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巨核細(xì)胞基本生理功能分析2017/04/13: 巨核細(xì)胞株雖然在骨髓的造血細(xì)胞中為數(shù)zui少，僅占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.05%，但其產(chǎn)生的血小板卻對機體的止血功能極為重要。每個巨核細(xì)胞均可產(chǎn)生1000-6000個血小板。生成血小板的巨核細(xì)胞也是從骨髓中的造血干細(xì)胞分化發(fā)展來的。造血干細(xì)胞首先分化生成巨核系祖細(xì)胞，也稱巨核系集落形成單位(colonyformingunit-megakaryocyte,CFU-Meg)。祖細(xì)胞階段的細(xì)胞核內(nèi)的染色體一般是2-3倍體。當(dāng)祖細(xì)胞是2倍體或4倍體時，細(xì)胞具有增殖能力，因此這是巨核細(xì)胞系增加細(xì)胞數(shù)量的階段

原代細(xì)胞核的分離提取2017/04/11: (一)原代細(xì)胞操作步驟1．用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開腹部取出肝臟，剪成小塊(去除結(jié)締組織)盡快置于盛有0.9％NaCl的燒杯中，反復(fù)洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。2．將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8ml預(yù)冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。3．剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉(zhuǎn)動研磨3～5次，用3層紗布過濾勻漿液

程序降溫盒提高細(xì)胞凍存的存活率的方法2017/04/06: 1.細(xì)胞系實驗室凍存盒平時放4度，需要凍細(xì)胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮，貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的，很方便，效果也不錯的。2.異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮，效果很不錯。異丙醇熔點：-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹杂卸疽后w。注意了有可燃性!急性毒性：口服-大鼠LD50:58

原代細(xì)胞培養(yǎng)玻璃器皿的清洗2017/04/01: ①原代細(xì)胞浸泡：新購進的玻璃器皿常帶有灰塵，呈弱堿性，或帶有鉛、碑等有害物質(zhì)，故先用自來水浸泡、水洗，然后再用2%~5%鹽酸浸泡或煮沸30min，水洗。要領(lǐng)：培養(yǎng)用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能順利進行。用后的玻璃器皿常帶有大量的蛋白質(zhì)附著，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。②刷洗：用軟毛刷、洗滌劑，刷去器皿上的雜質(zhì)，沖洗晾干。要領(lǐng)：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑去器皿上的雜質(zhì)、刷洗次太多，會損害器皿的表面光潔度，洗滌劑有使pH上升的趨勢，所以易選用軟毛刷和洗滌劑。禁止用去

原代細(xì)胞線粒體膜勢能的檢測2017/03/30: 原代細(xì)胞線粒體在細(xì)胞凋亡的過程中起著樞紐作用，多種細(xì)胞凋亡刺激因子均可誘導(dǎo)不同的細(xì)胞發(fā)生凋亡，而線粒體跨膜電位的下降，被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級聯(lián)反應(yīng)過程中zui早發(fā)生的事件，它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征(染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂)出現(xiàn)之前，一旦線粒體DYmt崩潰，則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。線粒體跨膜電位的存在，使一些親脂性陽離子熒光染料如Rhodamine123、3，3-Dihexyloxacarbocyanineiodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol

哺乳動物轉(zhuǎn)錄調(diào)控原理分析2017/03/28: 細(xì)胞系RNA聚合酶II是三大RNA聚合酶之一，存在于基因轉(zhuǎn)錄裝置的核心位置，編碼蛋白質(zhì)基因的轉(zhuǎn)錄受到RNA聚合酶的調(diào)控。RNA聚合酶解開DNA雙鏈，沿著一條鏈移動。在移動過程中，它們一邊“解讀”DNA鏈上的核苷，一邊合成一條相應(yīng)的RNA鏈。由PolII合成的RNA就是mRNA，它們將合成蛋白質(zhì)的指令傳給核糖體。過往的研究證實，在許多哺乳動物的多個基因進行轉(zhuǎn)錄時，RNAPII往往會在啟動子附近的某些特定區(qū)域發(fā)生停頓。這種停頓往往是發(fā)生在RNAPII復(fù)合體形成和轉(zhuǎn)錄起始之后。而這個轉(zhuǎn)錄早期延伸的時期

過氧化物酶標(biāo)記測定法原理2017/03/23: 腫瘤細(xì)胞原理：脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以摻入到凋亡細(xì)胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端,與dATP形成異多聚體,并可與連接了報告酶(過氧化物酶或堿性磷酸酶)的抗地高辛抗體結(jié)合.在適合底物存在下,過氧化物酶可產(chǎn)生很強的顏色反應(yīng),特異準(zhǔn)確的定位出正在凋亡的細(xì)胞,因而可在普通光學(xué)顯微鏡下進行觀察.毛地黃植物是地高辛的*來源.在所有動物組織中幾乎不存在能與抗地高辛杭體結(jié)合的配體,因而非特異性反應(yīng)很低.抗地高辛的特異性抗體與脊椎動物甾體激

新生小鼠頸上交感神經(jīng)元分散細(xì)胞培養(yǎng)2017/03/21: 原代細(xì)胞交感神經(jīng)系統(tǒng)在維持機體的正常功能和對環(huán)境的適應(yīng)性反應(yīng)中起著十分重要的作用。交感神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)特別有助于神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育和可塑性研究，利用體外培養(yǎng)系統(tǒng)可進行交感神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)生、死亡、形態(tài)和生化發(fā)育、遞質(zhì)表形的獲得，以及靶組織與傳入纖維的突觸形成的研究。此外，通過體外培養(yǎng)系統(tǒng)可獲得關(guān)于神經(jīng)營養(yǎng)因子、激素，細(xì)胞因子等調(diào)節(jié)交感神經(jīng)元發(fā)育的信息，了解傳入纖維的輸入以及與靶組織的的機制。1、材料和方法實驗用出生當(dāng)天的昆明種小鼠，在無菌條件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖鑷在解剖顯微鏡下找到氣管兩側(cè)的

常見的細(xì)胞因子受體檢測的方法介紹2017/03/16: （一）活細(xì)胞系吸收試驗原理將過量的待測細(xì)胞與*細(xì)胞因子共孵育，若細(xì)胞膜表面存在相應(yīng)的細(xì)胞因子受體即可結(jié)合細(xì)胞因子，通過測定前、后細(xì)胞因子生物活性的對比情況可推測待測細(xì)胞表面細(xì)胞因子受體是否存在。方法1．過量的待測細(xì)胞、適量細(xì)胞因子準(zhǔn)備。2．共孵育，時間根據(jù)待測細(xì)胞和細(xì)胞因子選擇?？稍O(shè)2h,4h,6h,8h和更長時間。3．離心（1500r/min,5分鐘）收集上清液。4．測定孵育前后的細(xì)胞因子活性。方法同細(xì)胞因子測定。注意事項此法簡便，適用于定性，但不適用于定量檢測。（二）核素標(biāo)記重組細(xì)胞因子的放

原代細(xì)胞計數(shù)的操作步驟2017/03/14: （一）原代細(xì)胞計數(shù)1、將血球計數(shù)板及蓋片用擦試干凈，并將蓋片蓋在計數(shù)板上。2、將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數(shù)板之間。3、靜置3分鐘。4、鏡下觀察，計算計數(shù)板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只計左側(cè)和上方的。然后按下式計算：細(xì)胞數(shù)/ml＝4大格細(xì)胞總數(shù)/4×10000注意：鏡下偶見由兩個以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團，應(yīng)按單個細(xì)胞計算，若細(xì)胞團占10%以上，說明分散不好，需重新制備細(xì)胞懸液。（二）原代細(xì)胞活力1、將細(xì)胞懸液以0.5ml加入試管中。2、加入0.5ml0.4%臺盼蘭染液，染色2

從原培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞操作流程2017/03/09: 細(xì)胞系從基層迅速分離細(xì)胞，且保持細(xì)胞完整性的一般步驟。這一步驟并不意味著對于所有細(xì)胞系的廣泛應(yīng)用，每一種系統(tǒng)*條件和施用濃度應(yīng)該根據(jù)經(jīng)驗加以確定。再次培養(yǎng)時檢測細(xì)胞的活性。細(xì)胞的活率應(yīng)該超過90%對于無血清培養(yǎng)基，降低胰蛋白酶使用量。1.移棄使用過的細(xì)胞培養(yǎng)基。2.使用不包含有鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA(ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸.)清洗細(xì)胞系(看表確定正確的清洗溶液)。在培養(yǎng)瓶對著細(xì)胞的一面加入清洗溶液，通過轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶1到2分鐘清洗細(xì)胞層，然后去

成纖維細(xì)胞排除法操作流程2017/03/07: 1.原代細(xì)胞機械刮除法：是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭(用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲)、或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用(也可用特制電熱燒灼器刮除)。刮除程序為：(1)標(biāo)記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養(yǎng)瓶皿的背面圈下生長腫瘤細(xì)胞的部位;(2)刮除：棄掉培養(yǎng)液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標(biāo)記空間;(3)用Hanks液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細(xì)胞;(4)注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細(xì)胞殘留，可重復(fù)刮除至*除掉為止2.反復(fù)貼壁法：根據(jù)腫瘤細(xì)胞比成纖維細(xì)胞貼壁速度慢

對淋巴細(xì)胞系進行體外刺激預(yù)孵育、或板內(nèi)同步刺激培養(yǎng)2017/03/02: 1、將抗原和淋巴細(xì)胞系在體外混合，刺激并預(yù)孵育，是通用的方法。預(yù)孵育的淋巴細(xì)胞，在置入ELISPOT板之前應(yīng)使用復(fù)溫到37℃的培養(yǎng)液清洗細(xì)胞1-2次。置入ELISPOT板以后通常在37℃培養(yǎng)5～6小時。2、對于高度特異性抗原，可以采用將淋巴細(xì)胞和抗原同時加入ELISPOT板孔中，37℃培養(yǎng)箱中，同步進行刺激、培養(yǎng)、和細(xì)胞因子捕獲。淋巴細(xì)胞板內(nèi)同步刺激培養(yǎng)的時間通常為22～24小時。3、ELISPOT試驗檢測的是每一個分泌細(xì)胞系因子的活化細(xì)胞。在培養(yǎng)細(xì)胞過程中，任何移動、震動（包括開關(guān)培養(yǎng)箱門）都

細(xì)胞電穿孔轉(zhuǎn)染操作步驟2017/02/28: 原代細(xì)胞對于細(xì)胞轉(zhuǎn)染而言，目前主要是轉(zhuǎn)染試劑(多為脂質(zhì)體)的天下。磷酸鈣轉(zhuǎn)染的方法雖說有些out，但有些細(xì)胞還就認(rèn)準(zhǔn)這一套。不過，對于某些淋巴細(xì)胞而言，化學(xué)方法怎么都不奏效，那我們只能采取強硬手段，用電穿孔的方法進行轉(zhuǎn)染。應(yīng)用電穿孔時，一般都選擇恒定的電容，然后在不同的場強下轟擊細(xì)胞，以摸索*實驗條件。就大多數(shù)細(xì)胞而言，在電穿孔后能有20-50%的細(xì)胞存活率就OK，足以保證DNA的成功轉(zhuǎn)染。電穿孔通常在室溫下進行，之后將細(xì)胞置于冰上，以延長原代細(xì)胞膜孔道開放的時間。與傳統(tǒng)的磷酸鈣和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染相比

植物細(xì)胞質(zhì)壁分離技術(shù)分析2017/02/23: (1)原代細(xì)胞質(zhì)壁分離法：成長的植物細(xì)胞一般具有中央液泡，在中央液泡和細(xì)胞壁之間為細(xì)胞質(zhì)的薄層及其內(nèi)外膜——液泡膜和質(zhì)膜。液泡中的胞液具有一定的溶質(zhì)勢(或稱滲透勢)，而活的原生質(zhì)特別是液泡膜和質(zhì)膜則具有半透性。所以，當(dāng)細(xì)胞與外界溶液接觸時，便與外液構(gòu)成滲透系統(tǒng)，并可能發(fā)生水分的移動。若外液的水勢低于胞液的溶質(zhì)勢，則水分外滲的結(jié)果可使原生質(zhì)隨著液泡一起收縮而脫離細(xì)胞壁，發(fā)生質(zhì)壁分離，質(zhì)壁分離的細(xì)胞與水或水勢較高的溶液接觸時，可重新吸水而是質(zhì)壁分離復(fù)原。原代細(xì)胞實驗步驟1、試劑的配置：①臺盼藍：4%

動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究開發(fā)和工業(yè)化2017/02/21: 動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究開發(fā)和工業(yè)化動物細(xì)胞株（雜交瘤細(xì)胞、CHO細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞等）大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)及其生物反應(yīng)器工程可廣泛應(yīng)用于抗體、基因重組蛋白質(zhì)藥物、病毒疫苗等生物技術(shù)產(chǎn)品的研究開發(fā)和工業(yè)化，長期以來得到國家重大科技攻關(guān)計劃、863計劃等的大力支持，擁有一支精干的研究開發(fā)團隊和一系列現(xiàn)代化設(shè)備儀器，建立了由無血清懸浮培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)過程及生物反應(yīng)器設(shè)計放大與強化技術(shù)、大規(guī)模高密度流加和連續(xù)灌注培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)過程計算機實時監(jiān)測與控制技術(shù)、病毒類產(chǎn)品大規(guī)模技術(shù)等核心技術(shù)組成的大規(guī)模動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及其

人類體細(xì)胞染色體標(biāo)本制備實驗原理和操作步驟2017/02/16: 人類體細(xì)胞染色體標(biāo)本制備實驗原理和操作步驟實驗原理染色體是在顯微鏡下可見原代細(xì)胞有絲分裂過程中出現(xiàn)的結(jié)構(gòu)。因此，必須獲得染色體標(biāo)本才能進行檢查分析，通常情況下，都是利用外周血淋巴細(xì)胞進行核型分析。正常情況下，人體外周血淋巴細(xì)胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化成淋巴母細(xì)胞，使其恢復(fù)增殖能力。因此，可采取少量外周靜脈血，做短期培養(yǎng)，培養(yǎng)至72小時細(xì)胞進入增殖旺盛期，此時加入秋水仙素抑制細(xì)胞分裂，使細(xì)胞分裂停止在中期以獲得足夠量的分裂期細(xì)胞，經(jīng)低滲、固定、制片、染色后鏡下觀察進

培養(yǎng)原代細(xì)胞時哪些問題需要注意2017/02/14: 培養(yǎng)原代細(xì)胞時哪些問題需要注意1.原代細(xì)胞用1640加10%胎牛血清，有的種系用DMEM.血清要求質(zhì)量較高，在普通血清中細(xì)胞生長不太好。1640用雙蒸水溶解，按說明加入碳酸氫鈉。2.培養(yǎng)液中應(yīng)加入HEPES，起緩沖pH值的作用，否則會影響細(xì)胞狀態(tài)。如果用20%的HEPES，每次配培養(yǎng)液時每200ml培養(yǎng)液可加入5ml.加入HEPES后1640培養(yǎng)液顏色略呈橘黃色而非暗紅色。3.消化所用胰酶可選擇0.125%濃度，且不要消化時間太長。也有研究者認(rèn)為不用胰酶，直接吹打使細(xì)胞脫壁，但使用胰酶效果較好。

造血干細(xì)胞的基本特性2017/02/09: 造血干細(xì)胞的基本特性造血干細(xì)胞的多向分化潛能使造血干細(xì)胞分化為各類祖細(xì)胞系,祖細(xì)胞又可以分化為各種類型的血細(xì)胞。在造血干細(xì)胞發(fā)育、成熟的過程中,除了分化為成熟的細(xì)胞,部分細(xì)胞會衰老、死亡。為了維持終生造血,造血干細(xì)胞會不斷地進行自我更新。但是在一次次的DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂中又增加了突變的可能。在成體中,70%的HSC處于靜息狀態(tài),這種狀態(tài)可使終生存在的造血干細(xì)胞可以盡可能減少由于增殖帶來的基因組不穩(wěn)定性,降低細(xì)胞應(yīng)激帶來的傷害。當(dāng)造血干細(xì)胞受到信號刺激時,靜息的造血干細(xì)胞就會退出G0期,進入分裂

雜交瘤細(xì)胞技術(shù)分析2017/02/07: 雜交瘤細(xì)胞技術(shù)分析克隆化的細(xì)胞可以在體外進行大量培養(yǎng)，收集上清液而獲得大量的單一的克隆化抗體。不過體外培養(yǎng)法得到的單克隆抗體有限，其不能超過特定的細(xì)胞濃度，且每天要換培養(yǎng)液。而體內(nèi)雜交瘤細(xì)胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細(xì)胞具有從親代淋巴細(xì)胞得來的腫瘤細(xì)胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能排斥雜交瘤的小鼠（無胸腺的裸鼠），雜交瘤細(xì)胞就開始無限地繁殖，直至宿主死亡。產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞的小鼠腹水和血清中含有大量的雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體，這種抗體的效價往往高于培養(yǎng)細(xì)胞上清液的100~1000倍

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