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免疫印跡（Western blot）檢測科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/24

免疫印跡（Westernblot）檢測應(yīng)用簡介蛋白質(zhì)免疫印跡法(WesternBlot)，簡稱WB，是指通過SDS-PAGE膠將不同分子量的蛋白質(zhì)分離開，然后將目標蛋白轉(zhuǎn)移到載體(PVDF)膜上，利用抗原抗體的特異性結(jié)合，用特異性的一抗結(jié)合目標蛋白，用HRP標記的二抗結(jié)合一抗，再加以ECL發(fā)光液顯色，檢測組織或者細胞內(nèi)某種或者某些特異性蛋白質(zhì)的表達。蛋白質(zhì)免疫印跡是做蛋白質(zhì)分析的一種常規(guī)技術(shù)，常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析，還可以用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-R

co-ip檢測科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/24

co-ip檢測應(yīng)用簡介Co-IP主要用于檢測蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用，是IP實驗的一種擴展，基于IP反應(yīng)的潛力，在樣品溶液中捕獲和純化主要目標（抗原等）及通過天然相互作用與靶標結(jié)合的其他的大分子。此外，還可以利用Co-IP來確定在不同條件下的蛋白質(zhì)相互作用。技術(shù)原理免疫共沉淀是利用抗原和抗體的特異性結(jié)合以及細菌的ProteinG或A能特異性地結(jié)合到免疫球蛋白的Fc片段的方法。其基本原理是在細胞裂解液中加入感興趣蛋白的抗體，孵育后再加入與抗體特異結(jié)合的結(jié)合于磁珠的ProteinG或A，若細胞中存

CHIP 檢測科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/24

CHIP檢測應(yīng)用簡介核酸和蛋白質(zhì)是組成生命的主要生物大分子，兩者的相互作用是構(gòu)成生命活動的生長、繁殖、運動、遺傳和代謝等生命活動的基礎(chǔ)。研究蛋白質(zhì)和核酸間的相互作用是人們探索生命現(xiàn)象奧秘的關(guān)鍵，CHIP檢測實驗是應(yīng)用于蛋白與核酸互作關(guān)系的重要參考。技術(shù)原理CHIP實驗在活細胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)－DNA復(fù)合物，并將其隨機切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。實驗方法技

ELISA 檢測科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/20

ELISA檢測應(yīng)用簡介酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優(yōu)點。技術(shù)原理采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）②酶標記的抗原或抗體（標記物）③酶作用的底物（顯色劑）測量時，抗原（抗體）先結(jié)合在固

基因提取科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/20

基因提取應(yīng)用簡介DNA是遺傳信息的載體,是最重要的生物信息分子,是分子生物學(xué)研究的主要對象,因此DNA取方面的工作，那就根本談不上進行分子生物學(xué)方面的實驗。在DNA提取過程中應(yīng)做到：1、根據(jù)不同研究需要，保證結(jié)構(gòu)的相應(yīng)完整性；2、盡量排除其它大分子成分的污染(蛋白質(zhì)、多糖及RNA等)；3、保證提取樣品中不含對酶有抑制作用的有機溶劑及高濃度的金屬離子。下面結(jié)合不同的研究對象列出幾種相應(yīng)的DNA提取方法。技術(shù)原理原核生物的基因是連續(xù)不間隔的,直接用限制酶從DNA切取就可得到目的基因，再PCR擴增后就

血管生成實驗科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/20

血管生成實驗應(yīng)用簡介血管生長是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵步驟。無論原發(fā)性腫瘤還是繼發(fā)性腫瘤，一旦生長直徑超過1~2mm，都會有血管生成，這是由于腫瘤細胞自身可分泌多種生長因子，誘導(dǎo)血管生成。多數(shù)惡性腫瘤的血管生成密集且生長迅速，因此，血管生成在腫瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移過程中起到重要作用，抑制這一過程將能明顯阻止腫瘤組織的發(fā)展和擴散轉(zhuǎn)移。體外的血管生成實驗?zāi)芎芎玫哪M腫瘤的血管發(fā)生過程，并且適合研究藥物對這一過程的影響。技術(shù)原理應(yīng)用Matrigel模擬機體環(huán)境，上面接種腫瘤細胞，觀察血管生成情況。實驗方法技術(shù)總結(jié)1、實

細胞克隆實驗科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/20

細胞克隆實驗應(yīng)用簡介克隆形成及細胞克隆接種存活率，通過觀察單細胞集落形成情況，來計算克隆形成率，了解其增殖能力。技術(shù)原理單個細胞在體外持續(xù)增殖6代以上時細胞數(shù)量已達60個左右，此細胞群體成為克隆或集落，大小在1.0-2.0mm之間。集落形成率表示細胞的獨立生存能力，各種理化因素可能導(dǎo)致細胞的克隆形成能力發(fā)生改變，通過計數(shù)克隆形成率，可對單個細胞的增殖潛力做定量分析，了解細胞的增殖率和對生存環(huán)境的適應(yīng)性。軟瓊脂培養(yǎng)或平板克隆是zui常用的方法。實驗方法技術(shù)總結(jié)1、試驗成功的關(guān)鍵是細胞懸液的制備和接

細胞劃痕實驗科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/20

細胞劃痕實驗應(yīng)用簡介細胞劃痕是一種簡單易行的檢測細胞運動的方法，實驗成本低，可以用來檢測貼壁生長腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。技術(shù)原理創(chuàng)傷愈合實驗是一種簡單、廉價的方法，也是最早發(fā)展起來的研究定向細胞在體外遷移的方法之一。該方法模擬了細胞在體內(nèi)愈合過程中的遷移過程?；静襟E包括在細胞單層中創(chuàng)建一個“傷口”，在細胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像以關(guān)閉傷口，以及比較圖像以確定細胞遷移速率。實驗方法注意事項1、一般做劃痕實驗，都是在無血清或者底血清狀態(tài)下培養(yǎng)的，否則細胞增殖就不能忽略。2、按照6孔板背后畫線

細胞遷移研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/19

細胞遷移應(yīng)用簡介遷移是腫瘤細胞轉(zhuǎn)移過程中bi不可少的環(huán)節(jié)之一。腫瘤細胞與母體瘤分離，穿越血管壁，侵襲周邊正常組織時，需要一定的運動能力。高轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞通常具奮較強的運動性。多種物質(zhì)可剌激腫瘤細胞的遷移，如腫瘤細胞分泌因子、生長因子、細胞外基質(zhì)成分(FN、LN)以及一些癌轉(zhuǎn)移靶器官的代謝產(chǎn)物或分泌產(chǎn)物等生長因子對腫瘤細胞有趨化作用，可使其發(fā)生定向運動。測定方法以細胞劃痕法和Transwell小室法。技術(shù)原理細胞劃痕法是簡捷測定細胞遷移運動與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養(yǎng)皿或平板

慢腺病毒細胞株構(gòu)建研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/19

慢腺病毒細胞株構(gòu)建技術(shù)原理慢病毒包裝：使用3質(zhì)粒慢病毒包裝系統(tǒng)，慢病毒系統(tǒng)使用pLKO.1-EGFP、psPAX2、pMD2.G，過表達慢病毒系統(tǒng)使用pLVX-AcGFP、psPAX2、pMD2.G三質(zhì)粒系統(tǒng)，將質(zhì)粒混勻后使用磷酸鈣轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染至HEK293T細胞中，培養(yǎng)48h后，收集上清。純化后留取部分檢測病毒滴度，其余病毒凍存于-80℃冰箱中。滴度檢測：將病毒顆粒使用梯度稀釋，分別感染293T細胞，感染72h后，在熒光顯微鏡下觀察細胞熒光表達情況。根據(jù)細胞熒光量計算病毒滴度。細胞感染：在病毒

耐藥細胞株構(gòu)建科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/19

耐藥細胞株構(gòu)建應(yīng)用簡介腫瘤細胞/癌細胞的耐藥性是腫瘤/癌癥難以gen治的重要原因。體外構(gòu)建的耐藥細胞株，能模擬腫瘤細胞/癌細胞對特異藥物耐藥性的形成過程，有助于人們理解腫瘤細胞/癌細胞獲得耐藥性的機制，篩選獲得抗耐藥性的特異藥物，并對相關(guān)疾病進行有針對性地臨床治療。原理介紹一種藥物作用于某類細胞后，會殺死其中沒有抗性的細胞，而這類細胞中具有抗性的細胞不會被殺死，即進行了選擇。具有抗性的細胞大量繁殖產(chǎn)生很多抗性后代，再用這種藥物時表現(xiàn)出的藥效大大下降的現(xiàn)象就是細胞的耐藥性。采用體外低濃度梯度遞增聯(lián)

細胞侵襲科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/19

細胞侵襲應(yīng)用簡介腫瘤細胞通過膜表面特定受體與基質(zhì)或基底膜的層粘連蛋白、纖維連接蛋白和IV型膠原等相粘連，然后腫瘤細胞可釋放蛋白水解酶或激活基質(zhì)中已存在的酶原，使基質(zhì)成分降解，最后腫瘤細胞運動而充填到被水解了的基質(zhì)的空隙處，如此三個過程不斷重復(fù)腫瘤細胞不斷向深層侵襲。技術(shù)原理本實驗采用的Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分，含有LN、IV型膠原等。將Matrigel鋪在Transwell侵襲小室的多孔濾膜上，能形成與天然基底膜極為相似的基底膜結(jié)構(gòu)。具有侵襲能力的細胞在趨化劑誘導(dǎo)下可穿

原代細胞分離與培養(yǎng)科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/09/19

原代細胞分離與培養(yǎng)應(yīng)用簡介凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。通過原代分離獲得的細胞具有與體內(nèi)細胞相似的生物學(xué)特征，是研究生物體相關(guān)生命活動的理想材料。原理介紹原代細胞的分離是將人/小鼠等特異模式動物的細胞從機體中取出，經(jīng)胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖的過程。原代培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養(yǎng)。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細胞保持原有細胞

大鼠關(guān)節(jié)軟骨損傷模型科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/08/23

大鼠關(guān)節(jié)軟骨損傷模型人體機能水平隨年齡增加呈拋物線樣改變，由于運動、勞累、負重以及關(guān)節(jié)長期過度體位負荷等因素，關(guān)節(jié)軟骨不可避免損傷退變。常見軟骨損傷不外乎慢性勞損退變及急性應(yīng)力損傷兩類。關(guān)節(jié)軟骨慢性勞損退變過程漫長。因素復(fù)雜，運動研究困難，因此臨床常研究急性應(yīng)力導(dǎo)致的軟骨損傷。建立軟骨損傷動物模型涉及動物的選擇、損傷方法、關(guān)節(jié)部位、軟骨損傷分析等各個方面。關(guān)節(jié)軟骨損傷(ACI)大鼠模型RatModelforArticularCartilageInjury(ACI)動物品系：SPF級Wistar大

小鼠創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙模型科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/08/23

小鼠創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙模型創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙是指個體由于經(jīng)歷對生命具有威脅的事件或者嚴重的創(chuàng)傷，導(dǎo)致癥狀長期持續(xù)的精神障礙。研究創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的主要動物模型為條件恐懼和應(yīng)激敏感化模型。創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙小鼠模型MouseModelforPosttraumaticStressDisorder(PTSD)動物品系：SPF級Balb/C小鼠，健康，雄性，4~6W，體重為18g~20g。實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組低、中、高劑量組。實驗周期：4-6weeks建模方法：大鼠經(jīng)腹腔注射戊吧比妥鈉(

大鼠創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙模型科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/08/23

大鼠創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙模型創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙是指個體由于經(jīng)歷對生命具有威脅的事件或者嚴重的創(chuàng)傷，導(dǎo)致癥狀長期持續(xù)的精神障礙。研究創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的主要動物模型為條件恐懼和應(yīng)激敏感化模型。創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙大鼠模型RatModelforPosttraumaticStressDisorder(PTSD)動物品系：SPF級Balb/C小鼠，健康，雄性，4~6W，體重為18g~20g實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組低、中，高劑量組實驗周期：4-6weeks建模方法：大鼠經(jīng)腹腔注射戊吧比妥鈉(按50～

小鼠酒精性肝病模型科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/08/20

小鼠酒精性肝病模型酒精性肝病(AlcoholicHepatitis)是由于長期大量飲酒導(dǎo)致的肝臟疾病。初期通常表現(xiàn)為脂肪肝，進而可發(fā)展成酒精性肝炎、肝纖維化和肝硬化。其主要臨床特征是e心、嘔吐、黃疸、可有肝臟腫大和壓痛。并可并發(fā)肝功能衰竭和上消化道出血等。酒精性肝病小鼠模型動物品系：SPF級昆明（KM）小鼠，健康，雄性，體重為18g~22g/SPF級Balb/C小鼠，雄性，周齡為8w-10w，體重為30g-35g實驗分組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組低、中、高三個劑量組實驗周期：15d

小鼠心肌梗死模型科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/08/20

小鼠心肌梗死模型心肌梗死是一種嚴重的心血管疾病，由于冠狀動脈血供急劇減少或中斷，使心肌持續(xù)性缺血缺氧以致壞死，損害心功能且可能導(dǎo)致心律失常、休克以及心力衰竭等嚴重后果，已成為威脅人類生命健康的重大疾病之一。近幾十年來，隨著醫(yī)療技術(shù)的進步，再灌注心肌治療可顯著改善心梗患者的生存率，但由于心梗發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)歸過程極其復(fù)雜，使其在臨床治療中仍然面臨許多挑戰(zhàn)，因此構(gòu)建合適的動物模型對探究人心肌梗死的發(fā)病機制和病理過程、評價藥物療效以及探索新的治療方法至關(guān)重要。通過結(jié)扎冠狀動脈模擬心肌缺血過程來建立心肌梗死

大鼠佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/08/20

大鼠佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)炎是社會生活中常見的一種自身免疫性疾病，其發(fā)病機制復(fù)雜，病程長久且難治愈，是各大科研機構(gòu)和藥企研究的熱門，在研究過程中常常需要符合臨床的動物模型，今天就跟大家分享幾種常用于評價治療關(guān)節(jié)炎的動物模型。佐劑誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎模型（AIA）動物品系：SD大鼠、Wistar大鼠實驗分組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組低、中、高三個劑量組實驗周期：12weeks建模方法：一人抓取大鼠，一人于大鼠后足或尾根部皮內(nèi)注射0.1mLCFA即可建立佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型。特點：SD大

大鼠膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹2024/08/14

大鼠膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)炎是社會生活中常見的一種自身免疫性疾病，其發(fā)病機制復(fù)雜，病程長久且難治愈，是各大科研機構(gòu)和藥企研究的熱門，在研究過程中常常需要符合臨床的動物模型，今天就跟大家分享幾種常用于評價治療關(guān)節(jié)炎的動物模型。膠原誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎模型（CIA）動物品系：SD大鼠、Wistar大鼠、Lewis大鼠實驗分組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組低、中、高三個劑量組實驗周期：12weeks建模方法：膠原與不萬全弗氏佐劑（IFA）高速混勻乳化，大鼠麻醉后尾根部皮內(nèi)注射0.4mL混勻的乳