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上海研生實業(yè)有限公司
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細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)觀察和檢定2018/05/22
細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)觀察及鑒定:細(xì)胞換液后直接在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)及生長特征,并作相差攝影,同時進行常規(guī)HE染色觀察并攝片。鑒定采用DAB免疫組織化學(xué)法,在6孔培養(yǎng)板中放置載玻片,在玻片上植入2ml含有1×106的細(xì)胞懸液,待細(xì)胞貼壁后,取出載玻片,放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS沖洗3次,每次2min,滴加3%H2O2室溫孵育10min,PBS沖洗3次,每次2min,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相關(guān)抗原多抗工作液,放入濕盒內(nèi)4℃過夜,同時另一蓋玻片不加一抗作陰
腫瘤細(xì)胞如何進行傳代?2018/05/17
腫瘤細(xì)胞是科研實驗中常用到的細(xì)胞,當(dāng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞達到90%融合時,需要對細(xì)胞進行傳代培養(yǎng)。首先培養(yǎng)瓶的準(zhǔn)備:用纖維粘連蛋白(BPF,貨號#8248)包被培養(yǎng)瓶,包被濃度為2ug/cm2,包被時間為4度過夜或37度一小時。將培養(yǎng)基(ECM,貨號#1001)、胰酶/EDTA消化液(T/S,貨號#0103)、胰酶中和液(TNS,貨號#0113)和無鈣鎂離子的磷酸鹽緩沖液(DPBS,貨號#0303),溫度回復(fù)至室溫,我們不推薦用37°C水浴加熱試劑和培養(yǎng)基。棄去原培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基,用10mlDPBS沖
原代細(xì)胞因子中全血的標(biāo)本處理方法2018/05/15
原代細(xì)胞因子中全血的標(biāo)本處理方法分析:我們針對全血:使用肝素鈉抗凝的真空采血管采血,不易采用肝素鋰、EDTA和ACD抗凝劑,血樣在8小時內(nèi)分析,超過8小時會導(dǎo)致活性的損失,一般細(xì)胞因子陽性細(xì)胞會減少5%。如不能在8小時之內(nèi)檢測,應(yīng)將真空采血管水平室溫放置。自身血漿中外周血單個核細(xì)胞(PBMCs):使用肝素鈉抗凝的采血后,分離PBMCs,24小時內(nèi)分析。組織培養(yǎng)基中的外周血單個核細(xì)胞(PBMCs):用Ficoll分離PBMCs,將細(xì)胞重懸于含10%熱滅活胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培養(yǎng)基
細(xì)胞系如何分配任務(wù)并解決問題2018/05/10
從生物學(xué)角度了解不同類型細(xì)胞系如何一起工作是一個極大的未知數(shù)。例如,我們不知道大腦中每種細(xì)胞的數(shù)量,甚至連腦細(xì)胞的類型都還處于持續(xù)爭論狀態(tài)。一個恰當(dāng)?shù)睦碚摽蚣?,可以集中所有的實驗?shù)據(jù)和觀點,共同用于理解生物的復(fù)雜性。1950s,人們開發(fā)了信息理論,用于研究如何用有效的方式發(fā)送信息,減少錯誤。這個理論也與大腦神經(jīng)元的相互交流有關(guān)。Sharpee利用信息學(xué)理論識別支配生物復(fù)雜性的基本定律,用它來預(yù)測系統(tǒng)內(nèi)總共有多少種細(xì)胞,以及這些細(xì)胞應(yīng)該如何協(xié)作。2015年,研究人員們將他們的這個想法發(fā)表于《PNA
細(xì)胞株計數(shù)的難題與解決方案2018/05/08
細(xì)胞株和病毒的放大培養(yǎng)面臨挑戰(zhàn)。當(dāng)需要量增加千倍時,細(xì)胞培養(yǎng)瓶對于工業(yè)規(guī)模是不可行的。微載體為生物反應(yīng)器中貼壁細(xì)胞的生長提供了方便,微載體充當(dāng)貼壁細(xì)胞可附著的支架,允許它們增殖,而生物反應(yīng)器使細(xì)胞-微載體復(fù)合體自由懸浮在培養(yǎng)基中。因此,貼壁細(xì)胞也可以像懸浮細(xì)胞那樣生長,從而簡化了放大培養(yǎng),并允許利用現(xiàn)有的資源用于過程優(yōu)化和。傳統(tǒng)方法的微載體的細(xì)胞計數(shù)耗時耗力,且計數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確,需要離心樣品、PBS重懸、胰蛋白酶消化細(xì)胞和臺盼藍(lán)或者結(jié)晶紫染色等多個步驟來計數(shù)在微載體上生長的細(xì)胞。細(xì)胞計數(shù)影響因素:
原代細(xì)胞實驗室檢測方法2018/04/26
原代細(xì)胞實驗室檢測(一)包涵體的檢測。1.血片及白細(xì)胞涂片制備采集的抗凝血標(biāo)本盡快用血球?qū)油蒲?,待干燥后冷丙酮固?0min;或提取抗凝血中的白細(xì)胞并進行涂片,待干燥后冷丙酮固定10min。2.染色通常采用瑞氏(Wright)染色法、姬氏(Giemsa)染色法及瑞-姬混合染色法。有條件的實驗室,可使用美國CDC推薦的染色方法。3.染液配置方法(1)瑞-姬染液:取瑞氏染料和姬氏染料各0.5g,以甲醇研溶,加甲醇500ml保存,每天搖勻1次,1周后可使用。(2)改良McDonald法瑞-姬染色劑:
原代細(xì)胞增殖生長數(shù)值的步驟2018/04/17
測定原代細(xì)胞增長數(shù)值常用zui簡便的方法。一般過程為1.接種21孔/24孔板細(xì)胞(如用培養(yǎng)瓶時則21瓶)。2.分7組,每組3孔(或瓶),培養(yǎng)一周(7天),期間逐日檢測一組,計數(shù)。3.把7天中的細(xì)胞數(shù)值繪成圖,即為細(xì)胞生長曲線。實驗材料細(xì)胞試劑、試劑盒胰蛋白酶儀器、耗材吸管實驗步驟1.懸液制備取待測生長狀態(tài)良好細(xì)胞,增長至接近匯合時,向培養(yǎng)瓶內(nèi)加1ml升0.25%胰蛋白酶液,37℃溫箱中消化,至細(xì)胞接近脫離瓶壁前吸出消化液、加新的培養(yǎng)液、輕吹打制備成細(xì)懸液、計數(shù);2.接種向每孔中接種等量細(xì)胞,置溫
保持原代細(xì)胞其多能性的蛋白質(zhì)的方法2018/04/12
蛋白質(zhì)Tet能幫助原代細(xì)胞保持多能性。Zhang研究組分析了Tet1在整個小鼠胚胎干細(xì)胞基因組中的存留時間。他們發(fā)現(xiàn)Tet1采用雙管齊下的辦法維持小鼠胚胎干細(xì)胞的狀態(tài)。一方面,Tet1可對分化起重要作用的基因保持"沉默";另一方面Tet1也可激活多能性基因。研究組著重于研究Tet1催化反應(yīng)產(chǎn)物-5羥甲基胞/嘧啶。5羥甲基胞嘧啶是胞嘧啶的修改版-C在四個主要的DNA堿基:A、T、G、C。5羥甲基胞嘧啶和5甲基胞嘧啶分別被稱為是DNA第五、第六個堿基,但是5羥甲基胞嘧啶是zui近才被發(fā)現(xiàn),科學(xué)家對此
如何判斷原代細(xì)胞污染了?2018/04/10
狀態(tài)1:原代細(xì)胞培養(yǎng)液變渾濁了,經(jīng)常見到是米湯樣,黃色液體,一般認(rèn)為細(xì)菌污染。狀態(tài)2:細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)含有能動的小黑點,一般認(rèn)為是黑膠蟲。狀態(tài)3:胞培養(yǎng)基清亮,但是能看到飄在培養(yǎng)液帶有毛毛的白色的菌狀物質(zhì),有可能就是真菌感染。策略:細(xì)胞污染了就直接扔了,還得把培養(yǎng)箱用酒精棉球擦干凈,并用紫外照射半小時,防止再次污染。同時建議細(xì)胞培養(yǎng)時,在培養(yǎng)基中加入青鏈霉素(尤其是初學(xué)者)細(xì)胞培養(yǎng)過程中,細(xì)胞周圍包括細(xì)胞上有很多小黑點,怎么辦?策略1:用胰酶消化下來后,低速短時間離心,不同實驗室不一樣,如果平時是1
腫瘤細(xì)胞活力評估難度低2018/04/08
傳統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)主要是通過顯微鏡下形態(tài)學(xué)變化以及傳代培養(yǎng)周期的變化預(yù)估細(xì)胞生長生存狀態(tài)。這種主觀判斷既無法量化,也無法進行統(tǒng)計學(xué)分析。因此,目前對細(xì)胞存活質(zhì)量的判斷并沒有準(zhǔn)確、客觀的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),并且對體外培養(yǎng)細(xì)胞的存活質(zhì)量控制往往被科研工作者們“忽略”,從而導(dǎo)致實驗結(jié)果的不穩(wěn)定。體外細(xì)胞的有效培養(yǎng)新概念——“細(xì)胞質(zhì)控”。通過細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖及DNA損傷五方面對細(xì)胞生長生存狀態(tài)進行的監(jiān)控。在這五個方面中,影響zui大的便是細(xì)胞活力,下面咱們專門來談一談細(xì)胞活力如何判斷。在體外
原代細(xì)胞中的核糖核酸可分為哪些種類?2018/04/03
根據(jù)原代細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的不同,細(xì)胞中的RNA可分為三類:即信使(mRNA)、轉(zhuǎn)運RNA(tRNA)和核糖體RNA(rRNA)。mRNA以DNA為模板,在RNA聚合酶的催化下,按堿基互補原則,從分子的5,末端向3,末端方向在細(xì)胞核內(nèi)合成,因此,mRNA分子能準(zhǔn)確地傳遞DNA鏈上的遺傳信息。合成后的mRNA經(jīng)核孔進入細(xì)胞質(zhì),并與核糖體結(jié)合,將單核糖體連成多核糖體。由于細(xì)胞內(nèi)的基因和基因組很多,而mRNA是根據(jù)要表達的基因或基因組合成的,因此mRNA種類復(fù)雜多樣。tRNA是RNA中zui小的一種,其3
原代細(xì)胞培養(yǎng)新技巧2018/03/29
研究人員發(fā)現(xiàn)了一個能提高人類原代細(xì)胞,以及誘導(dǎo)多能干細(xì)胞iPS三倍數(shù)量的新方法,而且這種方法還無需一般培養(yǎng)方法中都需要的小鼠飼養(yǎng)細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞和iPS細(xì)胞由于其杰出的再生能力,吸引了眾多科學(xué)家,這些多能干細(xì)胞是許多疾病的新希望,比如帕金森癥,阿茲海默癥等,也是篩選信號的新方向,同時這些細(xì)胞還能為糖尿病,神經(jīng)或其它組織損傷提供移植治療細(xì)胞。但是這些技術(shù)應(yīng)用需要百萬,甚至千萬的細(xì)胞,目前的培養(yǎng)方法無法達到這一需求。而的這篇文章在之前研究的基礎(chǔ)上——幫助研究人員了解了*的表面化合物,利用了一個簡單的
如何對原代細(xì)胞進行保存和培養(yǎng)?2018/03/27
原代細(xì)胞形成的單層細(xì)胞匯合以后,需要進行分離培養(yǎng),否則細(xì)胞會因生成空間不足或由于細(xì)胞密度過大引起營養(yǎng)枯竭,都將影響細(xì)胞的生長,這一程序常稱為傳代或傳代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)在傳代時即為細(xì)胞系,能連續(xù)培養(yǎng)下去的為連續(xù)細(xì)胞系;不能連續(xù)培養(yǎng)的為有限細(xì)胞系。通常,傳代培養(yǎng)是指擴大培養(yǎng),也就是將一份細(xì)胞一分為二或者一分為三進行培養(yǎng)等。但嚴(yán)格說來,不論稀釋與否,將細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移或移植到另一個培養(yǎng)瓶即稱為傳代或傳代培養(yǎng)??梢岳斫猓谌魏螘r候,細(xì)胞從一個瓶子接種到另一個瓶子時總會丟失一部分,因此,在客觀上細(xì)胞必定
腫瘤細(xì)胞增殖檢測:3H同位素滲入法實例2018/03/22
一、原理腫瘤細(xì)胞在有絲分裂原PHA、ConA等的刺激下,產(chǎn)生增殖反應(yīng),DNA和RNA合成明顯增加,如在培養(yǎng)液中加入3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR),則可被轉(zhuǎn)化中的細(xì)胞攝入。測定標(biāo)記淋巴細(xì)胞的放射強度可反映淋巴細(xì)胞增殖的程度。二、儀器和材料RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液、小牛血清、2-巰基乙醇(2-ME)、青霉素、鏈霉素、刀豆蛋白A(ConA)、Hank's液、PBS緩沖液(pH7.2-7.4)、3H-TdR、閃爍液[2,5-二苯基惡唑(PPO)0.5g、1,4-雙-(5-苯基惡唑基)-苯(POP
細(xì)胞株雙重效果2018/03/20
在細(xì)胞株早期的研究中,SohailTavazoie實驗室已研究了一個被稱作ApoE的基因及其在抑制黑色素瘤從它的原發(fā)性部位擴散到其他器官中的作用。他們已發(fā)現(xiàn)增加ApoE表達通過破壞癌細(xì)胞浸潤健康組織和長出血管的能力來導(dǎo)致下降的腫瘤轉(zhuǎn)移。當(dāng)這些研究人員發(fā)現(xiàn)了激活A(yù)poE表達的藥物在那些具有健康免疫系統(tǒng)的小鼠中比在那些沒有健康免疫系統(tǒng)的小鼠中能夠更加有效時,事情就開始變得更加有趣了。除了抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用之外,這些藥物似乎通過降低這些小鼠中的MDSC水平來影響免疫反應(yīng),并因此激活抗腫瘤的T細(xì)胞,隨后這些
原代細(xì)胞極化過程2018/03/13
原代細(xì)胞極性對于細(xì)胞的分化、發(fā)育與功能發(fā)揮起著舉足輕重的作用,其破壞與腫瘤生成及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。細(xì)胞極性建立的共性,是一些極性蛋白復(fù)合物被特異地招募到膜區(qū)域,并發(fā)生顯著的局部聚集,然而具體機制仍未闡明。研究人員發(fā)現(xiàn),Numb的PTB結(jié)構(gòu)域以一種非典型的模式特異性識別Pon中的重復(fù)模序,這種多位點結(jié)合誘導(dǎo)該復(fù)合物發(fā)生液-液相變(liquid-liquidphasetransition,LLPT)分離,在體外和細(xì)胞中能夠自發(fā)組裝形成致密的無膜液相結(jié)構(gòu)。而這種相變液滴可以被NumbPTB的競爭多肽破壞并
原代細(xì)胞生長的檢查方法2018/03/08
1.原代細(xì)胞直接計數(shù)法是zui簡單的檢測細(xì)胞生長的方法。計數(shù)細(xì)胞一般利用臺盼藍(lán)(錐蟲藍(lán)染色,臺盼藍(lán)(錐蟲藍(lán))不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不著色。而死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增高,可使染料進入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色。因此,鏡下未染色細(xì)胞認(rèn)為是活細(xì)胞,而染色細(xì)胞認(rèn)為是死亡細(xì)胞。經(jīng)典的細(xì)胞計數(shù)常用到血細(xì)胞計數(shù)板。細(xì)胞消化成單個細(xì)胞后,將細(xì)胞懸液加入血蓋片和計數(shù)板之間的空隙中,通常我們計數(shù)計數(shù)板的四角大方格(每個大方格又分16個小方格)內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。計完數(shù)后,需換算出每ml懸液中的細(xì)胞數(shù)。由于計數(shù)板中
原代細(xì)胞與真核細(xì)胞之間的差異2018/03/06
原代細(xì)胞與真核細(xì)胞的不同如下:細(xì)胞壁上的差異、細(xì)胞核與染色體水平不同、細(xì)胞器水平的差異。細(xì)胞是除病毒以外的生物體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。在種類繁多的細(xì)胞世界中,根據(jù)其進化地位、結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度等方面的差異,可以將細(xì)胞分為原核細(xì)胞和真核細(xì)胞兩大類。原核細(xì)胞沒有典型的細(xì)胞核,由原核細(xì)胞構(gòu)成的生物是原核生物;真核細(xì)胞有細(xì)胞核,由真核細(xì)胞構(gòu)成的生物是真核生物,但二者的區(qū)別還不僅如此,現(xiàn)就高中階段所學(xué)知識,將二者之間的區(qū)別歸納如下。1.細(xì)胞壁上的差異原核細(xì)胞細(xì)胞壁的成分主要是肚聚糖和胞壁酸,還有脂多糖、脂蛋白
細(xì)胞株年齡實現(xiàn)長壽愿望2018/03/01
細(xì)胞株科學(xué)家開發(fā)出了一種“簡單而廉價”的AI算法,可以計算出人們的生理年齡,并驗證某些生活方式的改變和藥物是否能提高人們長壽和健康的機率。這一算法被稱為“Aging.AI”,根據(jù)人們的血液樣本,已經(jīng)為13萬人提供了準(zhǔn)確的結(jié)果。由人工智能公司InsilicoMedicine牽頭的一項新研究稱,AI技術(shù)可以確定一個人罹患癌癥和心臟病等與年齡有關(guān)的疾病的風(fēng)險。哥本哈根大學(xué)健康老齡化研究中心教授莫滕·謝畢努森(MortenScheibyeKnudsen)博士稱:“AI在預(yù)測人的年齡方面,就像你看著一個人
細(xì)胞系的黏附抑制作用2018/02/27
細(xì)胞系利用培養(yǎng)的上皮細(xì)胞和熒光染色法進一步對3種不同黏附素分子以不同方式免疫后抗體的黏附抑制效果進行了比較,該研究對于進一步利用黏附素分子開展SA引起的奶牛乳腺炎的生物防治提供了基礎(chǔ)實驗數(shù)據(jù)。黏附素分子是SA定居、繁殖和感染宿主的先決條件。除介導(dǎo)黏附外,其還賦予該菌逃避宿主的防御。以往多項研究均表明,阻斷和抑制SA的黏附功能可部分保護實驗動物抵抗該菌的感染。姜曉娟、Li等對ClfA進行原核表達并免疫家兔,抗血清可以阻止A黏附膠原蛋白,并具有吞噬調(diào)理作用。張鑫等證明了EfB免疫家兔后誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異
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