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分析干細(xì)胞的幾大特點(diǎn)2017/05/16: 1.生命的起源細(xì)胞人體起源一個(gè)單細(xì)胞受精卵（*代干細(xì)胞），經(jīng)歷卵裂（干細(xì)胞持續(xù)擴(kuò)增，增加細(xì)胞數(shù)量）、胚層出現(xiàn)（干細(xì)胞開始分化出功能細(xì)胞）、組織器官形成（功能細(xì)胞的有序排列）及胚后發(fā)育這樣一個(gè)連續(xù)過程。2.維持人體動(dòng)態(tài)平衡的種子細(xì)胞人體通過干細(xì)胞增殖和分化來實(shí)現(xiàn)細(xì)胞更新。成年并不意味著細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化的結(jié)束，而仍然存在著受調(diào)控的組織更新過程。在一些組織中，如骨髓、表皮等，新細(xì)胞可不斷地產(chǎn)生，以補(bǔ)充因分化而衰老、死亡的細(xì)胞。干細(xì)胞的增殖保持著機(jī)體內(nèi)細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡。3.干細(xì)胞功能表達(dá)體現(xiàn)出生命發(fā)育、

ATCC細(xì)胞凍存的操作步驟2017/05/09: 一、ATCC細(xì)胞材料（一）儀器1.凈化工作臺(tái)2.離心機(jī)3.恒溫水浴箱4.冰箱（4℃、-20℃、-70℃）5.倒置相差顯微鏡6.培養(yǎng)箱7.液氮冰箱（二）玻璃器皿1.吸管（彎頭、直頭）2.培養(yǎng)瓶3.玻璃瓶（250ml、100ml）4.廢液缸（三）塑料器皿1.吸頭2.槍頭3.膠塞4.移液管（10ml）5.15ml離心管6.凍存管（1～2ml）（四）其他物品1.微量加樣槍2.紅血球計(jì)數(shù)板3.記號(hào)筆4.醫(yī)用橡皮膏5.移液槍（五）試劑1.D-Hanks液2.小牛血清3.培養(yǎng)液4.雙抗（青霉素、鏈霉素）5.胰

細(xì)胞培養(yǎng)基常用幾種重要的添加成份及使用過程中應(yīng)注意的問題2017/05/04: 酚紅在ATCC細(xì)胞培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑，一般情況下，可以通過酚紅的指示作用判斷培養(yǎng)基的pH值，中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色；但低血清或是無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量不同，不能通過肉眼觀察或通過經(jīng)驗(yàn)來判定pH值，建議使用pH計(jì)進(jìn)行測定。酚紅通常對(duì)含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基的生物制品質(zhì)量并不會(huì)產(chǎn)生明顯影響，也可通過純化技術(shù)去除，但酚紅在無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡，影響細(xì)胞生長，這種作用能被血清所中和或減輕。因此，酚紅并不是細(xì)胞培養(yǎng)基中必需的一種成份

RNAi基因敲除的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用2017/04/27: RNAi基因敲除的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用①.干細(xì)胞比用同源重組法更加簡便，周期大大縮短。②.對(duì)于哺乳動(dòng)物，如對(duì)于一些敲除后小鼠在胚胎時(shí)就會(huì)死亡的基因，可以在體外培養(yǎng)的細(xì)胞中利用RNAi技術(shù)研究它的功能。③.由于RNAi能特異的阻斷基因的表達(dá)，它成為研究信號(hào)傳導(dǎo)通路的良好工具。④.RNAi還被用來研究在發(fā)育過程中起作用的基因，如可用RNAi來阻斷某些基因的表達(dá)，來研究他們是否在胚胎干細(xì)胞的增殖和分化過程中其起著關(guān)鍵作用。YAL011WBY4743,homozygousdiploid[30397]Sacchar

ATCC細(xì)胞培養(yǎng)中各種器皿滅菌注意事項(xiàng)2017/04/25: 1.ATCC細(xì)胞清洗玻璃制品時(shí)，浸酸之后一定要用自來水沖洗10—15次。因?yàn)闅埓娴南匆簩?duì)細(xì)胞粘附有很大影響。清洗塑料制品時(shí)要用棉花或柔軟紗布擦洗。千萬不要用硬毛刷，否則損害塑料表面后細(xì)胞不易貼壁。Tip和Tube一定要用超聲清洗處理后逐個(gè)清洗。如沒有洗凈會(huì)影響下一次使用的效果。2.干熱滅菌時(shí)，應(yīng)在白天使用烤箱，并不斷觀察，以免發(fā)生意外。當(dāng)溫度超過100℃時(shí)，不能再打開烤箱門。器皿烤完后，待溫度降至100℃之下才能開烤箱門。金屬器械和橡膠、塑料制品不能使用干熱滅菌方法。.3.高壓滅菌后器皿務(wù)必晾干

分析細(xì)胞常見的消化液2017/04/20: ATCC細(xì)胞取材進(jìn)行原代培養(yǎng)時(shí)常常需要將組織塊消化解離形成細(xì)胞懸液，傳代培養(yǎng)時(shí)也需要將貼壁細(xì)胞從瓶壁上消化下來，常用的消化液有胰酶(Trypsin)溶液和edta溶液，有時(shí)也用膠原酶(collagenase)溶液。1.胰酶溶液：胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示，常見有1：125和1：250，即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。組織培養(yǎng)用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%濃度，配制時(shí)要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡鹽溶液(如前面的D-Hank"s)，因?yàn)檫@些物質(zhì)會(huì)對(duì)胰酶產(chǎn)生抑制作用。胰

結(jié)晶紫檢測法檢測細(xì)胞生長2017/04/18: 1．腫瘤細(xì)胞在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板各孔中加0.1ml含5×104～10×4WEHI-164細(xì)胞的培養(yǎng)液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液），37℃5％CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3小時(shí)，讓細(xì)胞帖壁。2．用RPMI-1640培養(yǎng)液10倍遞次稀釋TNF標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)需要3～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品或待檢樣品，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)孔。對(duì)照孔6個(gè)，3個(gè)陽性對(duì)照孔各加0.1ml含4μgTNF的RPMI-1640培養(yǎng)液，3個(gè)陰性對(duì)照孔各加100μlRPMI-1640培養(yǎng)液。繼

質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作步驟2017/04/13: 1.1轉(zhuǎn)化細(xì)胞細(xì)胞鋪板：將細(xì)胞按70%的匯合度接種到96孔板。1.2轉(zhuǎn)染：16h后轉(zhuǎn)染螢光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒和RNA，每個(gè)樣品設(shè)置6個(gè)復(fù)孔(1)配制DNA和轉(zhuǎn)染試劑:96孔板轉(zhuǎn)染質(zhì)粒時(shí)每孔比例為pLenti：Firefly：Renilla：轉(zhuǎn)染試劑=0.2μg：0.1μg：0.01μg：0.25μL(2)稀釋好DNA及轉(zhuǎn)染試劑，常溫孵育5min(3)將稀釋好的DNA分別和轉(zhuǎn)染試劑混勻，常溫孵育20min(4)每孔棄去15μL培養(yǎng)基，將15μLDNA轉(zhuǎn)染混合液添加到每孔細(xì)胞樣品中(5)轉(zhuǎn)染6h后，換

小白鼠染色體的制備實(shí)驗(yàn)方法和步驟2017/04/11: (一)轉(zhuǎn)化細(xì)胞秋水仙素處理取骨髓前3～4小時(shí)先給小白鼠經(jīng)腹腔注入0.1％的秋水仙素，注射劑量為4毫克／每公斤動(dòng)物體重。(二)取骨髓經(jīng)秋水仙素處理的小白鼠，可用損傷脊髓法處死，然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉，取出大腿骨和脛骨，用一小塊紗布來回搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關(guān)節(jié)頭，然后將股骨剪碎投入小燒杯中，用2毫升1％檸檬酸鈉溶液攪爛碎骨，使骨髓細(xì)胞游離出來。靜止片刻，用吸管把懸浮液吸到離心管中，可重復(fù)沖洗一次。此時(shí)離心管中的細(xì)胞懸浮液可達(dá)4～5毫升。(三)低滲將所獲得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞懸

細(xì)胞凋亡的變化分析2017/04/06: 轉(zhuǎn)化細(xì)胞凋亡大多為生理性死亡，是細(xì)胞衰老過程中各個(gè)細(xì)胞功能逐漸減退的結(jié)果。凋亡可見于許多生理和病理過程中，如各種更替性組織衰亡更新，也可見于照射及應(yīng)用細(xì)胞抑制劑和數(shù)目性萎縮之時(shí)。腫瘤細(xì)胞也發(fā)生凋亡。這種壞死是活體內(nèi)單個(gè)細(xì)胞或小團(tuán)細(xì)胞的死亡，不是整個(gè)實(shí)質(zhì)區(qū)內(nèi)細(xì)胞同時(shí)死亡，死亡細(xì)胞的質(zhì)膜(細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜)不破裂，不引發(fā)死亡細(xì)胞的自溶也不引起急性炎癥反應(yīng)。凋亡的發(fā)生與基因調(diào)節(jié)有關(guān)。也有人稱為程序性死亡(PCD)。轉(zhuǎn)化細(xì)胞凋亡對(duì)人體的生理平衡和疾病的發(fā)生具有重要意義。電鏡下凋亡的細(xì)胞皺縮，質(zhì)膜完整，胞

ATCC細(xì)胞培養(yǎng)中使用血清的缺點(diǎn)2017/04/01: ATCC細(xì)胞培養(yǎng)中使用血清的缺點(diǎn)血清成分復(fù)雜，雖含許多對(duì)細(xì)胞有利成分，也含有對(duì)細(xì)胞有害的成分，使血清有幾個(gè)明顯的缺點(diǎn)：1.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞，在體內(nèi)狀態(tài)，血清不是它們接觸的生理學(xué)液體，只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清，因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)，血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(成纖維細(xì)胞)同時(shí)抑制另一類細(xì)胞生長(表皮細(xì)胞)。2.血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶，能與來自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌毒素等都會(huì)影

新生大鼠頸上交感神經(jīng)元分散細(xì)胞培養(yǎng)2017/03/30: 干細(xì)胞交感神經(jīng)系統(tǒng)在維持機(jī)體的正常功能和對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性反應(yīng)中起著十分重要的作用。交感神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)特別有助于神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育和可塑性研究，利用體外培養(yǎng)系統(tǒng)可進(jìn)行交感神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)生、死亡、形態(tài)和生化發(fā)育、遞質(zhì)表形的獲得，以及靶組織與傳入纖維的突觸形成的研究。此外，通過體外培養(yǎng)系統(tǒng)可獲得關(guān)于神經(jīng)營養(yǎng)因子、激素，細(xì)胞因子等調(diào)節(jié)交感神經(jīng)元發(fā)育的信息，了解傳入纖維的輸入以及與靶組織的的機(jī)制。1、材料和方法實(shí)驗(yàn)用出生當(dāng)天的昆明種大鼠，在無菌條件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖鑷在解剖顯微鏡下找到氣管兩側(cè)的頸

CO2培養(yǎng)箱如何消毒2017/03/28: 干細(xì)胞CO2培養(yǎng)箱如果是隔水式培養(yǎng)箱可以采用甲酸熏蒸(甲醛與高錳酸鉀反應(yīng)生成甲酸)，然后再用75%酒精擦培養(yǎng)箱內(nèi)壁即可，效果比較好。如果是氣套式的培養(yǎng)箱用75%酒精直接擦培養(yǎng)箱內(nèi)壁即可，或采用隔水式熏蒸，但熏蒸前要先將二氧化碳和溫度探頭封閉好，防止甲酸腐蝕。干細(xì)胞CO2培養(yǎng)箱是實(shí)驗(yàn)室*的儀器，但因其中需放置盛水容器而濕度較高，從而導(dǎo)致霉斑(經(jīng)培養(yǎng)鑒定為絲狀真菌)快速生長而影響工作，有礙觀瞻和可能導(dǎo)致試驗(yàn)樣本污染或院內(nèi)感染擴(kuò)散。雖使用了硫酸銅溶液、75%乙醇溶液或紫外線照射等多種消毒措施，仍然沒有

冷凍細(xì)胞活化操作2017/03/23: 1、ATCC細(xì)胞冷凍細(xì)胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結(jié)晶而對(duì)細(xì)胞造成傷害，導(dǎo)致細(xì)胞之死亡。2、細(xì)胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代，其細(xì)胞生長或特性表現(xiàn)才會(huì)恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。3、材料37℃恒溫水槽、新鮮培養(yǎng)基、無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶、液氮或干冰容器4、ATCC細(xì)胞步驟：(1)操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。(2)自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時(shí)蓋子易松掉。(3)將新鮮培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫，回溫后

冷凍ATCC細(xì)胞活化技術(shù)分析2017/03/21: 冷凍ATCC細(xì)胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結(jié)晶而對(duì)細(xì)胞造成傷害，導(dǎo)致細(xì)胞之死亡。細(xì)胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代，其細(xì)胞生長或特性表現(xiàn)才會(huì)恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。材料37℃恒溫水，新鮮培養(yǎng)基，無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶，液氮或干冰容器步驟：操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時(shí)蓋子易松掉。將新鮮培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。取出冷凍

骨髓瘤細(xì)胞懸液的制備方法分析2017/03/16: zui常用的干細(xì)胞系為SP2/0和NS-1，均來自BALB/c小鼠骨髓瘤。一般在準(zhǔn)備融合前的兩周就應(yīng)開始復(fù)蘇骨髓瘤細(xì)胞，為確保該細(xì)胞對(duì)HAT的敏感性，每3～6個(gè)月應(yīng)用8-氮雜鳥嘌呤篩選一次，以防止細(xì)胞的突變。骨髓瘤細(xì)胞懸液的制備方法如下：1．將剛復(fù)蘇的瘤細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，5%C02,37℃溫箱孵育。每2～3天換液一次，3～5天傳代一次，待細(xì)胞生長穩(wěn)定后方可供細(xì)胞融合用。于融合前48～36小時(shí)，將骨髓細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)（一般按一塊96孔板的融合試驗(yàn)需2～3瓶100m1

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作分析2017/03/14: 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)原理：是將機(jī)體內(nèi)的某組織取出，分散成單細(xì)胞，在人工條件下培養(yǎng)使其生存并不斷生長、繁殖的方法。借助這種方法可以觀察細(xì)胞的分裂繁殖、細(xì)胞的接觸抑制、以及細(xì)胞的衰老，死亡等生命現(xiàn)象。腫瘤細(xì)胞動(dòng)物的選擇：選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎，10－13天齡胚胎含有zui大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個(gè)實(shí)驗(yàn)材料：每組的超凈臺(tái)中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml0.25%胰蛋白酶1瓶；PBS(-

細(xì)胞消化的操作步驟2017/03/09: 1.絕大部分干細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶后，殘留的那些無法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細(xì)胞。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞，連續(xù)這樣傳代，對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37℃消化。比較難消化的細(xì)胞（潤洗方法5min還不能消化），這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育。2.細(xì)胞如何算是消化好了呢？不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙壯移動(dòng)，其實(shí)

死活細(xì)胞測定及細(xì)胞活力測定實(shí)驗(yàn)原理2017/03/07: (1)干細(xì)胞細(xì)胞膜通透性的差異：活細(xì)胞的細(xì)胞膜是一種選擇性膜，對(duì)細(xì)胞起保護(hù)和屏障作用，只允許物質(zhì)選擇性的通過;而細(xì)胞死亡之后，細(xì)胞膜受損，通透性增加。(2)死活細(xì)胞在代謝上的差異：由于活細(xì)胞中新陳代謝的作用，使細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，而死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞，則因它們的無還原能力或還原能力極弱。常見的細(xì)胞染料有：中性紅(細(xì)胞器的專有染料)、臺(tái)盼藍(lán)、甲基藍(lán)、美藍(lán)、熒光素雙醋酸酯(FDA)等。①中性紅染色：常用染料之一，是細(xì)胞器的專有染料。利用干細(xì)胞膜的通透性差異，用來染原生動(dòng)物和顯示動(dòng)植物組織

腫瘤細(xì)胞分離中需要注意的幾個(gè)問題2017/03/02: 1.如果您要做腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)，記住實(shí)驗(yàn)中所用的試劑(分離液，洗滌液等)、器械等都要是無菌消毒的，并注意實(shí)驗(yàn)中的無菌操作。2.離心轉(zhuǎn)速單位及時(shí)間：目前國外的文獻(xiàn)報(bào)道基本上用g為單位，注意g和轉(zhuǎn)速(rpm)的換算。3.離心溫度：有的要求室溫，有的要求4攝氏度。實(shí)驗(yàn)的操作要求盡可能熟練，連貫。4.在用Ficoll分離單個(gè)核腫瘤細(xì)胞(PBMC)時(shí)，通常含有少量的紅細(xì)胞，對(duì)于一般的實(shí)驗(yàn)影響不大，如果實(shí)驗(yàn)要求較高，可采取裂解液(有的需要無菌)，并注意裂解時(shí)間控制，以免影響單個(gè)核細(xì)胞的活性。5.在用Percol

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