FY200012 人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基
參考價 | ¥ 1580 |
訂貨量 | ≥1瓶 |
- 公司名稱 弗元(上海)生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 FY200012
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2021/5/26 12:07:16
- 訪問次數(shù) 92
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人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基,人間充質(zhì)干細胞成骨誘導試劑盒,人間充質(zhì)干細胞成脂誘導試劑盒,人間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導試劑盒
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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僅用于科學研究
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱:人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基
貨號:FY200012
批號:見包裝
試劑清單:
序號 | 名稱 | 數(shù)量 | 貨號 | 存儲 |
A | 人間充質(zhì)干細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 450 ml ×1 | FY200012-A | 2-8 ℃ |
B | 人間充質(zhì)干細胞添加劑 | 50 ml ×1 | FY200012-B | -20 ℃ |
存儲與有效期:
組分A于2-8 ℃保存,組分B于-20 ℃保存。所有組分均須避免反復凍融及復溫,各組分在所需要的溫度下有效期為1年,配制完成的*培養(yǎng)基于2-8 ℃保存,穩(wěn)定儲存2-3周。
適用細胞:
適用于人骨髓、脂肪、臍帶、羊膜等組織來源的間充質(zhì)干細胞的原代分離、擴增與傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品介紹
人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基是一款具有抗老化作用的人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基,含有胎牛血清成分??蓱?yīng)用于人骨髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質(zhì)干細胞(MSC)的原代分離、擴增與傳代培養(yǎng),并保持MSC的多種生物學特性及多向分化潛能,培養(yǎng)的MSC能夠具有成骨、成脂、成軟骨的分化能力,正常人骨髓MSC表達CD73、CD90、CD105、CD166,不表達CD11b、CD31、CD34、CD45和HLA-DR。MSC在此培養(yǎng)基條件下不具有無限傳代能力。
操作方法
實驗準備
- 人間充質(zhì)干細胞*培養(yǎng)基配制:
- 添加劑處理:37℃快速解凍人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基添加劑(FY200012-B),時間約為10分鐘。添加劑融化后輕輕充分搖勻,分裝或直接按比例添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,分裝后添加劑立即存儲于-20 ℃至-80℃,避免反復凍融。
- 快速溶解有利于保護添加劑中營養(yǎng)物質(zhì)不被破壞,剛?cè)诨呐囵B(yǎng)基添加劑可能會有溶解不充分,出現(xiàn)類似沉淀物,請務(wù)必充分混勻,以保證添加的均勻度。
- *培養(yǎng)基配制:將添加劑以10%比例加入到人間充質(zhì)干細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基(FY200012-A)中,充分混勻,即配制成人間充質(zhì)干細胞*培養(yǎng)基(FY200012)。*培養(yǎng)基在2-8℃可穩(wěn)定儲存2-3周,超過3周的*培養(yǎng)基請謹慎使用。
- 混合成人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基后必須充分混勻,2-8℃保存。整個過程確保無菌操作,各試劑開封前以75%酒精擦拭表面。*培養(yǎng)基使用前務(wù)必室溫復溫至少30分鐘,該操作適用于下列所有用到*培養(yǎng)基的步驟。
- 自備試劑:
- 消化液(0.25%Trypsin-0.04%EDTA或其他)
- 無鈣鎂的磷酸鹽緩沖液(DPBS)
- 細胞凍存液
操作方法(僅供參考,請根據(jù)各自實驗需求自行制定操作規(guī)程)
- 原代細胞培養(yǎng)(羊水、全血、全骨髓培養(yǎng)發(fā)法、酶消化法):
- 該部分以單細胞懸液為操作起始。單細胞獲取方式包括但不限于使用胰酶、膠原酶、分散酶等酶消化法(推薦使用組織細胞消化液RC200104)從脂肪、臍帶、羊膜、皮膚等組織獲得;使用離心法直接從羊水、全血、全骨髓獲得。
- 原代接種:以上方法獲得的細胞沉淀,漩渦震蕩使其分散為單個細胞,加入適量的*培養(yǎng)基,充分混勻。200 g離心5-10分鐘。棄去上清,漩渦震蕩使沉淀分散為單個細胞,加入適量的*培養(yǎng)基,充分混勻。按照一定的細胞密度接種與培養(yǎng)器皿中。37℃、5%CO2、飽和濕度靜置培養(yǎng)48小時。該時間段內(nèi)請勿移動培養(yǎng)器皿,也無需觀察。48小時后觀察細胞,根據(jù)情況選擇半量或全量更換新鮮*培養(yǎng)基。
- 換液培養(yǎng):后每48小時更換新鮮培養(yǎng)基。觀察細胞,棄去原培養(yǎng)上清。若懸浮細胞較多,則可用DPBS輕輕洗滌細胞1-2次。添加新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
- 傳代:原代細胞傳代以克隆大小和克隆中心細胞密度為標準。若克隆中心細胞密度較大,則不論整個培養(yǎng)器皿是否長滿均應(yīng)進行傳代操作。棄去培養(yǎng)上清,加入適量的DPBS,輕輕晃動后棄去DPBS,重復洗滌2-3次。加入適量的0.25%胰蛋白酶消化液(推薦使用間充質(zhì)干細胞消化液,RC200108)室溫消化2分鐘,加入2倍體積的*培養(yǎng)基終止消化。用移液管、吸管或移液槍頭等輕輕吹打細胞,使細胞從培養(yǎng)皿表面脫落。
- 足量的胰酶消化,室溫消化不宜超過2分鐘,吹打細胞時也不宜力量過大,輕輕吹打即可,不脫落細胞直接丟棄。
- 凍存:參照下述“hMSC細胞凍存”。
- 原代細胞培養(yǎng)(組織塊法):
- 該部分以組織塊作為起始。組織塊包括但不限于臍帶、羊膜、皮膚等來源的切成1-3 mm3大小的組織塊。
- 原代接種:用緩沖液清洗過的組織塊,用適量的*培養(yǎng)基懸浮,300目無菌濾網(wǎng)過濾或200 g離心5-10分鐘,收集組織塊。用適量的*培養(yǎng)基重新懸浮組織塊,均勻接種于培養(yǎng)器皿中,37℃、5%CO2、飽和濕度靜置培養(yǎng)。48小時內(nèi)最hao不要對培養(yǎng)器皿進行任何移動。
- 換液:48小時后進行半量或全量更換新鮮*培養(yǎng)基,具體視情況而定。每2天更換新鮮培養(yǎng)液。組織塊周圍有密度較高的細胞時,可以選擇去除組織塊。
- 傳代:參照上述“傳代”方法。
- 凍存:參照下述“hMSC細胞凍存”。
- hMSC細胞傳代培養(yǎng)(非原代):
- 在顯微鏡下觀察細胞,當細胞融合度達到90%,即可傳代。
- 棄去培養(yǎng)上清,加入DPBS溶液清洗1次,加入細胞消化液(推薦使用間充質(zhì)干細胞消化液,RC200108)使其*覆蓋培養(yǎng)器皿底部。
- 室溫孵育1分鐘,輕輕拍打培養(yǎng)器皿,顯微鏡下觀察大部分細胞從培養(yǎng)器皿底部脫落后立即停止消化。
- 加入消化液2倍體積的人間充質(zhì)干細胞*培養(yǎng)基,用移液器輕輕吹打培養(yǎng)器皿地面未*脫離的細胞,使細胞*脫落并均勻分散。
- 將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,200 g離心5分鐘。
- 棄上清,加入*培養(yǎng)基,重懸細胞,計數(shù)。1:3-1:6比例傳代,均勻鋪在培養(yǎng)器皿中,置于37℃、5%CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
- hMSC細胞復蘇:
- 從液氮中取出凍存的hMSC細胞,迅速將凍存管/凍存袋放入復蘇裝置或37℃水浴快速融化。
- 將解凍后的細胞懸液緩慢加入適量*培養(yǎng)基(凍存體積與培養(yǎng)基的體積比為1:5-1:10)。
- 200 g離心5分鐘,棄去上清,加入適量的*培養(yǎng)基重懸細胞。
- 將細胞均勻鋪到培養(yǎng)器皿中,搖動培養(yǎng)器皿使細胞均勻分布,37℃、5%CO2、飽和濕度培養(yǎng),24小時后觀察細胞狀態(tài)。
- 24小時后更換新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),以后每2天更換新鮮*培養(yǎng)基。
- 細胞傳代所需的時間:2-4天。hMSC消化極易過度,建議稀釋0.25%胰酶消化液一倍,且嚴格控制消化時間,消化時長從細胞接觸胰酶開始不易超過2分鐘。
- hMSC細胞凍存
- 細胞達到90%匯合度,棄去原有培養(yǎng)基,DPBS清洗1次。
- 加入細胞消化液(推薦使用間充質(zhì)干細胞消化液,RC200108)使其*覆蓋培養(yǎng)器皿底部,室溫孵育1分鐘,輕輕拍動培養(yǎng)器皿,顯微鏡下觀察大部分細胞從培養(yǎng)器皿底部脫落后立即停止消化。
- 加入消化液2倍體積的人間充質(zhì)干細胞*培養(yǎng)基,用移液器輕輕吹打培養(yǎng)器皿地面未*脫離的細胞,使細胞*脫落并均勻分散。
- 將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,200 g離心5分鐘,棄去上清。
- 加入適量細胞凍存液(推薦使用細胞凍存液Ⅱ,RC200106),調(diào)整細胞凍存密度在1×106 cells/cm2左右,每支凍存管分裝0.5-1 ml,使用凍存袋凍存請自行根據(jù)需要選擇凍存方案。
- 程序降溫儀凍存,或放入凍存盒然后置于-80℃或直接放入-80℃,24小時后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。
- 此處消化液為胰酶消化液。細胞凍存方法有多種,此處介紹的凍存方法為含有DMSO的凍存方式。其他凍存方式請根據(jù)需要自行選擇。
- 以上所有操作均在無菌細胞培養(yǎng)室進行,細胞開放操作要在生物安全柜內(nèi)進行;培養(yǎng)器皿包括培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、細胞工廠等,請根據(jù)實驗需要自行選擇;hMSC切忌消化過度,過度的消化會導致細胞快速老化,且失去部分或全部分化能力;實驗室具體可操作的傳代次數(shù)請自行分析判斷,并建議以分化能力進行判別;該培養(yǎng)基僅用于hMSC細胞培養(yǎng),操作規(guī)程僅作為參考。