產(chǎn)品編號(hào)：

RC200108-100ML

存儲(chǔ)條件：

2-8 ℃避光保存，有效期12個(gè)月。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品專為貼壁培養(yǎng)的人間充質(zhì)干細(xì)胞傳代設(shè)計(jì)，是即用型間充質(zhì)干細(xì)胞消化液。主要功能成分為重組胰蛋白酶、EDTA。該產(chǎn)品消化人間充質(zhì)干細(xì)胞較為溫和，避免細(xì)胞因?yàn)閯×业南l(fā)生老化和分化，與無(wú)血清培養(yǎng)基配合，在間充質(zhì)干細(xì)胞治療用研究中能有效保持細(xì)胞生物學(xué)特性。

適用于人間充質(zhì)干細(xì)胞hMSCs，包括人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞hBMSCs、人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞hAMSC、人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞hAD-MSCs、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞hUMSCs等。同樣適用于其他貼壁培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞消化傳代，包括293、Hela、NIH3T3等，具體使用時(shí)請(qǐng)自行分析判斷對(duì)細(xì)胞類型的影響。

適用實(shí)驗(yàn)與操作過(guò)程：

1. 間充質(zhì)干細(xì)胞消化
   1. 細(xì)胞準(zhǔn)備：將待消化的貼壁人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)器皿置于超凈工作臺(tái)。
   2. 90%左右，密度過(guò)大會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞分化或老化。
   2. 細(xì)胞清洗：吸棄培養(yǎng)上清，加入與培養(yǎng)液等量的PBS洗細(xì)胞一次。
   3.  
   3. 細(xì)胞消化：棄去清洗細(xì)胞的PBS，加入適量的間充質(zhì)干細(xì)胞消化液，輕輕搖動(dòng)以使消化液均勻分布，室溫水平靜置消化1-2分鐘。
   4. 2/5，如T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶加入2 ml，請(qǐng)以*覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。間充質(zhì)干細(xì)胞消化液使用前必須室溫復(fù)溫。消化過(guò)程中可以進(jìn)行顯微鏡觀察，可見(jiàn)細(xì)胞很快回縮成圓形，輕輕震動(dòng)培養(yǎng)器皿大多數(shù)細(xì)胞即可脫落。
   4. 終止消化：加入2倍體積的間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（RC200101），快速混勻以終止細(xì)胞消化。
   5. 細(xì)胞收集：輕輕吹打細(xì)胞，使細(xì)胞從培養(yǎng)表面脫落。將細(xì)胞懸液移入離心管中，200 g離心5分鐘，獲得細(xì)胞沉淀。
   6. 1-2分鐘便可很容易脫壁，某些不易吹打脫壁的細(xì)胞建議舍棄。
2. 其他實(shí)驗(yàn)應(yīng)用
   1. 本產(chǎn)品可適用于組織細(xì)胞消化。如配合組織細(xì)胞消化液（RC200104）消化人羊膜，獲取羊膜上皮細(xì)胞與羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞。
   2. 本產(chǎn)品可適用于貼壁不牢的細(xì)胞消化。如用于消化293T、NIH2T2等細(xì)胞，可以更好保護(hù)細(xì)胞活性。

注意事項(xiàng)與常見(jiàn)問(wèn)題：

1. 適用的細(xì)胞類型？

本產(chǎn)品為人間充質(zhì)干細(xì)胞消化傳代設(shè)計(jì)，經(jīng)過(guò)驗(yàn)證能很好保護(hù)hMSCs活性。本產(chǎn)品消化較溫和，貼壁不牢固的間質(zhì)類細(xì)胞同樣適用。一些貼壁不牢的細(xì)胞，如293T也較為適用。

2. 間充質(zhì)干細(xì)胞的消化時(shí)長(zhǎng)？

人間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁較上皮細(xì)胞松散，消化時(shí)較容易脫壁。無(wú)血清體系培養(yǎng)的人間充質(zhì)干細(xì)胞更容易脫壁。所以，建議消化時(shí)間為1分鐘，務(wù)必控制在2分鐘以內(nèi)。時(shí)間以消化液接觸細(xì)胞的時(shí)間開(kāi)始計(jì)算。

3. 間充質(zhì)消化時(shí)一些細(xì)胞不脫壁？

首先，確定消化液分布是否均勻，消化液的量是否足夠，消化過(guò)程中是否有些細(xì)胞未被消化液覆蓋。排出以上因素后，看細(xì)胞是少部分還是大多數(shù)未脫壁，若絕大多數(shù)未脫壁，可能是消化前細(xì)胞清洗不夠。若僅有部分未脫壁，可能是此部分細(xì)胞不是目標(biāo)間充質(zhì)干細(xì)胞，建議放棄此部分細(xì)胞。

4. 消化后是否要快速終止？

間充質(zhì)干細(xì)胞極易消化，消化結(jié)束建議快速終止消化。消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致細(xì)胞老化、分化，或者會(huì)使得一些非間充質(zhì)干細(xì)胞類型的細(xì)胞混入而導(dǎo)致細(xì)胞純度降低。終止時(shí)可以使用含血清的*培養(yǎng)基；建議使用人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（RC200101）終止消化，這樣可以在終止消化的同時(shí)保護(hù)細(xì)胞的狀態(tài)。