo)法、Biolistic顆粒傳遞法（基因槍粒子轟擊法）、顯微注射法、電穿孔法等。常用的轉(zhuǎn)染方法有哪些不同？讓我們一起來看看吧！一、DEAE－葡聚糖法原理：帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。主要應(yīng)用：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染特點(diǎn)：相對(duì)簡(jiǎn)便、重復(fù)比磷酸鈣好,但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS細(xì)胞系。二、磷酸鈣法原理：
2023
08-25

對(duì)Elastin彈性蛋白/膠原酶你了解嗎？
彈性蛋白是一種由氨基酸組成的蛋白質(zhì)，具有很高的可延展性和回彈性。它主要存在于結(jié)締組織中，如皮膚、血管和肺泡等。彈性蛋白能夠使這些組織具有彈性和柔韌性，從而能夠承受外部壓力和拉力。這種能力使它們?cè)谌粘；顒?dòng)和運(yùn)動(dòng)中起到關(guān)鍵的支持和保護(hù)作用。膠原酶是一種酶類，可以降解膠原蛋白和彈性蛋白。膠原蛋白是另一種主要的結(jié)構(gòu)蛋白，存在于人體的各種組織中。膠原酶通過分解膠原蛋白和彈性蛋白的連接，調(diào)節(jié)這些蛋白質(zhì)的含量和分布。這種降解作用對(duì)組織的重構(gòu)和修復(fù)至關(guān)重要，因?yàn)樗軌蚯宄匣褪軗p的蛋白質(zhì)，促進(jìn)新的蛋白質(zhì)合成和
2023
08-23

提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，這些關(guān)鍵點(diǎn)你知道嗎？
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是現(xiàn)代生物學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一，它使研究者能夠引入外源DNA、RNA或蛋白質(zhì)等分子到目標(biāo)細(xì)胞中，以研究細(xì)胞的功能和相互作用。然而，進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)需要注意一些關(guān)鍵細(xì)節(jié)，以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性、可靠性和可重復(fù)性。提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，這些關(guān)鍵點(diǎn)你知道嗎？一、合適的細(xì)胞類型和培養(yǎng)條件不同的細(xì)胞類型對(duì)轉(zhuǎn)染方法和試劑的敏感性有所差異，因此在進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)之前，要仔細(xì)選擇合適的細(xì)胞類型，并確保其在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下生長(zhǎng)良好。了解細(xì)胞的特性和要求，包括細(xì)胞密度、培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)時(shí)間等，對(duì)于獲得可靠的實(shí)驗(yàn)
2023
08-23

什么是熒光原位雜交？
熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一門新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性原位雜交技術(shù)。目前這項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究待許多領(lǐng)域。FISH的基本原理是用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針，按照堿基互補(bǔ)的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行異性結(jié)合，形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在
2023
08-22

蛋白質(zhì)定量有哪些方法？
蛋白定量是蛋白分離和分析前必須的一個(gè)重要步驟，蛋白色譜分離、蛋白質(zhì)電泳分析、蛋白質(zhì)免疫分離和分析、細(xì)胞裂解釋放的總蛋白定量、蛋白分子的標(biāo)記、蛋白結(jié)構(gòu)分析等，都需要可靠的定量分析作為基礎(chǔ)。蛋白定量分析應(yīng)用的領(lǐng)域包括生物科學(xué)，食品檢驗(yàn)，臨床檢驗(yàn)等等。蛋白質(zhì)定量有哪些方法？讓我們一起來看看吧！一、比色法蛋白定量常使用的方法是比色法，通常用于總蛋白的定量分析。根據(jù)蛋白和比色試劑的結(jié)合，可以將比色法分為：蛋白-染料結(jié)合法和蛋白-銅螯合化學(xué)試劑法。前者對(duì)應(yīng)的典型蛋白定量比色法是考馬斯亮藍(lán)G250染料結(jié)合法，
2023
08-21

WB實(shí)驗(yàn)中條帶不跑歪的秘訣
在做Westernblot實(shí)驗(yàn)時(shí)，你一定會(huì)遇到各式各樣的條帶，最常見的就是條帶跑歪了，如凹型條帶、凸型條帶、斜條帶、條帶拖尾等。如何更好的做好WB實(shí)驗(yàn)，讓我們一起來看看WB實(shí)驗(yàn)中條帶不跑歪的秘訣吧！一、凹凸條帶的原因和解決辦法可能原因：可能是由于膠未配好（凝膠未能wan全聚合，膠中有顆粒或氣泡，凝膠未冷卻好，），也可能是電壓過高。解決方法：正確添加質(zhì)量合格且未過期的AP及TEMED；過濾配膠的試劑保證配膠過程中膠內(nèi)無氣泡；凝膠冷卻好后再上樣；降低電壓。二、條帶出現(xiàn)黑點(diǎn)或黑斑的原因和解決辦法可能原
2023
08-21

Q-pcr 和 RT-pcr 有啥區(qū)別？
Q-PCR和RT-PCR都是分子生物學(xué)中常用的技術(shù)，用于檢測(cè)和定量特定的核酸序列。Q-pcr和RT-pcr有啥區(qū)別？它們的原理和應(yīng)用類型相同嗎？今天讓我們一起來了解一下吧！一、Q-pcr和RT-pcr原理上的不同Q-PCR也是基于PCR的技術(shù)，但它引入了熒光探針或熒光染料來實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)的進(jìn)程。熒光信號(hào)的強(qiáng)度與目標(biāo)序列的數(shù)量成正比，因此可以定量地測(cè)量起始樣品中的目標(biāo)核酸數(shù)量。RT-PCR結(jié)合了逆轉(zhuǎn)錄（ReverseTranscription）和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的過程。二、Q-pcr和

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