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原代細(xì)胞分選的步驟2018/02/24: 原代細(xì)胞當(dāng)經(jīng)熒光染色或標(biāo)記的單細(xì)胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動(dòng)室內(nèi)。流動(dòng)室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動(dòng)下，細(xì)胞被排成單列，以一定速度從流動(dòng)室噴口噴出。在流動(dòng)室的噴口上配有一個(gè)超高頻的壓電晶體，充電后振動(dòng)，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測(cè)細(xì)胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)過(guò)帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時(shí)，在高壓電場(chǎng)的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中，沒(méi)有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。流式細(xì)胞分選的特點(diǎn)1.少量細(xì)胞分選時(shí)，流式細(xì)胞分選度高（99%以

細(xì)胞株的染色體進(jìn)行復(fù)制的方法2018/02/10: 細(xì)胞株的有絲分裂（mitosis）過(guò)程中，母細(xì)胞的染色體進(jìn)行復(fù)制，隨后兩個(gè)包含微管的紡錘體與這些染色體相連，將每個(gè)染色體的兩份拷貝相互分離并拉向相反的方向。計(jì)時(shí)器（Timer），可能是實(shí)驗(yàn)室里zui不起眼但又無(wú)法缺少的設(shè)備。有沒(méi)有開了反應(yīng)半天才突然驚覺(jué)沒(méi)有按下Timer的經(jīng)歷？做實(shí)驗(yàn)少不了計(jì)時(shí)器，細(xì)胞分裂也一樣少不了計(jì)時(shí)器。分裂是zui基本的細(xì)胞活動(dòng)之一，人從一個(gè)受精卵變成多細(xì)胞團(tuán)，再到胚胎、幼兒直到成年，中間經(jīng)歷了無(wú)數(shù)次細(xì)胞的分裂，可謂生命不息，細(xì)胞分裂不止。細(xì)胞分裂形成新器官、新組織，分裂產(chǎn)

實(shí)現(xiàn)原代細(xì)胞的分離的技術(shù)方法2018/02/08: 原代細(xì)胞是一種在功能水平上對(duì)單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測(cè)手段，可以每秒鐘分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù)。細(xì)胞分選的原理當(dāng)經(jīng)熒光染色或標(biāo)記的單細(xì)胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動(dòng)室內(nèi)。流動(dòng)室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動(dòng)下，細(xì)胞被排成單列，以一定速度從流動(dòng)室噴口噴出。在流動(dòng)室的噴口上配有一個(gè)超高頻的壓電晶體，充電后振動(dòng)，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測(cè)細(xì)胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)過(guò)帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時(shí)，在高壓電場(chǎng)的作用下偏

腫瘤細(xì)胞自噬出現(xiàn)的時(shí)間與強(qiáng)度2018/02/06: 腫瘤細(xì)胞自噬作為一項(xiàng)真核生物*的生理現(xiàn)象,開始應(yīng)用于不同的領(lǐng)域。澳大利亞學(xué)者通過(guò)對(duì)果蠅自噬信號(hào)通路中上下游基因的敲除,確定了自噬在果蠅程序性清除中腸中的重要作用。自噬與癌癥之間的一直是眾多學(xué)者關(guān)注的焦點(diǎn),美國(guó)學(xué)者通過(guò)在小鼠中突變自噬上游調(diào)節(jié)基因beclin1,證實(shí)當(dāng)beclin1為雜合子時(shí),小鼠體內(nèi)的腫瘤增長(zhǎng)更迅速,過(guò)表達(dá)beclin1則會(huì)抑制腫瘤的生長(zhǎng)。這些研究闡明了自噬的新功能,開辟了新的研究方向,也給了我們將自噬運(yùn)用于低溫脅迫研究的靈感。本文對(duì)自噬的特異基因LC3進(jìn)行標(biāo)記,通過(guò)檢測(cè)自噬小體

原代細(xì)胞保持Z佳狀態(tài)的方法2018/02/01: 隨著原代細(xì)胞機(jī)體衰老，血液干細(xì)胞也并不太會(huì)*地發(fā)揮自身的功能了，這就會(huì)導(dǎo)致65歲以上的人群機(jī)體抵御感染疾病的能力下降，同時(shí)還會(huì)增加這些人群患血液癌癥的風(fēng)險(xiǎn)。老年人通常并不適合進(jìn)行骨髓移植用來(lái)治療多種血液疾病，這是因?yàn)楣撬枰浦矔?huì)給老年人帶來(lái)較高程度的并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)，在一個(gè)成年人體內(nèi)一般有充足的干細(xì)胞來(lái)重建造血系統(tǒng)，但對(duì)于老年人而言這種功能或許非常受限，因此支持血液干細(xì)胞恢復(fù)的策略或許就能幫助擴(kuò)大骨髓移植受體患者的范圍。因此，并不像是單純的管道系統(tǒng)，我們可以將血管細(xì)胞視為沿著自行車賽道排隊(duì)的活躍支持者，

原代細(xì)胞核心成分2018/01/30: 原代細(xì)胞核接頭蛋白LDB1是多蛋白轉(zhuǎn)錄復(fù)合體中的一個(gè)核心成分。Li等研究發(fā)現(xiàn),在小鼠胚胎和成體造血干細(xì)胞中LDB1起到關(guān)鍵作用。在造血干細(xì)胞和前體細(xì)胞中敲除該基因會(huì)造成一些維持多能性相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄下調(diào),ChIP-Seq結(jié)果顯示,LDB1形成的復(fù)合體結(jié)合在這些基因的啟動(dòng)子區(qū)域,暗示LDB1維持造血干細(xì)胞中起核心作用。多能造血前體細(xì)胞是一種干細(xì)胞樣細(xì)胞,表達(dá)各種基因,且有分化成包括免疫系統(tǒng)細(xì)胞在內(nèi)的大量不同類型血細(xì)胞的能力。Zhang等利用ChIPSeq和RNA-seq技術(shù)在小鼠全基因組內(nèi)找出造血前

腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染要素2018/01/25: 腫瘤細(xì)胞使用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染來(lái)蛋白瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)蛋白以往為了獲得蛋白質(zhì)的高表達(dá)產(chǎn)量，必須先轉(zhuǎn)染細(xì)胞，然后挑選一個(gè)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細(xì)胞系進(jìn)行蛋白的擴(kuò)增和富集。而挑選這樣一個(gè)細(xì)胞系往往需要花費(fèi)數(shù)周甚至數(shù)月的時(shí)間，這既可能是由于試劑的細(xì)胞毒性也可能是由于轉(zhuǎn)染的低效率。如果是因?yàn)檗D(zhuǎn)染試劑具有細(xì)胞毒性，那么只有少數(shù)細(xì)胞能夠存活，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)的產(chǎn)量很低。而如果是因?yàn)檗D(zhuǎn)染成功的細(xì)胞太少，那么那些未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞生長(zhǎng)速度大大超過(guò)轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞，其結(jié)果同樣也只能產(chǎn)生少量的目標(biāo)蛋白。使用一種溫和的可以轉(zhuǎn)染大多數(shù)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑，就可獲

原代細(xì)胞的四大特點(diǎn)2018/01/23: 1、生命的起源原代細(xì)胞人體起源一個(gè)單細(xì)胞受精卵(*代干細(xì)胞)，經(jīng)歷卵裂(干細(xì)胞持續(xù)擴(kuò)增，增加細(xì)胞數(shù)量)、胚層出現(xiàn)(干細(xì)胞開始分化出功能細(xì)胞)、組織器官形成(功能細(xì)胞的有序排列)及胚后發(fā)育這樣一個(gè)連續(xù)過(guò)程。2、維持人體動(dòng)態(tài)平衡的種子細(xì)胞人體通過(guò)干細(xì)胞增殖和分化來(lái)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞更新。成年并不意味著細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化的結(jié)束，而仍然存在著受調(diào)控的組織更新過(guò)程。在一些組織中，如骨髓、表皮等，新細(xì)胞可不斷地產(chǎn)生，以補(bǔ)充因分化而衰老、死亡的細(xì)胞。干細(xì)胞的增殖保持著機(jī)體內(nèi)細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡。3、干細(xì)胞功能表達(dá)體現(xiàn)出生命發(fā)

勿怕原代細(xì)胞消化過(guò)度2018/01/18: 對(duì)于初學(xué)者而言，養(yǎng)原代細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有任何好處，特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(zhǎng)的因子在其周圍，形成有利于生長(zhǎng)的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經(jīng)常可以看到新手一天到晚都在看細(xì)胞，細(xì)胞老是長(zhǎng)不好。老手細(xì)胞一扔好幾天不管，細(xì)胞瘋長(zhǎng)。在傳代的時(shí)候，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過(guò)度，早早地終止消化。細(xì)胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈，

細(xì)胞株是否會(huì)受到免疫排斥2018/01/11: 研究人員發(fā)現(xiàn)相對(duì)于細(xì)胞株形成的畸胎瘤，由iPS形成的畸胎瘤中的某些基因呈高水平表達(dá)。其中的Zg16及Hormad1兩個(gè)基因的異常表達(dá)可直接導(dǎo)致遭受特異的免疫攻擊。研究人員表示這些基因在正常情況下處于關(guān)閉狀態(tài)直至胚胎開始對(duì)自身組織形成免疫耐受為止，如此就能確保它們不會(huì)被宿主所識(shí)別。而iPS的重編程程序有可能改變了這些基因的正常表達(dá)。長(zhǎng)久以來(lái)，科學(xué)家們?cè)陂_展iPS研究的過(guò)程中把iPS衍生獲得的終末分化細(xì)胞例如神經(jīng)細(xì)胞或心肌細(xì)胞移植到小鼠體內(nèi)，證實(shí)它們不會(huì)引起免疫排斥（但事實(shí)上其中的大部分實(shí)驗(yàn)都是在缺

何促進(jìn)原代細(xì)胞生長(zhǎng)并抑制分化？2018/01/09: 原代細(xì)胞為了保持hESC存活且具有多能性，研究人員通常在滋養(yǎng)層細(xì)胞（也就是一層小鼠胚胎成纖維細(xì)胞）上培養(yǎng)，或者在微載體上成簇培養(yǎng)。但是在這些基質(zhì)上培養(yǎng)干細(xì)胞是相當(dāng)昂貴的，而且培養(yǎng)物不能在很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持未分化狀態(tài)，盡管所有必需的生長(zhǎng)因子都存在。這種培養(yǎng)基能夠在無(wú)滋養(yǎng)層的條件下長(zhǎng)時(shí)間維持神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)和正常表型。在研究過(guò)程中，研究人員注意到并非所有細(xì)胞都分化了。他們懷疑是培養(yǎng)基的選擇導(dǎo)致了這種現(xiàn)象，于是他們開始集中精力研究培養(yǎng)基如何促進(jìn)干細(xì)胞生長(zhǎng)并抑制分化。使用這種新的培養(yǎng)基，研究小組檢驗(yàn)了三種不同

細(xì)胞系的物理性質(zhì)2018/01/05: （１）細(xì)胞系的密度單位體積中粉塵的質(zhì)量稱為粉塵的密度，單位為ｋｇ／ｍ３或ｇ／ｃｍ３。由于粉塵產(chǎn)生的情況不同，測(cè)試條件不同，獲得的密度值亦不同。所以一般將粉塵的密度分為真密度和堆積密度等不同的概念。以真實(shí)體積所得的密度稱為粉塵的真密度，常用符號(hào)ρｐ表示。粉塵在自然堆積狀態(tài)下，顆粒之間和顆粒內(nèi)部都存在空隙。以堆積體積求得的密度稱為粉塵的堆積密度，常用符號(hào)ρｂ表示。對(duì)于一定種類的粉塵，其真密度為一定值，而其堆積密度則隨空隙率（是指粉塵粒子間的空隙體積與堆積粉塵的總體積之比值，常用符號(hào)ε表示）而變化。粉

腫瘤細(xì)胞調(diào)控元件的分析2018/01/03: 腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法不同，對(duì)轉(zhuǎn)染結(jié)果影響很大。常見的轉(zhuǎn)染方法有：1.磷酸鈣法：該方法利用磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞原理得到瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染結(jié)果，操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差，不可用于原代細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。2.DEAE-右旋糖苷法：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞，可用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，方法相對(duì)簡(jiǎn)便、結(jié)果可重復(fù)但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用。3.電穿孔法：利用高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，DNA通過(guò)膜上形成的小孔導(dǎo)入。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染均適用。適用性廣但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)

細(xì)胞株分離培養(yǎng)關(guān)鍵因素2017/12/28: 近期根據(jù)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)了細(xì)胞株分離培養(yǎng)的2個(gè)關(guān)鍵因素。1、組織的活性：如果我們?nèi)〉亩际菈乃赖慕M織或者結(jié)締組織，我相信任何方法都不可能分離出來(lái)活的細(xì)胞的。另外，取完的組織要冷藏存放，并且越早分離越好，在24h內(nèi)，zui久不要超過(guò)48h。2、組織的消化：在組織消化前，組織剪的越碎越好（1mm3左右為宜），細(xì)胞株組織的大小決定了組織的消化時(shí)間，不同組織消化時(shí)間差別較大：例如肺癌在2h-2.5h；食管癌在1個(gè)多小時(shí)。四lv對(duì)苯二甲suan標(biāo)準(zhǔn)品1000mg/L于甲醇,1ml丁草胺CDGG-031003-031

腫瘤細(xì)胞的比率及分選后的回收率2017/12/26: 在進(jìn)行腫瘤細(xì)胞分選前，保留一小部分起始樣本是非常重要的。這樣有助于評(píng)估分選前樣品中目標(biāo)細(xì)胞的比率及分選后該細(xì)胞的回收率。各種組織和細(xì)胞來(lái)源中的細(xì)胞比率可以根據(jù)已發(fā)表的數(shù)據(jù)來(lái)估算。然而，實(shí)際操作中，細(xì)胞比率可能因供體而異，并且取決于是否來(lái)自正常的、患病的還是轉(zhuǎn)基因的樣本。細(xì)胞回收率：計(jì)算分選后的細(xì)胞回收率是評(píng)估實(shí)驗(yàn)是否成功的寶貴工具。需要準(zhǔn)確地得到以下四個(gè)數(shù)據(jù)：分選前起始樣本中的細(xì)胞總數(shù)*目標(biāo)細(xì)胞在起始樣本中的比率*分選后的細(xì)胞總數(shù)分選后目標(biāo)細(xì)胞的純度使用以下公式計(jì)算細(xì)胞回收率：回收率=[(3)x

細(xì)胞系自然分化轉(zhuǎn)錄因子控制2017/12/21: 細(xì)胞系自然分化生成特定細(xì)胞的過(guò)程由轉(zhuǎn)錄因子控制，這些轉(zhuǎn)錄因子直接控制了基因表達(dá)。因此該研究團(tuán)隊(duì)系統(tǒng)地研究了不同的轉(zhuǎn)錄因子組合對(duì)干細(xì)胞分化為GABA分泌神經(jīng)元的影響。zui終他們發(fā)現(xiàn)了三種關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)方法，他們只需要35天就可以將超過(guò)90%的干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為GABA分泌神經(jīng)元。就連Sun本人都對(duì)這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果感到震驚：“這些誘導(dǎo)出來(lái)的細(xì)胞就像真正成熟的神經(jīng)元一樣?！彼退耐略谶@些細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了不同亞型的GABA分泌神經(jīng)元，它們的分子及電生理學(xué)特征與自然發(fā)育的神經(jīng)元幾乎*一致。事實(shí)上，

原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟2017/12/14: 原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)需要注意以下幾點(diǎn)：1、DNA的量：Lipofectamine2000=1：2~32、細(xì)胞密度大約占培養(yǎng)板的80%左右，轉(zhuǎn)染。3、轉(zhuǎn)染期間不要加抗生素，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。步驟如下：以24孔培養(yǎng)板為例1、轉(zhuǎn)染前一天細(xì)胞換新的培養(yǎng)基2、制備DNA-Lipofectamine2000復(fù)合物，如下:a、用50ul無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA（0.8g），輕輕混勻；b、Lipofectamine2000使用前，輕輕混勻，用48ul無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋2ulLipofectamine2000，輕輕混勻，室

腫瘤細(xì)胞的分子結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)2017/12/12: 腫瘤細(xì)胞廣泛存在于自然界中，幾乎所有的油脂中都含有數(shù)量不等的軟脂酸組分。中國(guó)產(chǎn)的烏桕種子的烏桕油中，軟脂酸的含量可高達(dá)60%以上，棕櫚油中含量大約為40%，菜油中的含量則不足2%。分子結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)1、摩爾折射率：77.732、摩爾體積（m3/mol）：287.33、等張比容（90.2K）：690.54、表面張力（dyne/cm）：33.35、腫瘤細(xì)胞極化率（10-24cm3）：30.81200mg130372-200301乙酰吉它霉素效價(jià)測(cè)定100mg130375-200701制霉菌素效價(jià)測(cè)定50m

腫瘤細(xì)胞的應(yīng)用能力2017/12/05: 腫瘤細(xì)胞衍生的神經(jīng)元移植后，小鼠表現(xiàn)出恢復(fù)，而細(xì)胞仍然成長(zhǎng)為它們*成熟的形式，這項(xiàng)研究類似于2013年加州大學(xué)舊金山分校發(fā)表的一項(xiàng)研究，當(dāng)時(shí)科學(xué)家將胎兒小鼠的腦細(xì)胞移植到癲癇小鼠中。雖然這些研究結(jié)果鼓舞人心，但是Chung指出，還需要一個(gè)過(guò)程來(lái)純化神經(jīng)元，所以只有那些已知抑制癲癇發(fā)作的神經(jīng)元（稱為中間神經(jīng)元）才能被移植，在考慮用于人類治療之前，需要完成進(jìn)一步的靈長(zhǎng)類動(dòng)物研究?！耙?yàn)榕咛ジ杉?xì)胞能夠分化成多種不同的細(xì)胞類型，甚至當(dāng)我們將它們轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元時(shí)，總是還會(huì)有其他類型的細(xì)胞。對(duì)于臨床用途，我們

腫瘤細(xì)胞擴(kuò)增的瓶頸在哪里2017/11/30: 培養(yǎng)人類胚胎腫瘤細(xì)胞的研究者們發(fā)現(xiàn)，核型正常的細(xì)胞在植板（plating）之后只有少數(shù)能夠分裂，而且它們的子細(xì)胞還會(huì)出現(xiàn)持續(xù)性的死亡，很少能形成可以長(zhǎng)期增殖的克隆。Sheffield大學(xué)的PeterAndrews教授和DanielCoca教授領(lǐng)導(dǎo)研究團(tuán)隊(duì)，對(duì)單個(gè)人類胚胎干細(xì)胞進(jìn)行了延時(shí)成像，并由此鑒定了限制干細(xì)胞生長(zhǎng)的主要瓶頸。研究顯示，在長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生了適應(yīng)性突變的干細(xì)胞，受到的生長(zhǎng)限制有所緩解，能夠進(jìn)行更有效的擴(kuò)增。Sheffield大學(xué)的DrIvanaBarbaric說(shuō)：“我們研究胚胎

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