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細(xì)胞常見(jiàn)的保存方法2017/07/04: 原代細(xì)胞保存溫度越低，保存時(shí)限更長(zhǎng)；溫度越低，對(duì)細(xì)胞傷害越大；低溫也不怕，我有防凍劑（e.g.甘油）。下面的表格就是五種常見(jiàn)保存細(xì)菌細(xì)胞的方法和大約時(shí)限。保存條件溫度°C大約時(shí)間瓊脂平板44-6周（AgarPlate）穿刺培養(yǎng)基43周-1年（stabculture）冰凍-201-3年超低溫冰凍-201-10年凍干≤415年+但是，具體到你用的那一種菌用什么方法保存能夠保存多長(zhǎng)時(shí)間，就要視情況而定了，并沒(méi)有一個(gè)*答案，上表中所列出來(lái)的時(shí)限一般來(lái)說(shuō)是適用大部分細(xì)菌樣本的。小編如果要保存一個(gè)細(xì)胞樣本，

細(xì)胞同步化實(shí)驗(yàn)操作步驟2017/06/29: 在腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞多處于不同的細(xì)胞周期時(shí)相中。不同時(shí)相的細(xì)胞對(duì)藥物干預(yù)存在不同的反應(yīng)，會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性，因此需要制備細(xì)胞周期一致的細(xì)胞。細(xì)胞同步化是解決該問(wèn)題的好辦法。細(xì)胞同步化是利用藥物或其他方法使細(xì)胞停止在細(xì)胞周期的某個(gè)時(shí)相的技術(shù)，其基本原則是使細(xì)胞停留在細(xì)胞周期的特定時(shí)相上；停滯過(guò)程可以通過(guò)調(diào)節(jié)，恢復(fù)細(xì)胞周期；恢復(fù)后所有細(xì)胞以一致的步調(diào)在細(xì)胞周期中運(yùn)行。細(xì)胞同步化實(shí)驗(yàn)為特定細(xì)胞周期轉(zhuǎn)變、細(xì)胞動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞周期調(diào)控以及細(xì)胞在不同時(shí)相中對(duì)藥物的敏感性研究奠定了基礎(chǔ)?！緦?shí)驗(yàn)用品】材料：H

細(xì)胞懸液標(biāo)本制備實(shí)驗(yàn)步驟2017/06/27: 細(xì)胞系懸液標(biāo)本制備實(shí)驗(yàn)步驟(1)取材：收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞于離心管中，800～1000r／min離心10min，棄上清，彈指法混勻細(xì)胞。沿管壁加入2．0％～2．5％冷戊二醛，輕輕吹打，4℃固定30min。用小鋁片將細(xì)清。4℃PBS緩沖液沖洗1～2h或過(guò)夜，1000r／min離心5min，棄上清。(2)制備預(yù)包埋塊：管內(nèi)加入2％～4％37℃瓊脂糖液0．1～0．5ml，兩手搓離心管，使細(xì)胞系與瓊脂糖混勻，室溫冷卻，形成細(xì)胞瓊脂凝膠預(yù)包埋塊。離心管內(nèi)加適量PBs緩沖液或75％乙醇溶液，鋁片沿管輕輕地將細(xì)

原代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)2017/06/22: 原代細(xì)胞培養(yǎng)：1、實(shí)驗(yàn)材料要新鮮，從活體分離材料后要低溫保存，并盡快進(jìn)行細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)。2、無(wú)菌操作。操作時(shí)用的培養(yǎng)液，可加平時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)液5倍含量的青鏈霉素。3、用酶法分離細(xì)胞時(shí)，注意酶液的濃度和控制消化時(shí)間。貼塊法分離細(xì)胞時(shí)，注意動(dòng)作要輕柔，不要傷到細(xì)胞組織，組織塊邊緣盡量平整有利于細(xì)胞游離。4、培養(yǎng)液的選擇。不同的細(xì)胞有對(duì)培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)的要求不同，根據(jù)所分離細(xì)胞的特性選擇。人支氣管上皮細(xì)胞微小RNA英文名稱：HBEpiCmiRNA規(guī)格:1µg2µg5µg原代細(xì)胞人氣管上皮細(xì)胞微小RNA英文名稱：

腫瘤細(xì)胞凍存保護(hù)劑2017/06/20: 腫瘤細(xì)胞很多化合物都可以作為凍存保護(hù)劑，它們既可以單獨(dú)使用也可以聯(lián)合使用，例如糖、血清和去污劑。雖然凍存沒(méi)有的準(zhǔn)則，但是大家普遍認(rèn)為二甲基亞砜（DMSO）和甘油是保護(hù)活細(xì)胞和組織使用zui廣泛且zui有效的凍存保護(hù)劑。其他凍存保護(hù)劑可根據(jù)情況使用，可單獨(dú)使用也可聯(lián)合使用，包括：聚乙烯乙二醇（polyethyleneglycol），丙烯乙二醇（propyleneglycol），甘油（glycerine），聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrolidone），山梨醇（sorbitol），右旋糖苷

人類外周血淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)方法2017/06/15: 實(shí)驗(yàn)原理染色體是在顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞系有絲分裂過(guò)程中出現(xiàn)的結(jié)構(gòu)。因此，必須獲得染色體標(biāo)本才能進(jìn)行檢查分析，通常情況下，都是利用外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行核型分析。正常情況下，人體外周血淋巴細(xì)胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化成淋巴母細(xì)胞，使其恢復(fù)增殖能力。因此，可采取少量外周靜脈血，做短期培養(yǎng)，培養(yǎng)至72小時(shí)細(xì)胞進(jìn)入增殖旺盛期，此時(shí)加入秋水仙素抑制細(xì)胞分裂，使細(xì)胞分裂停止在中期以獲得足夠量的分裂期細(xì)胞，經(jīng)低滲、固定、制片、染色后鏡下觀察進(jìn)行核型分析。上述制備的染色體標(biāo)本經(jīng)胰蛋白酶消

細(xì)胞長(zhǎng)期保存的方法2017/06/13: 細(xì)胞系長(zhǎng)期低溫冰凍必然會(huì)導(dǎo)致部分細(xì)胞死亡，而且很多時(shí)候我們要把細(xì)胞樣本拿來(lái)重新接種做實(shí)驗(yàn)，所以解凍再凍的過(guò)程也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。那么起始樣本的細(xì)胞濃度就要達(dá)到一定的高度，這樣在以后保存的過(guò)程中就算死亡一些細(xì)胞，我們也還有很多有效細(xì)胞可以用，一般來(lái)說(shuō)這個(gè)起始細(xì)胞密度要達(dá)到10的七次方的樣子（單位：細(xì)胞/mL）。除了常見(jiàn)抗凍劑甘油外，我們也會(huì)添加多糖（polysaccharide）或者葡聚糖（dextran）或某些蛋白質(zhì)用來(lái)吸附在細(xì)胞表面形成保護(hù)薄膜，防止在冷凍過(guò)程中對(duì)細(xì)胞的破壞。另外在解凍細(xì)胞樣本的

原代細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程可能出現(xiàn)的問(wèn)題及解決辦法2017/06/08: 原代細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)這樣或那樣的問(wèn)題，客戶遇到的問(wèn)題從細(xì)胞生長(zhǎng)角度來(lái)說(shuō)，針對(duì)細(xì)胞不貼壁、生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對(duì)應(yīng)的解決方法。一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因：●胰蛋白酶消化過(guò)度●支原體污染●培養(yǎng)基pH值過(guò)堿（NaHCO3分解）●細(xì)胞老化●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高解決方法：●縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度●分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物?！袷褂脽o(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2●啟用新的保種細(xì)胞●調(diào)節(jié)*接種細(xì)

細(xì)胞株培養(yǎng)時(shí)消毒滅菌的方法2017/06/06: 細(xì)胞株嚴(yán)格的消毒滅菌對(duì)保證細(xì)胞培養(yǎng)的成功是極為重要的，其方法分為物理法和化學(xué)法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過(guò)、紫外線及射線等，后者主要指使用化學(xué)消毒劑等。①熱滅菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min或180℃45~60min。②蒸氣滅菌：用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不變性的溶液等，不同物品其有效滅菌壓力和時(shí)間不同，如培養(yǎng)用液、橡膠制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高壓滅菌10min;布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa(121.3℃)高壓滅菌15~

ATCC細(xì)胞株解凍和培養(yǎng)操作推薦2017/06/01: 凍存的ATCC細(xì)胞株和雜交腐細(xì)胞株在運(yùn)送過(guò)程中使用干冰保持低溫。收到細(xì)胞后，可以立即解凍復(fù)蘇，去除二甲基亞砜（DSMO0）后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞，必須將細(xì)胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲(chǔ)存。請(qǐng)不要將細(xì)胞存儲(chǔ)在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達(dá)不到-130℃，細(xì)胞活力會(huì)立即下降。ATCC細(xì)胞株產(chǎn)品附帶一份產(chǎn)品資料單，其中包含細(xì)胞株的信息和詳細(xì)的操作指南。細(xì)胞株的所有詳細(xì)介紹可以在ATCC找到，產(chǎn)品資料單也可以在ATCC下載。此外產(chǎn)品還附帶細(xì)胞株具體批次的檢測(cè)報(bào)告，其中包含批次的特

原代細(xì)胞保存的主要方法之一細(xì)胞凍存2017/05/25: 利用凍存技術(shù)將原代細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5％．15％的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細(xì)胞損傷。采用"慢凍快

原代細(xì)胞培養(yǎng)基的保存方法分析2017/05/23: 原代細(xì)胞培養(yǎng)基的保存方法分析1.干粉，買了后一定要保存在4度。有人保存在-20度我認(rèn)為沒(méi)有必要。但4度是非常必要的。保證期是有提示的。2.配好的無(wú)血清培養(yǎng)基一定保存在4度，保存不要超過(guò)3個(gè)月。用時(shí)根據(jù)提示要加入谷胺酰胺。3.加入血清的培養(yǎng)基，保存在4度不要超過(guò)1個(gè)月，從時(shí)間太長(zhǎng)，活性下降。當(dāng)然稍微長(zhǎng)點(diǎn)也不一定出問(wèn)題。但是根據(jù)細(xì)胞而定;如果原代培養(yǎng)，新鮮，如果是原代細(xì)胞，或僅維持傳代就不太要緊。但是原則是越新越好。786-O[786-0],人腎透明腺癌細(xì)胞HumanHEC-1A,人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系

原代細(xì)胞如何消除組織培養(yǎng)的污染2017/05/18: 原代細(xì)胞當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開(kāi)，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過(guò)濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂(lè)菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟。①在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)原代細(xì)胞傳代的濃度。②分散細(xì)胞懸液到多孔

哪些方法可以使細(xì)胞適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基2017/05/16: 1．細(xì)胞株直接適應(yīng)法式—將細(xì)胞直接從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無(wú)血清培養(yǎng)基中。2．連續(xù)適應(yīng)或循序隔絕法—分幾步將細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無(wú)血清培養(yǎng)基中。與直接適應(yīng)法相比較，連續(xù)適應(yīng)法對(duì)于細(xì)胞更溫和些。為了使細(xì)胞適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基，關(guān)鍵是細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)滿足以下條件：1．處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期2．存活率大于90%3．在適應(yīng)期間，以較高的初始細(xì)胞株接種量進(jìn)行接種下面列出了常規(guī)適應(yīng)步驟。初始細(xì)胞接種量、細(xì)胞產(chǎn)量和培養(yǎng)周期是連續(xù)優(yōu)化的良好開(kāi)端。直接適應(yīng)有些類型的細(xì)胞可以直接從含有血清培養(yǎng)基適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基。對(duì)于直接適

干細(xì)胞過(guò)濾器的產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)2017/05/09: 干細(xì)胞過(guò)濾器是一種用于細(xì)胞過(guò)濾和分離的微流體器件。本產(chǎn)品由一個(gè)封閉的流體通道作為細(xì)胞過(guò)濾器腔體，1、在細(xì)胞過(guò)濾器腔體的兩端設(shè)有流體的輸入端口；2、和流體輸出端口；3、在流體的輸入端口和流體輸出端口之間設(shè)置細(xì)胞過(guò)濾裝置即細(xì)胞顆粒阻擋器；4、在細(xì)胞顆粒阻擋器旁為流體池；5、細(xì)胞阻擋結(jié)構(gòu)可阻擋流體中較大的細(xì)胞，并使之聚集在流體池中，并被流體池中的相關(guān)抗體所捕獲。通過(guò)外加的物理或化學(xué)作用，使其破碎或滅活，達(dá)到細(xì)胞過(guò)濾的作用。干細(xì)胞產(chǎn)品說(shuō)明：尼龍網(wǎng)格大小為40微米、70微米以及100微米，滿足過(guò)濾分離不同

不同細(xì)胞培養(yǎng)基的除菌方式及注意事項(xiàng)2017/05/04: 細(xì)胞系培養(yǎng)基滅菌的方式分為高壓滅菌和膜過(guò)濾除菌，不同的培養(yǎng)基由于其營(yíng)養(yǎng)成份不同，滅菌方式也可能不同。絕大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基不適宜高壓滅菌。因?yàn)楦邏簻缇灼茐募?xì)胞培養(yǎng)基中的一些成份，如某些維生素等，因此，在通常的高壓滅菌型細(xì)胞培養(yǎng)基中，配方中的維生素種類與過(guò)濾型培養(yǎng)基相比較少，對(duì)于細(xì)胞系生長(zhǎng)*的谷氨酰胺等，需待高壓后補(bǔ)充到培養(yǎng)基中。在高壓過(guò)程中，滅菌用器皿的選擇應(yīng)注意避免蒸發(fā)或是污染。在大規(guī)模工業(yè)化中，可以采用短時(shí)超高溫處理的方法進(jìn)行流水線式的滅菌，能夠提高自動(dòng)化效率，降低成本。膜過(guò)濾除菌是當(dāng)前較為常

人外周T細(xì)胞的分離與鑒定2017/04/27: 材料：淋巴細(xì)胞株懸液、1%SRBC懸液、滅活之小牛血清、離心管、試管、吸管、載玻片、0.8%戊二醛、瑞氏染液。方法（1）取上述配好之淋巴細(xì)胞懸液0.1ml于潔凈小試管中，加入1%SRBC懸液0.1ml。再加入小牛血清0.1ml，混勻，置37℃水浴箱中5分鐘，500轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，放4℃冰箱2-24小時(shí)。（2）從冰箱中取出試管，留適量上清液，輕輕搖勻，加0.8%戊二醛2滴，輕搖后，置4℃冰箱15分鐘，取出，作成涂片，待自然干燥，以瑞氏染液染色。（3）計(jì)數(shù)：鏡下觀察，凡結(jié)合三個(gè)以上SRBC的T細(xì)

原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)器具清洗步驟2017/04/25: 原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)器具清洗l玻璃類1、主要有：培養(yǎng)瓶，血清瓶，小青瓶，移液管，離心管，試管，培養(yǎng)皿等。2、清洗步驟：泡在含有洗潔凈的自來(lái)水中→撈出來(lái)用毛刷將實(shí)驗(yàn)器具各個(gè)面刷洗至少25遍→自來(lái)水沖洗25遍→過(guò)一遍一蒸水→泡入鉻酸,過(guò)夜(24h左右)→從鉻酸中撈出器具，自來(lái)水沖洗25遍→過(guò)三遍一蒸水，三遍三蒸水→烘箱內(nèi)烘干→收入柜子備用→用前高溫滅菌(121℃，25min)→烘干→使用。注意：新的玻璃器具先要泡鹽酸1天，然后清洗步驟與上面相同。l塑料類1塑料類器具主要包括：孔板，大槍頭，瓶蓋，濾器，采血管

影響哺乳動(dòng)物細(xì)胞復(fù)蘇的因素2017/04/20: 影響哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞復(fù)蘇的因素包括：（a）細(xì)胞類型，（b）生長(zhǎng)階段，（c）細(xì)胞處于細(xì)胞周期的哪個(gè)階段，（d）終懸液中的細(xì)胞數(shù)量和濃度?？赏ㄟ^(guò)優(yōu)化以上因素來(lái)提高復(fù)蘇細(xì)胞活力，另外，還需考慮凍存保護(hù)劑的特性以及凍存過(guò)程的具體操作。哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)其他細(xì)胞和微生物的污染特別敏感，例如Hela細(xì)胞。由于這種特性，初始細(xì)胞系可通過(guò)同工酶分析、染色體組型分析、免疫分析或基因組分析，檢測(cè)來(lái)源。凍存前后均應(yīng)該進(jìn)行如上檢測(cè)。特別需要注意的是，病毒和支原體污染。一套完整健全的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系鑒定程序應(yīng)該包括，檢查是

神經(jīng)細(xì)胞分散培養(yǎng)2017/04/18: （一）細(xì)胞系選材常用胚胎動(dòng)物或新生鼠神經(jīng)組織。雞胚常用胚齡6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不過(guò)也有認(rèn)為與組織相關(guān)。如大白鼠胚胎以19d為宜，小鼠以18d為宜，大鼠紋狀體以10d為宜；若紋狀體與黑質(zhì)聯(lián)合培養(yǎng)的大鼠胚，則黑質(zhì)以13d，紋狀體18-21d為宜；小腦以20-21d小鼠胚胎，所獲蒲氏細(xì)胞成活率高，顆粒細(xì)胞正在分化；脊髓與DRG聯(lián)合培養(yǎng)，常用4-7d雞胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神經(jīng)成活率高。（二）取材。腦則取出相應(yīng)組織，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消化。脊髓則固定于瓊脂

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