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神經(jīng)細胞培養(yǎng)需要注意的操作方法2017/02/21
神經(jīng)細胞培養(yǎng)需要注意的操作方法神經(jīng)細胞（神經(jīng)元）不易培養(yǎng)，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經(jīng)生長因子和膠質(zhì)干細胞因子時，可出現(xiàn)一定程度的分化，長出突起等現(xiàn)象，但很難使之增值。而神經(jīng)膠質(zhì)細胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。人、鼠等腦組織即可用于神經(jīng)膠質(zhì)細胞培養(yǎng)，不僅能獲得生長的膠質(zhì)細胞，也可形成能傳代的二倍體細胞系。一般說來，膠質(zhì)細胞在培養(yǎng)中生長不穩(wěn)定，不易自發(fā)轉(zhuǎn)化，但對外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV4等誘發(fā)轉(zhuǎn)化。1、從手術室無菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后，仔細剝除腦膜、
體外培養(yǎng)的細胞對培養(yǎng)基的基本要求2017/02/16
體外培養(yǎng)的細胞對培養(yǎng)基的基本要求營養(yǎng)成分1.氨基酸：所有ATCC細胞都需要12種必須氨基酸：纈、亮、異亮、蘇、賴、色、苯丙、蛋、組、酪、精、胱氨酸。2.單糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。細胞對葡萄糖的吸收能力zui高，半乳糖zui低。體外培養(yǎng)動物細胞時，幾乎所有的培養(yǎng)基或培養(yǎng)液中都以葡萄糖作為必含的能源物質(zhì)。3.維生素：生物素、葉酸、煙酰胺、泛酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素b12都是培養(yǎng)基常有的成分。4.無機離子與微量元素：細胞生長除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基
貼壁細胞的傳代培養(yǎng)實驗操作方法2017/02/14
貼壁細胞的傳代培養(yǎng)實驗操作方法實驗原理細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本飽和，為使干細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，就必須進行傳代(再培養(yǎng))。傳代培養(yǎng)是一種將細胞種保存下去的方法，同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。實驗材料CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、超凈工作臺、培養(yǎng)瓶、試管、移液管、巴斯德吸管、廢液缸、75％秀精棉球、酒精燈、貼壁細胞株、*培養(yǎng)基(RPMLI640或DMEM)、0.25％胰蛋白酶、PBS液。操作步驟(1)傳代前
細胞毒理試驗原理2017/02/09
細胞毒理試驗原理新的藥物、化妝品、食品添加劑等在投放市場之前，都必須進行大量的腫瘤細胞毒性試驗。細胞毒性主要包括殺死細胞、殺傷細胞、細胞新陳代謝發(fā)生改變等機理，表現(xiàn)為細胞凋亡、細胞壞死、細胞生長繁殖抑制等現(xiàn)象。細胞毒性試驗中，除了觀察測定上述現(xiàn)象外，還可以采集培養(yǎng)細胞在藥物處理前后的代謝變化指標，如對處理細胞和對照細胞的DNA、RNA、蛋白質(zhì)、多肽等特定種類和含量進行測定。用于抗腫瘤藥物與腫瘤細胞株系的體外試驗時，可以屬于細胞藥理試驗。如果針對某些抗腫瘤藥物是否對正常體細胞有毒性的體外試驗，則屬
ATCC細胞培養(yǎng)基操作技術分析2017/02/07
ATCC細胞培養(yǎng)基操作技術分析1.準備一個培養(yǎng)瓶，加入適宜細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，液體體積按照說明書的推薦配置，并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH（CO2）。2.在37℃水浴中或ATCC細胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快，約2分鐘或直到冰晶融化即可。3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進一步的操作均需在無菌操作臺中嚴格無菌條件下進行。4.擰開凍存管的管帽并將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到一個含有9ml推薦培養(yǎng)基的無菌離心管中。通過溫和離心（125×g10min）除去冷凍保護劑（DMSO）。棄去
細胞分化的特點主要可以概括成三點2017/01/24
細胞分化的特點主要可以概括成三點①持久性:干細胞分化貫穿于生物體整個生命進程中,在胚胎期達到zui大程度②普遍性:生物界普遍存在,是生物個體發(fā)育的基礎③穩(wěn)定性和不可逆性:一般來說,分化了的細胞將一直保持分化后的狀態(tài),直到死亡正常情況下，細胞分化是穩(wěn)定、不可逆的。一旦細胞受到某種刺激發(fā)生變化，開始向某一方向分化后，即使v引起變化的刺激不再存在，分化仍能進行，并可通過細胞分裂不斷繼續(xù)下去。但大量科學實驗證明，在植物細胞中高度分化的植物細胞仍具有發(fā)育成完整植株的能力，即植物細胞的性。在動物干細胞中，部
流式細胞實驗中熒光染料如何選擇2017/01/21
流式干細胞實驗中熒光染料如何選擇（1）確定熒光染料本身所適合的流式干細胞儀，需要了解染料的激發(fā)波長和發(fā)射波長、儀器所配制的檢測濾光片和激發(fā)光源。（2）了解熒光素的相對熒光強度：相對熒光強度反映的是熒光素-單抗結合物的亮度，其判斷標準是染色指數(shù)。影響相對熒光強度的因素包括：不同儀器的激光及濾片組合不同，熒光素的相對熒光強度不同；抗體上熒光素分子的多少會影響相對的熒光強度。（3）選擇原則：考慮抗原的密度【高密度表達的抗原可考慮選擇幾乎所有的熒光素；低密度表達的抗原需要可提供較高S/N比值的熒光素，如
如何識別細胞是屬于哪種生物污染2017/01/19
如何識別細胞是屬于哪種生物污染ATCC細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種，分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染。他們在細胞培養(yǎng)中污染的特點如下：1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據(jù)感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。2、支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感
細胞有機物中主要由幾大類分子所組成2017/01/17
細胞有機物中主要由幾大類分子所組成（一）糖類干細胞中的糖類既有單糖，也有多糖。細胞中的單糖是作為能源以及與糖有關的化合物的原料存在。重要的單糖為五碳糖（戊糖）和六碳糖（己糖），其中zui主要的五碳糖為核糖，zui重要的六碳糖為葡萄糖。葡萄糖不僅是能量代謝的關鍵單糖，而且是構成多糖的主要單體。多糖在細胞結構成分中占有主要的地位。細胞中的多糖基本上可分為兩類：一類是營養(yǎng)儲備多糖；另一類是結構多糖。作為食物儲備的多糖主要有兩種，在植物細胞中為淀粉（starch），在動物細胞中為糖元（glycogen）
檢測干細胞四唑鹽比色法試驗原理2017/01/12
檢測干細胞四唑鹽比色法試驗原理此法的原理是：活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍紫色結晶物，并沉積在細胞中，而干細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的藍紫色結晶物，用酶聯(lián)免疫檢測，以在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反應活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結晶物形成的量與細胞數(shù)成正比。●0.25%胰蛋白酶消化細胞使其成為單細胞，用含0.1%胎牛血清的RPMI培養(yǎng)基配成1x10^9個/L的但細胞懸液，將細胞接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100ul?！駥⑴囵B(yǎng)
腫瘤細胞培養(yǎng)的凍存和注意事項2017/01/10
腫瘤細胞培養(yǎng)的凍存和注意事項1.腫瘤細胞應遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37-37。5度，取出凍存的細胞迅速放入后將細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化。2.在無菌臺內(nèi)將*培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶內(nèi)，約5ml左右，然后用無菌吸管從凍存管內(nèi)取出細胞，置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃，使細胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3.將貼壁細胞消化后離心收集，懸浮細胞直接離心收集，以*培養(yǎng)基或胎牛血清重懸細胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍。次日保
腫瘤細胞的結構和繁殖2017/01/05
腫瘤細胞的結構和繁殖腫瘤細胞通常很小，需用顯微鏡才能見到，但也有肉眼可見的大型卵細胞。細胞的形狀因其生長、分化和功能的不同而有很大變化，有卵圓形、柱形、鱗形、梭形、樹枝形等。真核細胞的構造主要可分為細胞核、細胞質(zhì)和細胞膜三部分。細胞膜之內(nèi)的生活物質(zhì)包括細胞核和細胞質(zhì)統(tǒng)稱為原生質(zhì)?；罴毎幕瘜W組成主要是水，約占90%，其余為蛋白質(zhì)、核酸、脂類、糖類以及少量無機物質(zhì)。在細胞質(zhì)中有一些稱為細胞器的結構，如線粒體、溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等。植物細胞和動物細胞相比稍有不同，植物細胞外面有細胞壁，細胞質(zhì)內(nèi)
ATCC細胞培養(yǎng)基不同之處2017/01/03
培養(yǎng)基基礎培養(yǎng)基絕大多數(shù)是建立在平衡鹽溶液（BSS）基礎上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。zui廣泛應用的基礎培養(yǎng)基是MEM，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。目前科研市場經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應用zui廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于ATCC細胞的培養(yǎng)。1.MEM是由基礎培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來的，其中增加了組分的范圍及濃度。2.改良的基礎培養(yǎng)基培養(yǎng)基也就是我們所說的DMEM培養(yǎng)
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