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FY200012 人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基

參考價 1580
訂貨量 ≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準

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弗元生物,致力于打造具有guoji影響力的生物醫(yī)學品牌。

 

弗元生物立足于生物科技蓬勃發(fā)展的上海,與張江藥谷、中科院、醫(yī)院等生物醫(yī)學領(lǐng)域的各企事業(yè)單位協(xié)作緊密,共同為中國生物醫(yī)學研究貢獻力量。公司以干細胞與再生醫(yī)學研究為核心,業(yè)務(wù)經(jīng)營范圍輻射到細胞生物學、分子生物學、免疫學等生物醫(yī)學領(lǐng)域的多個相關(guān)學科。

 

公司有技術(shù)服務(wù)事業(yè)部、再生醫(yī)學事業(yè)部和生命科學事業(yè)部三個主要部門。目前,在guoji期刊雜志發(fā)表論文7篇,中文核心期刊發(fā)表論文1篇,申請國家zhuanli15項,擁有商標9項;生命科學事業(yè)部,已經(jīng)上市科研產(chǎn)品十余項,在研產(chǎn)品數(shù)十項;再生醫(yī)學事業(yè)部,具有在研項目多項,包括間充質(zhì)干細胞治療缺氧性腦病、再生醫(yī)學軟骨、再生醫(yī)學骨等,生物人工肝;技術(shù)服務(wù)事業(yè)部,服務(wù)了多家企業(yè)和科研機構(gòu),在再生醫(yī)學的基礎(chǔ)和轉(zhuǎn)化研究上進一步完善了服務(wù)體系。

人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基,人間充質(zhì)干細胞成骨誘導試劑盒,人間充質(zhì)干細胞成脂誘導試劑盒,人間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導試劑盒

供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

僅用于科學研究

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱:人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基

貨號:FY200012

批號:見包裝

試劑清單:

序號

名稱

數(shù)量

貨號

存儲

A

人間充質(zhì)干細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基

450 ml ×1

FY200012-A

2-8 

B

人間充質(zhì)干細胞添加劑

50   ml ×1

FY200012-B

-20 

存儲與有效期:

組分A2-8 ℃保存,組分B-20 ℃保存。所有組分均須避免反復凍融及復溫,各組分在所需要的溫度下有效期為1年,配制完成的*培養(yǎng)基于2-8 ℃保存,穩(wěn)定儲存2-3周。

適用細胞:

適用于人骨髓、脂肪、臍帶、羊膜等組織來源的間充質(zhì)干細胞的原代分離、擴增與傳代培養(yǎng)。

產(chǎn)品介紹

人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基是一款具有抗老化作用的人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基,含有胎牛血清成分??蓱?yīng)用于人骨髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質(zhì)干細胞(MSC)的原代分離、擴增與傳代培養(yǎng),并保持MSC的多種生物學特性及多向分化潛能,培養(yǎng)的MSC能夠具有成骨、成脂、成軟骨的分化能力,正常人骨髓MSC表達CD73、CD90、CD105、CD166,不表達CD11b、CD31、CD34、CD45HLA-DR。MSC在此培養(yǎng)基條件下不具有無限傳代能力。

操作方法

實驗準備

  • 人間充質(zhì)干細胞*培養(yǎng)基配制:
  • 添加劑處理:37℃快速解凍人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基添加劑(FY200012-B),時間約為10分鐘。添加劑融化后輕輕充分搖勻,分裝或直接按比例添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,分裝后添加劑立即存儲于-20 ℃至-80℃,避免反復凍融。
  • 快速溶解有利于保護添加劑中營養(yǎng)物質(zhì)不被破壞,剛?cè)诨呐囵B(yǎng)基添加劑可能會有溶解不充分,出現(xiàn)類似沉淀物,請務(wù)必充分混勻,以保證添加的均勻度。
  • *培養(yǎng)基配制:將添加劑以10%比例加入到人間充質(zhì)干細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基(FY200012-A)中,充分混勻,即配制成人間充質(zhì)干細胞*培養(yǎng)基(FY200012)。*培養(yǎng)基在2-8℃可穩(wěn)定儲存2-3周,超過3周的*培養(yǎng)基請謹慎使用。
  • 混合成人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基后必須充分混勻,2-8保存。整個過程確保無菌操作,各試劑開封前以75%酒精擦拭表面。*培養(yǎng)基使用前務(wù)必室溫復溫至少30分鐘,該操作適用于下列所有用到*培養(yǎng)基的步驟。
  • 自備試劑:
    • 消化液(0.25%Trypsin-0.04%EDTA或其他)
    • 無鈣鎂的磷酸鹽緩沖液(DPBS
    • 細胞凍存液

操作方法(僅供參考,請根據(jù)各自實驗需求自行制定操作規(guī)程)

  • 原代細胞培養(yǎng)(羊水、全血、全骨髓培養(yǎng)發(fā)法、酶消化法):
    1. 該部分以單細胞懸液為操作起始。單細胞獲取方式包括但不限于使用胰酶、膠原酶、分散酶等酶消化法(推薦使用組織細胞消化液RC200104)從脂肪、臍帶、羊膜、皮膚等組織獲得;使用離心法直接從羊水、全血、全骨髓獲得。
    2. 原代接種:以上方法獲得的細胞沉淀,漩渦震蕩使其分散為單個細胞,加入適量的*培養(yǎng)基,充分混勻。200 g離心5-10分鐘。棄去上清,漩渦震蕩使沉淀分散為單個細胞,加入適量的*培養(yǎng)基,充分混勻。按照一定的細胞密度接種與培養(yǎng)器皿中。37℃、5%CO2、飽和濕度靜置培養(yǎng)48小時。該時間段內(nèi)請勿移動培養(yǎng)器皿,也無需觀察。48小時后觀察細胞,根據(jù)情況選擇半量或全量更換新鮮*培養(yǎng)基。
    3. 換液培養(yǎng):后每48小時更換新鮮培養(yǎng)基。觀察細胞,棄去原培養(yǎng)上清。若懸浮細胞較多,則可用DPBS輕輕洗滌細胞1-2次。添加新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
    4. 傳代:原代細胞傳代以克隆大小和克隆中心細胞密度為標準。若克隆中心細胞密度較大,則不論整個培養(yǎng)器皿是否長滿均應(yīng)進行傳代操作。棄去培養(yǎng)上清,加入適量的DPBS,輕輕晃動后棄去DPBS,重復洗滌2-3次。加入適量的0.25%胰蛋白酶消化液(推薦使用間充質(zhì)干細胞消化液,RC200108)室溫消化2分鐘,加入2倍體積的*培養(yǎng)基終止消化。用移液管、吸管或移液槍頭等輕輕吹打細胞,使細胞從培養(yǎng)皿表面脫落。
  • 足量的胰酶消化,室溫消化不宜超過2分鐘,吹打細胞時也不宜力量過大,輕輕吹打即可,不脫落細胞直接丟棄。
    1. 凍存:參照下述“hMSC細胞凍存”。
  • 原代細胞培養(yǎng)(組織塊法):
    1. 該部分以組織塊作為起始。組織塊包括但不限于臍帶、羊膜、皮膚等來源的切成1-3 mm3大小的組織塊。
    2. 原代接種:用緩沖液清洗過的組織塊,用適量的*培養(yǎng)基懸浮,300目無菌濾網(wǎng)過濾或200 g離心5-10分鐘,收集組織塊。用適量的*培養(yǎng)基重新懸浮組織塊,均勻接種于培養(yǎng)器皿中,37℃、5%CO2、飽和濕度靜置培養(yǎng)。48小時內(nèi)最hao不要對培養(yǎng)器皿進行任何移動。
    3. 換液:48小時后進行半量或全量更換新鮮*培養(yǎng)基,具體視情況而定。每2天更換新鮮培養(yǎng)液。組織塊周圍有密度較高的細胞時,可以選擇去除組織塊。
    4. 傳代:參照上述“傳代”方法。
    5. 凍存:參照下述“hMSC細胞凍存”。
  • hMSC細胞傳代培養(yǎng)(非原代):
    1. 在顯微鏡下觀察細胞,當細胞融合度達到90%,即可傳代。
    2. 棄去培養(yǎng)上清,加入DPBS溶液清洗1次,加入細胞消化液(推薦使用間充質(zhì)干細胞消化液,RC200108)使其*覆蓋培養(yǎng)器皿底部。
    3. 室溫孵育1分鐘,輕輕拍打培養(yǎng)器皿,顯微鏡下觀察大部分細胞從培養(yǎng)器皿底部脫落后立即停止消化。
    4. 加入消化液2倍體積的人間充質(zhì)干細胞*培養(yǎng)基,用移液器輕輕吹打培養(yǎng)器皿地面未*脫離的細胞,使細胞*脫落并均勻分散。
    5. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,200 g離心5分鐘。
    6. 棄上清,加入*培養(yǎng)基,重懸細胞,計數(shù)。13-16比例傳代,均勻鋪在培養(yǎng)器皿中,置于37℃、5%CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
  • hMSC細胞復蘇:
    1. 從液氮中取出凍存的hMSC細胞,迅速將凍存管/凍存袋放入復蘇裝置或37℃水浴快速融化。
    2. 將解凍后的細胞懸液緩慢加入適量*培養(yǎng)基(凍存體積與培養(yǎng)基的體積比為15-110)。
    3. 200 g離心5分鐘,棄去上清,加入適量的*培養(yǎng)基重懸細胞。
    4. 將細胞均勻鋪到培養(yǎng)器皿中,搖動培養(yǎng)器皿使細胞均勻分布,37℃、5%CO2、飽和濕度培養(yǎng),24小時后觀察細胞狀態(tài)。
    5. 24小時后更換新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),以后每2天更換新鮮*培養(yǎng)基。
  • 細胞傳代所需的時間:2-4天。hMSC消化極易過度,建議稀釋0.25%胰酶消化液一倍,且嚴格控制消化時間,消化時長從細胞接觸胰酶開始不易超過2分鐘。
  • hMSC細胞凍存
    1. 細胞達到90%匯合度,棄去原有培養(yǎng)基,DPBS清洗1次。
    2. 加入細胞消化液(推薦使用間充質(zhì)干細胞消化液,RC200108)使其*覆蓋培養(yǎng)器皿底部,室溫孵育1分鐘,輕輕拍動培養(yǎng)器皿,顯微鏡下觀察大部分細胞從培養(yǎng)器皿底部脫落后立即停止消化。
    3. 加入消化液2倍體積的人間充質(zhì)干細胞*培養(yǎng)基,用移液器輕輕吹打培養(yǎng)器皿地面未*脫離的細胞,使細胞*脫落并均勻分散。
    4. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,200 g離心5分鐘,棄去上清。
    5. 加入適量細胞凍存液(推薦使用細胞凍存液Ⅱ,RC200106),調(diào)整細胞凍存密度在1×106 cells/cm2左右,每支凍存管分裝0.5-1 ml,使用凍存袋凍存請自行根據(jù)需要選擇凍存方案。
    6. 程序降溫儀凍存,或放入凍存盒然后置于-80℃或直接放入-80℃,24小時后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。
  • 此處消化液為胰酶消化液。細胞凍存方法有多種,此處介紹的凍存方法為含有DMSO的凍存方式。其他凍存方式請根據(jù)需要自行選擇。
  • 以上所有操作均在無菌細胞培養(yǎng)室進行,細胞開放操作要在生物安全柜內(nèi)進行;培養(yǎng)器皿包括培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、細胞工廠等,請根據(jù)實驗需要自行選擇;hMSC切忌消化過度,過度的消化會導致細胞快速老化,且失去部分或全部分化能力;實驗室具體可操作的傳代次數(shù)請自行分析判斷,并建議以分化能力進行判別;該培養(yǎng)基僅用于hMSC細胞培養(yǎng),操作規(guī)程僅作為參考。

 



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