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HYBOND-P PVDF膜說明書2011/10/19

HYBOND-PPVDF膜說明書美國GE試劑（原安瑪西亞）貨號RPN303F或25006567，品名：HYBOND-PPVDFMEMBRANE30CM（30cm×3m）HYBOND-PPVDF膜30CM30cnX3m/卷常備貨產(chǎn)品，產(chǎn)品描述如下：AmershamHybond™-PHydrophobicpolyvinylidenedifluoride（PVDF）membraneoptimizedforuseinproteintransfersand/orWesternblottingapplica

蛋白質(zhì)的沉淀方法及常見沉淀劑2011/10/18

蛋白質(zhì)的沉淀方法及常見沉淀劑蛋白質(zhì)沉淀的概念：www.runwelltac.com蛋白質(zhì)分子凝聚從溶液中析出的現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)沉淀（precipitation），變性蛋白質(zhì)一般易于沉淀，但也可不變性而使蛋白質(zhì)沉淀，在一定條件下，變性的蛋白質(zhì)也可不發(fā)生沉淀。定性分析：蛋白質(zhì)所形成的親水膠體顆粒具有兩種穩(wěn)定因素，即顆粒表面的水化層和電荷。若無外加條件，不致互相凝集。然而除掉這兩個穩(wěn)定因素（如調(diào)節(jié)溶液pH至等電點和加入脫水劑）蛋白質(zhì)便容易凝集析出。如將蛋白質(zhì)溶液pH調(diào)節(jié)到等電點，蛋白質(zhì)分子呈等電狀態(tài)，雖

IHC，ELISA和WB實驗比較2011/09/28

IHC，ELISA和WB實驗比較www.runwelltac.com免疫組化、Western、ELISA，免疫學(xué)三大工具，分別用于定位，定性和定量。IHC（免疫組化Immunohistochemistry）是融合了免疫學(xué)原理（抗原抗體特異性結(jié)合）和組織學(xué)技術(shù)（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色，來對組織（細胞）內(nèi)抗原進行定位、定性及定量的研究（主要是定位）。樣本是細胞或組織，要在顯微鏡下觀察結(jié)果，可能出現(xiàn)膜陽性、質(zhì)陽性

免疫組化抗體選擇及常用染色方法2011/09/21

免疫組化抗體選擇及常用染色方法www.runwelltac.com一、免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry,IHC）免疫組織化學(xué)是利用抗原抗體的特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及定量的研究。免疫組織化學(xué)染色技術(shù)不僅有較高的敏感性和特異性，其特點是將形態(tài)學(xué)改變與功能、代謝變化結(jié)合起來，直接在組織切片，細胞涂片或培養(yǎng)細胞爬片上定位一些蛋白質(zhì)和多肽類物質(zhì)的存在，并可到亞細胞結(jié)構(gòu)

細胞培養(yǎng)中無菌操作技術(shù)2011/09/14

細胞培養(yǎng)中無菌操作技術(shù)細胞培養(yǎng)中的無菌技術(shù)：www.runwelltac.com1.實驗進行前，無菌室及無菌操作臺（laminarflow）以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進行下一個細胞株的操作。2.無菌

roche試劑9月現(xiàn)貨選購2011/09/06

roche試劑9月現(xiàn)貨以下均為羅氏現(xiàn)貨9月份現(xiàn)貨庫存，詢價請我司銷售部：，/。4929292001LCCapillaries54709705001FuGENEHDTransfectionReagent，1ML11858882001HIGHPUREVIRALRNAKIT3508838103Protein._K，rec_PCR_Grade_Lyo.10843555001HYGROMYCINB11667165001TRIPURE11684817910InSituCellDeathPOD46931320

熒光素半抗原標(biāo)記探針2011/08/12

熒光素半抗原標(biāo)記探針www.runwelltac.com非放射性物質(zhì)標(biāo)記核酸探針的方法通常是通過在核酸分子中引入諸如半抗原、生物素等惰性小分子。這些小分子一般通過連接到dUTP等核苷三磷酸上。這種經(jīng)修飾的核苷三磷酸再通過酶促反應(yīng)摻入到探針中，例如用于隨機引物法標(biāo)記長鏈探針或是通過末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記寡核苷酸的3′端。雜交后用與一種酶相連接的抗體（或者如果是生物素，則用鏈霉抗生物素蛋白streptavidin）來檢測，這些酶如堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶是用來催化所檢測反應(yīng)的?？墒褂玫陌肟乖芏?，zui常

常見小鼠采血方法2011/08/01

小鼠給藥與采血常見方法www.runwelltac.com一、小鼠灌胃小鼠灌胃方法比較簡單，需要關(guān)注的只有兩點：1）要保持小鼠的頭部和頸部成一直線，方便灌胃針頭進入；2）動作要輕柔，從口角進入，防止損失食道。做的多了自然就熟練了。具體操作過程如下：1.準(zhǔn)備灌胃針頭。一般可以從市場上面買到，實在沒有的話，可以用12號的針頭，剪去針尖，用砂紙將頭端磨平，也可以用。但是買的灌胃針頭的頭端用錫或者適宜的方法處理了針頭的銳口，自己用砂紙不可能將所有的銳口都磨掉，用這樣的針頭灌胃，損失小鼠食道的可能性比較大

細胞免疫熒光實驗步驟2011/07/19

細胞免疫熒光實驗步驟www.runwelltac.com1.細胞一定要貼在玻片上（可以放入24孔板），為后面照像打基礎(chǔ)。細胞密度適中，大約60-75%滿片即可，否則容易脫片。2.取出細胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘，現(xiàn)用現(xiàn)配。（以下各步驟切毋使玻片干燥）3.PBS沖洗4.0.1%Triton作用20分鐘5.PBS沖洗6.10%正常血清封閉10分鐘7.加入一抗，4度孵育過夜（找個小瓶蓋將小玻片支起來，抗體就不容易溢出），還要記住“砸片”，就是抗體從較高處落到片子上，以分布均勻?？贵w稀釋度1：60，

多克隆抗體的免疫電泳2011/07/12

多克隆抗體的免疫電泳【實驗原理】www.runwelltac.com免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術(shù)，這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM''IgG''IgA含量水平的實驗方法。在這項實驗技術(shù)中，首先利用蛋白質(zhì)的分子量和所帶電荷的比值運用水平瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)將蛋白質(zhì)進行分離，然后將特異性的抗體引入到與電泳方向平行的凹槽中，在抗原和抗體的擴散過程中，抗原和抗體適當(dāng)比例的結(jié)合會導(dǎo)致沉淀的產(chǎn)生（如圖）。0.85%鹽不僅可以終止擴散過程也可用于洗去未結(jié)合的蛋白，抗原和抗體結(jié)合所形成

FITC熒光素標(biāo)記抗體2011/06/27

FITC熒光素標(biāo)記抗體www.runwelltac.com當(dāng)FITC在堿性溶液中與抗體蛋白反應(yīng)時，主要是蛋白質(zhì)上賴氨酸的r氨基與熒光素的硫碳胺鍵（thiocarbmide）結(jié)合，形成FITC-蛋白質(zhì)結(jié)合物，即熒光抗體或熒光結(jié)合物。一個IgG分子中有86個賴氨酸殘基，一般zui多能結(jié)合15～20個，一個IgG分子可結(jié)合2～8個分子的FITC，其反應(yīng)式如下：FITC-N=C=S+N-H2-蛋白質(zhì)→FITC-NS-C-N-H2-蛋白質(zhì)常用Marsshall（1958）法標(biāo)記熒光抗體，也可以根據(jù)條件采用

檢測熒光素酶2011/06/15

檢測熒光素酶www.runwelltac.comIntroductionLuciferasecanbeusedasareportergenetomeasuretheactivityofpromoters,and/orthetransfectionefficiency.AimsYouwillbeprovidedwiththeHEK293/COScellsthatyoutransfectedonMonday.Workingingroupsoftwo,takethetwosamplestransfec

脂肪酸的β-氧化過程2011/06/07

脂肪酸的β-氧化過程www.runwelltac.com一、脂肪酸的β-氧化過程肝和肌肉是進行脂肪酸氧化zui活躍的組織，其zui主要的氧化形式是β-氧化。此過程可分為活化，轉(zhuǎn)移，β-氧化共三個階段。1.脂肪酸的活化脂肪酸參加代謝前和葡萄糖一樣也先要活化。其活化形式是硫酯——脂肪酰CoA，催化脂肪酸活化的酶是脂酰CoA合成酶（acylCoAsynthetase）。活化后生成的脂酰CoA極性增強，易溶于水；分子中有高能鍵、性質(zhì)活潑；是酶的特異底物，與酶的親和力大，因此更容易參加反應(yīng)。脂酰CoA

IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測定2011/05/23

IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測定www.runwelltac.comIL-4能阻斷IFN對L929細胞的保護作用，其拮抗程度與IL-4濃度相關(guān)，據(jù)此可通過對L929細胞保護作用的抑制率來反映樣本中IL-4的含量。（1）、取生長良好的L929細胞傾去培養(yǎng)液，加入0．25％胰酶消化后，充分洗滌細胞，調(diào)整細胞濃度至1×105—3×105／mL，每孔加100uL，37℃，5％C02溫箱中培養(yǎng)24h。（2）、采用9—10日齡雞胚，制備成纖維細胞單層培養(yǎng)，接種適量VSV病毒。當(dāng)細胞病變達+++—++++時

亞“G1”峰檢測法檢測細胞凋亡2011/05/16

亞“G1”峰檢測法檢測細胞凋亡處于增殖周期中的細胞，根據(jù)其所處不同周期時相（Go/G1、S、G2/M），其DNA含量分布在2n～4n之間。發(fā)生凋亡的細胞由于核內(nèi)DNA裂解成許多小片段，在酒精固定后，用細胞膜通透劑使小分子量的DNA片段穿過胞膜，使細胞原有的DNA部分丟失，僅剩下大片段DNA，這些細胞在DNA染色后，用流式細胞分析術(shù)檢測其DNA含量，會出現(xiàn)一個DNA含量＜2n（即＜G1期細胞的分布區(qū)，稱為“亞G1峰”。因此處于“亞G1峰”的細胞代表樣品中的凋亡細胞?！緲悠穪碓础浚?）懸浮生長的培養(yǎng)

多肽合成方法2011/05/06

多肽合成方法多肽合成方法－N-羧基內(nèi)酸酐法www.runwelltac.comHermannLeuchs在1906看發(fā)現(xiàn)，在N－羧基內(nèi)酸酐（NCA）中，氨基酸的羧基活化和酰基保護同時發(fā)生。因此，在德國文獻中，又稱之為Leuchs－酸酐。原則上，該類衍生物應(yīng)具備理想的前提條件以應(yīng)用于多肽合成。*個N－羧基內(nèi)酸酐（1,3－氧氮雜環(huán)戊烷－2,5－二酮）是從N－（乙氧羰基）氨基酸酰氯消除氯乙烷而得到的。制備該類衍生物的一個好方法是游離氨基酸與光氣反應(yīng)，相應(yīng)的氨基甲酰氨為中間體。然而，痕量的水就能使N－羧

四氫呋喃（THF）氣相色譜檢測方法2011/04/29

四氫呋喃（THF）氣相色譜檢測方法www.runwelltac.com頭孢噻肟鈉是第三代廣譜頭孢類抗生素，廣泛應(yīng)用于臨床。其品質(zhì)的優(yōu)劣直接影響臨床的療效。因而，快速而準(zhǔn)確的檢測產(chǎn)品質(zhì)量是保證產(chǎn)品的有效手段。我們在依照藥典的標(biāo)準(zhǔn)，對我廠生產(chǎn)的頭孢噻肟鈉進行產(chǎn)品質(zhì)量的檢驗過程中，摸索建立一個新的、簡便準(zhǔn)確的氣相色譜法頭孢噻肟鈉合成品中的殘留溶媒進行測定，該方法能夠快速有效的對殘留溶媒進行檢測，是值得推廣的方法。1實驗部分1．1實驗儀器：GC-17A氣相色譜儀：FID檢測器；色譜柱：HP-FFAP（交

ATP生物發(fā)光技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用2011/04/22

ATP生物發(fā)光技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用www.runwelltac.comATP是化學(xué)物質(zhì)三磷酸腺苷的簡稱，存在于所有的生物體中（從微生物到高等動物），ATP在細胞體內(nèi)主要作用是提供能量。鑒于ATP存在于所有生物體中，利用ATP發(fā)光檢測儀檢測ATP，可以間接地證明生物體的存在。隨著食品行業(yè)對食品衛(wèi)生質(zhì)量要求越來越高，而且ATP生物發(fā)光法在檢測食品微生物時簡單、快速且靈敏度高，因此近年來受到廣泛關(guān)注。1ATP生物發(fā)光技術(shù)的發(fā)展過程ATP生物發(fā)光技術(shù)產(chǎn)生于20世紀(jì)70年代中期。1983年，Moyer[1]等

免疫組化技術(shù)規(guī)范2011/04/14

免疫組化技術(shù)規(guī)范www.runwelltac.com歐美國家相繼開展了免疫組化質(zhì)量控制工作，建立了一套比較完善的質(zhì)量控制方法和程序。中國病理工作者委員會（CCP）免疫組化研究中心借鑒國外的先進經(jīng)驗并結(jié)合我國當(dāng)前的實際情況開始探索一種適合我國免疫組化質(zhì)控的方法，同時，發(fā)現(xiàn)和推廣標(biāo)準(zhǔn)化的染色程序，改善和提高免疫組化實驗的可靠性，使免疫組化技術(shù)更具標(biāo)準(zhǔn)化，免疫組化結(jié)果更具可靠性和重復(fù)性。盡管免疫組化在許多實驗室中已常規(guī)開展，但它是一個多步驟、多因素決定的一種實驗方法，由于各實驗室采用的修復(fù)方法、染色方

區(qū)分抗原類別2011/04/06

區(qū)分抗原類別根據(jù)抗原是否顯示免疫原性而區(qū)分抗原www.runwelltac.com（1）*抗原：即免疫原。根據(jù)化學(xué)特性，免疫原性zui強的是蛋白質(zhì)抗原，多糖次之；脂類和核酸如果與蛋白質(zhì)及多糖形成復(fù)合物，可顯示免疫原性。（2）半抗原：因分子質(zhì)量小僅具有抗體結(jié)合特異性，需和載體蛋白連接后方具有免疫原性。此時，半抗原激活B細胞，載體蛋白激活T細胞。換言之，對于半抗原―載體系統(tǒng)，B細胞表位和T細胞表位分別位于半抗原和載體分子。根據(jù)B細胞產(chǎn)生抗體是否需要T細胞協(xié)助而區(qū)分抗原（1）T細胞依賴性抗原（TD―A