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上海嶸崴達(dá)實(shí)業(yè)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第18年
各種常見緩沖液的配制方法2012/08/10
磷酸鹽緩沖液,Tris緩沖液和檸檬酸緩沖液等是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的緩沖液,也是PeproTech重組細(xì)胞因子和蛋白溶解所需的常用緩沖液。然而,這些緩沖液的配制比較麻煩,尤其當(dāng)要獲得特定pH值的緩沖液時(shí),調(diào)節(jié)pH值是費(fèi)力、費(fèi)時(shí)的事情。對(duì)于Tris等緩沖液等,pH計(jì)是無法準(zhǔn)確測(cè)量其pH值的。那么,有沒有簡(jiǎn)便的方法來配制特定濃度和pH值的上述緩沖液呢?美國(guó)PeproTech公司為此精心設(shè)計(jì)開發(fā)出一個(gè)網(wǎng)上實(shí)用工具--http://www.peprotech-asia.com/convertor/ch/ph
免疫血清制備方案2012/06/19
免疫血清的制備是一項(xiàng)常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。價(jià)、高特異性的免疫血清可作為免疫學(xué)診斷的試劑(如用于制備免疫標(biāo)記抗體等),也可供特異性免疫治療用。免疫血清的效價(jià)高低取決于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫反應(yīng)性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強(qiáng)的抗原刺激高應(yīng)答性的機(jī)體,??色@得價(jià)的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫時(shí),則需同時(shí)加用佐劑以增強(qiáng)抗原的免疫原性。免疫血清的特異性主要取決于免疫用抗原的純度。因此,如欲獲得高特異性的免疫血清,必須予先純化抗原。此外,抗原的劑量、免疫途徑及注射抗原的時(shí)間間隔等,也是影響免疫血清效價(jià)的
凝膠遷移實(shí)驗(yàn)2012/05/29
凝膠遷移實(shí)驗(yàn)?zāi)z遷移實(shí)驗(yàn)中,全面詳細(xì)地介紹具體的實(shí)驗(yàn)操作方法,從探針的標(biāo)記,探針的純化,EMSA膠的配制,EMSA結(jié)合反應(yīng),再到zui后的電泳分析.www.biomart.cn/runwell/index.htm1.探針的標(biāo)記(1)如下設(shè)置探針標(biāo)記的反應(yīng)體系:待標(biāo)記探針(1.75pmol/微升)2微升T4PolynucleotideKinaseBuffer(10X)1微升Nuclease-FreeWater5微升[γ-32P]ATP(3,000Ci/mmolat10mCi/ml)1微升T4Pol
蛋白樣品的定量2012/05/10
www.biomart.cn/runwell/index.htm目前常用比色法測(cè)定樣品蛋白的含量:Bradford法(考馬斯亮藍(lán)法)、Lowry法(Folin-酚試劑法)、BCA法等。但各有優(yōu)缺點(diǎn),大家可以根據(jù)具體情況選取。按相應(yīng)蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說明操作,測(cè)定樣品濃度。收集完蛋白樣品后,為確保每個(gè)蛋白樣品的上樣量一致,需要測(cè)定每個(gè)蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同,需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y(cè)定方法。因?yàn)椴煌牡鞍诐舛葴y(cè)定方法對(duì)于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大,大家可以根據(jù)具體情
流式抗體選購(gòu)常識(shí)2012/04/23
流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過程中,熒光抗體對(duì)單細(xì)胞懸液的標(biāo)記效果直接影響實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)質(zhì)量。因此,需要考慮各種影響流式抗體品質(zhì)及檢測(cè)效果的因素,例如抗體特異性、熒光素信號(hào)強(qiáng)弱、熒光素標(biāo)記方式、同型對(duì)照等。流式抗體的選擇:1流式抗體本身也是抗體,所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇zui基本的條件:目標(biāo)蛋白特異性,反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。2流式抗體熒光標(biāo)記的方式包括直接標(biāo)記和間接標(biāo)記兩種。在流式實(shí)驗(yàn)過程中,盡量減少實(shí)驗(yàn)工序和過程,以保證實(shí)驗(yàn)的真實(shí)和準(zhǔn)確性。因此在條件允許的范圍內(nèi),建議盡量用直接標(biāo)記的抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)而不去做
蛋白質(zhì)色譜的化技術(shù)2012/04/10
蛋白質(zhì)色譜的化技術(shù)摘自蛋白質(zhì)色譜的化是應(yīng)對(duì)當(dāng)前細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)能提升和政府監(jiān)管力度加大的重要手段之一。本文從蛋白質(zhì)色譜介質(zhì)的創(chuàng)新、色譜過程的集成和強(qiáng)化等方面介紹了蛋白質(zhì)色譜化的主要途徑和研究進(jìn)展,從而為蛋白質(zhì)色譜化技術(shù)研究和分離純化工藝的設(shè)計(jì)、開發(fā)提供借鑒。1.蛋白質(zhì)色譜介質(zhì)的創(chuàng)新-新型色譜介質(zhì)的合成1.1雙孔與超大孔色譜介質(zhì)色譜介質(zhì)是蛋白質(zhì)色譜的核心構(gòu)件。目前商業(yè)化蛋白質(zhì)色譜介質(zhì)的孔道尺寸多在100nm以下,孔道對(duì)蛋白質(zhì)分子的(擴(kuò)散)傳質(zhì)存在嚴(yán)重地阻滯作用,導(dǎo)致色譜柱效、處理能力(動(dòng)態(tài)吸附容量)和分
流式實(shí)驗(yàn)為何用同型對(duì)照及其選擇2012/03/23
流式實(shí)驗(yàn)為何要用同型對(duì)照及如何選擇一、為什么要用同型對(duì)照?同型對(duì)照是使用與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量和相同的免疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白,用于消除由于抗體非特異性與細(xì)胞結(jié)合而產(chǎn)生的背景染色。同型對(duì)照是真正意思上的陰性對(duì)照,它不但可以用來設(shè)定流式細(xì)胞儀的電壓,而且還可以幫忙省去昂貴與繁瑣的重組細(xì)胞因子競(jìng)爭(zhēng)封閉步驟。在流式細(xì)胞儀上樣前,染色方式如下:樣本管:一抗+樣本,同型對(duì)照管:同型對(duì)照+樣本二、如何選擇同型對(duì)照?(1)一般選擇與一抗的成分*相同種屬來源、相同亞型和亞鏈、相同熒光標(biāo)記的抗
PCR疑難解決辦法總結(jié)2012/03/15
PCR疑難解決辦法總結(jié)www.runwelltac.com問題1:不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶引物:引物質(zhì)量是PCR失敗或擴(kuò)增條帶不理想、容易彌散的常見原因。對(duì)策為:①選定合適的引物合成單位;②引物的濃度不僅要看OD值,用引物原液做瓊脂糖凝膠電泳,如一條引物有條帶,一條引物無條帶,此時(shí)做PCR有可能失敗,應(yīng)與引物合成單位協(xié)商解決,如一條引物亮度高,一條引物亮度低,在稀釋引物時(shí)要平衡其濃度;③引物應(yīng)高濃度小量分裝保存,防止多次凍融或長(zhǎng)期放冰箱冷藏而導(dǎo)致變質(zhì)降解失效;④引物設(shè)計(jì)不合理,如引物長(zhǎng)度不夠,引物之間形成
跨膜酪氨酸磷酸酶CD452012/02/23
跨膜酪氨酸磷酸酶CD45www.runwelltac.com造血干細(xì)胞(HSC)微環(huán)境是一個(gè)復(fù)雜的環(huán)境,它在支持靜態(tài)造血干細(xì)胞生存的同時(shí),也支持了造血細(xì)胞補(bǔ)給過程中前體細(xì)胞的擴(kuò)增、分化和遷移。1,2支持骨內(nèi)膜微環(huán)境中zui原始造血干細(xì)胞的基質(zhì)細(xì)胞實(shí)際上是成纖維細(xì)胞、表達(dá)CXCL12/SDF-1的網(wǎng)狀細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和骨形成造骨細(xì)胞的混合物。1,2zui近,有研究顯示骨吸收破骨細(xì)胞也在微環(huán)境中起作用。3目前的證據(jù)表明此項(xiàng)作用涉及到造血的跨膜酪氨酸磷酸酶CD45。CD45存在于所有造血細(xì)胞的表面,包括
等電聚焦電泳法實(shí)驗(yàn)過程2012/02/15
等電聚焦電泳法實(shí)驗(yàn)過程一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私獾入娋劢沟脑?通過蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測(cè)定,掌握聚丙烯酰胺凝膠垂直管式等電聚焦電泳技術(shù).二、實(shí)驗(yàn)原理等電聚焦(Isoelectricfocusing,簡(jiǎn)稱IEF)是六十年代中期出現(xiàn)的新技術(shù).近年來等電聚焦技術(shù)有了新的進(jìn)展,已迅速發(fā)展成為一門成熟的近代生化實(shí)驗(yàn)技術(shù).目前等電聚焦技術(shù)已可以分辨等電點(diǎn)(pI)只差0.001pH單位的生物分子.由于其分辨力高,重復(fù)性好,樣品容量大,操作簡(jiǎn)便迅速,在生物化學(xué)、分子生物學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)研究中得到廣泛的應(yīng)用.蛋白質(zhì)分子是典型的兩性
Caspase活性檢測(cè)相關(guān)問題解答2012/02/01
Caspase活性檢測(cè)相關(guān)問題解答1:Caspase活性測(cè)試是如何使用的?www.runwelltac.com答:Caspase活性測(cè)試為在細(xì)胞裂解液中檢測(cè)蛋白酶活性提供了簡(jiǎn)捷方便的手段。當(dāng)對(duì)專一Caspase的多肽底物被裂解時(shí),釋放出的指示分子可用普通讀光儀或熒光讀板儀來做定量測(cè)定。將從細(xì)胞凋亡樣本得到的信號(hào)同未經(jīng)誘導(dǎo)的對(duì)照樣本進(jìn)行比較,可以確定Caspase活性增加的倍數(shù),而Caspase酶活性是同檢測(cè)到的信號(hào)直接成正比。2:Caspase活性測(cè)試是否可用于定量檢測(cè)?答:R&DSystems
間接免疫熒光法-檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)抗原2012/01/12
間接免疫熒光法-檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)抗原細(xì)胞內(nèi)抗原的檢測(cè)過程與細(xì)胞表面抗原檢測(cè)過程基本一致,只是在與一抗孵育前,需要預(yù)先對(duì)細(xì)胞用非離子去污劑進(jìn)行透化處理。www.biomart.cn/runwell/index.htm操作方法www.runwelltac.com1.取已固定好的細(xì)胞爬片或甩片或經(jīng)過預(yù)處理的組織切片(石蠟或冰凍切片);2.用含0.2%TritonX-100或NP-40的PBS溶液透化固定后的細(xì)胞2min(室溫),有些標(biāo)本可能需要長(zhǎng)達(dá)15min,時(shí)間視抗原而定;3.余下步驟接上述“細(xì)胞表面抗原
ENZO多通道凋亡檢測(cè)試劑盒2012/01/11
ENZO多通道凋亡檢測(cè)試劑盒-------與GFP或其它綠色熒光同時(shí)分析GFP-CertifiedTMApoptosis/NecrosisDectectionKit,貨號(hào)Cat.No.:ENZ-51002-25/ENZ-51002-10,其優(yōu)勢(shì)在于:ENZO*熒光染料標(biāo)記,AnnexinV-EnzoGold,解決PE在細(xì)胞表面的聚集問題真正實(shí)現(xiàn)與GFP或其它綠色熒光探針多通道檢測(cè)穩(wěn)定區(qū)分正常、早期凋亡、晚期凋亡和壞死細(xì)胞優(yōu)化熒光顯微鏡法和流式檢測(cè)可與GFP同時(shí)檢測(cè)發(fā)射光譜重疊zui?。ㄑa(bǔ)償易調(diào)節(jié)
PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)指南之引物設(shè)計(jì)2012/01/04
PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)指南之引物設(shè)計(jì)所謂“工欲善其事,必先利其器”,這年頭手工設(shè)計(jì)引物的人似乎不多,還是用軟件方便些,防止你一不小心看走眼,丟一個(gè)堿基,同時(shí)計(jì)算起來也方便。設(shè)計(jì)軟件有很多,既可以在線設(shè)計(jì),也可以用Primer、Oligo等等。細(xì)心地進(jìn)行引物設(shè)計(jì)是PCR中zui重要的一步。理想的引物對(duì)只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其他序列退火。設(shè)計(jì)糟糕的引物可能會(huì)同時(shí)擴(kuò)增其他的非目的序列。下面的指導(dǎo)描述了一個(gè)可以增加特異性的引物所具有的令人滿意的特點(diǎn):1)典型的引物18到24個(gè)核苷長(zhǎng)。引物需要足夠長(zhǎng),保證
流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)常見問題解答2011/12/21
流式細(xì)胞術(shù)常見問題解答B(yǎng)ioLegend公司提供了哪些熒光標(biāo)記抗體?答:BioLegend公司提供APC、APC/Cy7、AlexaFluorTM488、AlexaFluorTM647、AlexaFluorTM700、Biotin、BrilliantVioletTM421、FITC、DyLightTM594、DyLightTM649、PacificBlueTM、PE、PE/Cy5、PE/Cy7、PerCP、PerCP/Cy5.5共計(jì)16種熒光素標(biāo)記的7000多種流式抗體供客戶選擇。流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的
分析蛋白純化方法及其優(yōu)缺點(diǎn)2011/12/02
分析蛋白純化方法及其優(yōu)缺點(diǎn)www.biomart.cn/runwell/index.htm1.蛋白沉淀蛋白能溶于水是因?yàn)槠浔砻嬗杏H水性氨基酸,在蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)處若溶液的離子強(qiáng)度特別高或者特別低,蛋白則傾向于從溶液中析出。硫酸銨是沉淀蛋白zui常用的鹽,因?yàn)樗诶涞木彌_液中溶解性好,冷的緩沖液有利于保持目的蛋白的活性。硫酸銨分餾常用作試驗(yàn)室蛋白純化的*步,它可以初步粗提蛋白質(zhì),去除非蛋白成分。蛋白質(zhì)在硫酸銨沉淀中較穩(wěn)定,可以短期在這種狀態(tài)下保存中間產(chǎn)物,當(dāng)前蛋白質(zhì)純化多采用這種辦法進(jìn)行粗分離翻。在
白介素-10簡(jiǎn)介及作用2011/11/22
白介素-10簡(jiǎn)介及作用1、IL-10簡(jiǎn)介www.biomart.cn/runwell/index.htm在1989年,Mosmannand及他們的同事描述了一種新的免疫介質(zhì),由Th2細(xì)胞克隆分泌,能夠抑制Th1細(xì)胞克隆IL-2和IFNr的合成。早期被命名為細(xì)胞因子合成抑制因子(CSIF),這種因子后來被命名為IL-10,在這被發(fā)現(xiàn)的21年期間,很多研究深入剖析了這個(gè)細(xì)胞因子的生物學(xué)特性2、IL-10基因和蛋白www.runwelltac.com人類IL-10基因位于1號(hào)染色體上,包括總共5.1k
細(xì)胞因子和重組蛋白溶解方法2011/11/16
細(xì)胞因子和重組蛋白溶解方法www.runwelltac.comPeproTech細(xì)胞因子所有細(xì)胞因子和蛋白均為凍干粉,這使得運(yùn)輸非常便捷,只要常溫即可。而且,細(xì)胞因子和蛋白凍干粉非常穩(wěn)定,在-20或-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解,然后以液體形式加到培養(yǎng)體系或注射入動(dòng)物體內(nèi)。溶解步驟非常關(guān)鍵,因溶解不好會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞因子或蛋白的失活,這也是很多用戶在實(shí)際使用中經(jīng)常遇到的問題。那么,應(yīng)該如何進(jìn)行正確的溶解呢?下面我們以RecombinantHumanIL-4(重組人IL-4,產(chǎn)品編號(hào)
半乳糖凝集素3在血管生成中的作用2011/11/07
Galectin-3在血管生成中的作用半乳糖凝集素Galectin-3在血管生成中的作用www.biomart.cn/runwell/index.htm某些生理過程,如胚胎發(fā)育、生殖功能和傷口愈合,都需要新血管的形成。從現(xiàn)有的血管形成新血管的細(xì)胞機(jī)制被稱為血管生成。血管生成是一個(gè)多步驟的過程,包括一些細(xì)胞因子(peprotech)和生長(zhǎng)因子的協(xié)調(diào)行動(dòng),對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮趨化、促有絲分裂和調(diào)節(jié)作用1。研究表明,碳水化合物結(jié)合蛋白以及它們各自的糖綴合物配體在血管生成中也扮演了重要角色。2,3具體來說
正確選擇流式抗體及搭配熒光素2011/10/27
選擇合適的流式抗體及流式抗體搭配熒光素的原則如何選擇流式抗體:www.biomart.cn/runwell/index.htm*、選擇流式抗體要看清楚抗的是你的目標(biāo)蛋白質(zhì),目標(biāo)蛋白的物種不要搞錯(cuò)了,有些抗體對(duì)好幾個(gè)物種的目標(biāo)蛋白有反應(yīng),重要的是對(duì)你的實(shí)驗(yàn)有沒有影響。第二、抗體的物種是小鼠,大鼠,兔子還是什么。以備不時(shí)之需,還是選擇你有匹配二抗。如果抗體還能夠做熒光染色啊,westernblot啊用途多了更好。第三、選擇流式抗體還要看熒光的顏色的選擇:一是你的流式儀一定要能讀,二是跟你需要coun
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