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人工生命是非生命手段對生命基本特征的模擬2011/01/25

人工生命是通過把隱藏在生命現(xiàn)象背后的基本的、動態(tài)的原理抽象出來，并在其他物理媒介（如計算機）上重現(xiàn)這一過程，使之可以進行全新類型的實驗操作和檢驗，從而理解生命?？傮w上說，人工生命的核心是利用適當(dāng)?shù)姆巧^程手段，通過對生命的基本特征（新陳代謝、生長、繁殖、遺傳、變異、學(xué)習(xí)、進化等）進行模擬，以深化人們對生命現(xiàn)象的認識。人工生命的研究手段大致有3種：軟件法、硬件法與濕件法。其中，軟件法是指以計算機程序作為模擬生命過程的載體；硬件法是通過機械和電子的手段再現(xiàn)生命的某些屬性；濕件法則是指采用化學(xué)或物理

轉(zhuǎn)基因食品的生物檢測技術(shù)2011/01/25

目前實驗室研究的檢測技術(shù)可分為三大類：免疫學(xué)方法、核酸探針法和分子標(biāo)記法，主要是檢測食品或原料中重組DNA或其表達產(chǎn)物如蛋白質(zhì)等。蛋白檢測—ELISA分析法適用于無須加工的原料性食品，但對于加工品則有局限性，因為重組基因產(chǎn)物會因加工處理而失活、分解或消失，使檢測的不確定性增加。DNA在加工中穩(wěn)定性較好，因此加工性轉(zhuǎn)基因食品的檢測方法常常針對DNA設(shè)計。適用于重組DNA的檢測方法有DNA雜交、AFLP和PCR等。與ELISA相比，PCR靈敏度高，可用于微量分析和較多的加工品。

人類基因組研究--大片段外源DNA克隆體系2011/01/25

（1）酵母人工染色體克隆體系（YAC）這種克隆體系是20世紀80年代末發(fā)展起來的，并于1990年底漸趨完善的大片段外源DNA克隆體系。插入YAC載體的外源DNA片段可達200l000kb甚至更多，并能穩(wěn)定復(fù)制。現(xiàn)在YAC已成為構(gòu)建復(fù)雜基因組的有力手段。（2）黏?？寺?，n噬菌體和細菌人工染色體黏粒克隆的出現(xiàn)早于YAC，其主要特點是插入的外源片段比入噬菌體DNA大得多。因此在篩選基因文庫時可以減少一半工作量。P1噬菌體的溶源狀態(tài)奇特，不整合到宿主的染色體上，像質(zhì)粒一樣作為一個自主復(fù)制單位游離于宿主染

炭疽的臨床特征2011/01/19

1．牛潛伏期1～5天。zui急性者表現(xiàn)突然倒地，呼吸困難，結(jié)膜發(fā)紺，全身戰(zhàn)栗，心悸亢進，天然孔出血，數(shù)小時內(nèi)死亡。急性者體溫升高，精神沉郁，食欲減退，反芻減弱或停止，黏膜發(fā)紺或有小出血點。初期便秘，接著就腹痛腹瀉，便中帶血，尿呈暗紅色，孕牛流產(chǎn)。瀕死期體溫下降，呼吸困難，痙攣發(fā)抖，常于1—2日內(nèi)死亡。亞急性者病程較長，病情較緩和，多于體表、直腸、口腔黏膜等處發(fā)生炭疽癰。初期硬團，有熱有痛，以后熱痛消失，有時壞死，形成潰瘍。牛舌腫大，或有出血和潰瘍即“木舌癥”。2．羊綿羊zui易感，多為zui急性

結(jié)核菌素點眼反應(yīng)2011/01/19

牛結(jié)核菌素，每次進行2次反應(yīng)，間隔3-5天?！?）方法點眼前，對兩眼作詳細檢查，正常時方可點眼，有眼病或結(jié)膜不正常者，不可作點眼檢疫。結(jié)核菌素一般點于左眼，左眼有眼病時可點于右眼，但須在記錄上注明：用量為3-5滴，約o．2一o．3ml。點眼后。注意將牛拴好，防止風(fēng)沙侵入眼內(nèi)，避免陽光直射牛頭部以及牛與周圍物體摩擦。（2）觀察反應(yīng)點眼后，于3h、6h、9h各觀察1次，必要時可觀察24h的反應(yīng)。觀察時，注意兩眼的結(jié)膜與眼瞼腫脹的狀態(tài)，流淚及分泌物的性質(zhì)和量的多少，由于結(jié)核菌素而引起的食欲減少或停止

豬丹毒分子生物學(xué)診斷技術(shù)2011/01/19

日本Okayama大學(xué)的研究者們建立了檢測豬丹毒的PCR方法（1999）。常規(guī)細菌培養(yǎng)檢測豬丹毒至少要3天，鑒定血清型大約要lo天，而這種PCR法可在5h內(nèi)完成。它使用兩步擴增法，先用高度特異性引物組M0101-M0102進行初步擴增之后，再添加4種特異性寡核苷酸引物組對4種不同血清型豬丹毒的16SrRNA序列進行擴增。rRNA基因簇包括16SrRNA、23SrRNA、5SrRNA、下游非編碼區(qū)。對該簇編碼的DNA序列進行測定，以設(shè)計種特異性PCR檢測系統(tǒng)的引物。豬紅斑丹毒絲菌2型、3型、18型

檢測大腸桿菌的PCR技術(shù)2011/01/19

中美學(xué)者合作，對3．3kb的DNA探針進行了序列分析，發(fā)現(xiàn)其編碼EHEC溶血素AB基因，此基因與已發(fā)表的泌尿道大腸桿菌等的溶血素在DNA序列和氨基酸序列有所不同，是EHEC*的，并以此為基礎(chǔ)，發(fā)展了PCR檢測方法。此法特異、敏感、快速，可在3—4h左右出結(jié)果。Brian等針對VT基因A亞單位分別設(shè)計出SLTl引物和SLT2引物和雜交用的寡核苷酸探針。兩對引物可同時擴增EHEC的SLTl和SLT2，先后擴增出370bp和283bp的產(chǎn)物，并用放射性探針予以證實，而非EHEC擴增為陰性。這種方法還可

DNA限制酶批注討論2011/01/18

a.限制酶：可購自RocheMolecularBiochemicals（即以前的BoehringerMannheimBiochemicals）,Invitrogen（即以前的LifeTechnologies或GibcoBRL）,NewEnglandBioLabs（BioLabs）或其它公司。b.限制酶的貯存與取用：反復(fù)解凍與凍結(jié)是任何酵素的大忌，因此不可存放于無霜冰箱中。大部份限制酶購買來時即保存在50%glycerol中，存放在-20℃時不會凍結(jié)。有些限制酶相當(dāng)不穩(wěn)定，必須存放在-70℃，請避

Silica gel吸附法分離與純化DNA片段2011/01/18

藥品試劑：經(jīng)BamHI及HindIII作用的pBlueGus及pQE31含EtBr的1.2%12-wellagarosegel1×TAE電泳緩沖液QIAquickGelExtractionKit（Qiagen），內(nèi)含：QIAquickspincolumn（管柱底部為silicagelmembrane）BufferQGBufferPEBufferEB（10mMTris-HCl,pH8.5）2mL收集管TE-8.0方法步驟：1）經(jīng)BamHI及HindIII作用的pBlueGus及pQE31，置于65

電穿孔法進行質(zhì)體的轉(zhuǎn)形=2011/01/18

儀器用具：37℃培養(yǎng)箱及冰浴Electroporationcuvette（electrodegap,0.1cm）Electroporator（Bio-Rad,IBIgeneZapper或其它廠牌）藥品試劑：無菌水（置冰浴中）10%glycerol（置冰浴中）SOB液體培養(yǎng)基SOB固體培養(yǎng)基SOC液體培養(yǎng)基SOC/Amp固體培養(yǎng)基大腸桿菌JM109Ligationmixtures方法步驟：菌體的處理：1）進行轉(zhuǎn)形實驗的前16~20h，將菌種JM109接種在SOB固體培養(yǎng)基上，并在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

電穿孔法進行質(zhì)體的轉(zhuǎn)形\2011/01/18

器用具：37℃培養(yǎng)箱及冰浴Electroporationcuvette（electrodegap,0.1cm）Electroporator（Bio-Rad,IBIgeneZapper或其它廠牌）藥品試劑：無菌水（置冰浴中）10%glycerol（置冰浴中）SOB液體培養(yǎng)基SOB固體培養(yǎng)基SOC液體培養(yǎng)基SOC/Amp固體培養(yǎng)基大腸桿菌JM109Ligationmixtures方法步驟：菌體的處理：1）進行轉(zhuǎn)形實驗的前16~20h，將菌種JM109接種在SOB固體培養(yǎng)基上，并在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

Southern 轉(zhuǎn)印分析\2011/01/18

在膠體中的DNA可利用毛細現(xiàn)象的作用將DNA牽引轉(zhuǎn)印至覆蓋在膠片上的濾膜，經(jīng)烘烤或UV照射后，可使DNA固定在膜上，以進行探針的雜合（hybridization）反應(yīng)。儀器用具：玻璃缸;玻璃板或吸水海綿;Crosslinker（Stratalinker1800,Stratagene）藥品試劑：10×SSC（1.5MNaCl;0.15Msodiumcitrate）或20×SSC變性溶液（1.5MNaCl;0.5NNaOH）中和溶液（1MTris-Cl;1.5MNaCl,pH7.5）Nylonmem

以DIG 標(biāo)定核酸探針02011/01/18

DNA探針一般可以用32P,35S或非放射性物質(zhì)如biotin及digoxigenin（DIG）加以標(biāo)定；標(biāo)定時利用DNA聚合酶的活性，在DNA聚合反應(yīng)中，另加入[α-32P]dATP,[α-32P]dCTP或DIG-11-dUTP等標(biāo)定物質(zhì)，所合成出來的即是被標(biāo)定的核酸片段。目前常見的方法包括nicktranslation,randompriming與polymerasechainreaction（PCR）等。若須對DNA進行endlabeling時，可以進行kinase或filling-in

（Random priming）2011/01/18

DNA聚合酶要進行DNA聚合反應(yīng)時一定要有引子（primer），因為它只能以引子所提供的3’-OH為起始點進行延伸（extension）的工作，而不能就地重新合成新的DNA（denovosynthesis）。一般實驗常以人工合成的寡核苷酸為引子進行DNA聚合反應(yīng)，這時固然可以根據(jù)已知序列設(shè)計核酸引子，但也可以采用逢機引子（randomprimers）。所謂逢機引子即其序列為逢機序列，不經(jīng)特別設(shè)計，目前應(yīng)用zui廣者是以自動化機器所合成的、六到八個核苷酸長的寡核苷酸混合物；反應(yīng)進行中若有任何一條逢

制備電泳分析所需的RNA 樣本2011/01/18

制備電泳分析所需的RNA樣本1）取出8支1.5mL微量離心管，分別標(biāo)示為U-1,U-2,I-1,I-2,#1,#2,#3及#4，并根據(jù)下表所示依序加入各項試劑（體積單位為μL）。??U-1,U-2,I-1及I-2分別為大腸桿菌所分得的RNA，#1,#2,#3及#4分別是胞外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所得到的RNA。2）混合均勻并離心數(shù)秒后，放置于65℃恒溫水槽作用15min。3）將作用完的微量離心管移置于冰浴中。4）離心數(shù)秒后，再將離心管放回于冰浴中，并于各離心管分別加入2μL的formaldehydegello

北方雜合反應(yīng)2011/01/18

北方雜合反應(yīng)的步驟主要包括：（1）加入核酸探針，使與固定于尼龍膜上的特定RNA進行雜合反應(yīng)，及（2）待雜合反應(yīng)結(jié)束后以含鹽緩沖液與SDS洗掉非專一性結(jié)合于尼龍膜上的核酸探針。進行反應(yīng)時應(yīng)注意下列幾個問題：（1）實驗操作過程仍應(yīng)盡可能避免RNase的污染；（2）反應(yīng)前應(yīng)先進行雜合前置反應(yīng)（prehybridization），以便減少核酸探針與尼龍膜的間的非專一性結(jié)合反應(yīng)；（3）如果所使用的核酸探針是以randompriming或PCR等方法所制備的雙股DNA探針，使用前務(wù)必先加熱變性；（4）選用適

乳膠顆粒凝集試驗（LPAT）檢測與鑒定熱不穩(wěn)定腸毒素2011/01/12

由Finkelstein等建立，方法如下。①乳膠敏化取lOlL羊抗人源LT-I血清與19OμlpH8、2甘氨酸緩沖鹽水混勻，再加等體積乳膠制劑，混勻，37℃水浴孵育2h，每15min振搖1次，然后加入用上述緩沖液稀釋的O．1％牛血清白蛋白600uL，3Orain而后即可使用。②待檢菌液制備從MacC或EMB或；HE等瓊脂上挑取待檢菌落，在裝有3Ortl的20000U／ml多黏菌素B的Tris-NaCl緩沖液的指形管內(nèi)制成菌懸液，37℃水浴溫育5～3Omin（視菌液濃度而定），離心沉淀細胞，上清液

沙門菌病的血清學(xué)檢測方法2011/01/12

（1）雞白痢全血平板凝集試驗用于雞白痢的凈化檢疫，現(xiàn)場采集雞全血，與雞白痢沙門菌標(biāo)準(zhǔn)菌株制備的抗原進行凝集試驗，根據(jù)凝集程度判斷試驗結(jié)果。該方法省時節(jié)力，易于操作，但是特異性和敏感性低。（2）競爭ELISA檢測方法以特定血清型的沙門菌作為包被抗原，利用酶標(biāo)O抗原特異性單抗酶建立的競爭ELISA方法檢測沙門菌抗體。殷月蘭等利用焦新安研制的09單抗，建立了豬霍亂抗體競爭ELISA檢測方法，與平板凝集試驗（PAT）同時對506份血清樣品進行了豬霍亂抗體檢測，PAT的檢出率為3．60％，ELISA檢出率

金葡菌特異性鑒別基因2011/01/12

在金葡菌的檢測方面，近年來很多學(xué)者逐漸探索了一些有很強特異性的鑒別基因，主要包括如下幾種。a．耐熱核酸酶基因（heatstablenuelease，nuc）。耐熱核酸酶（thermostablenuclease，TNase）是金葡菌的特異性酶，通過檢測TNase酶活性以鑒定金葡菌通常有較好的專一性和準(zhǔn)確性，但也存在一些非金葡菌株可檢測到該酶活性的例子，其原因尚不清楚，可能是由于其可產(chǎn)生與TNase活性相似的酶。編碼酶蛋白的nuc基因已全部定序。通過nuc基因的特異擴增來檢測金葡菌已被證實具有非常

副溶血性弧菌檢測的免疫學(xué)方法2011/01/12

免疫學(xué)方法特異性強、靈敏度高、易于觀察、應(yīng)用廣泛。血清學(xué)反應(yīng)是zui基本的免疫學(xué)反應(yīng)，主要用于細菌分型。目前，通過血清學(xué)反應(yīng)，V．p可分為13種O血清型、71種K血清型。正確的分型為流行病學(xué)調(diào)查和臨床用藥提供依據(jù)。但此反應(yīng)只能大概區(qū)分不同地區(qū)和來源的菌株，而且由于抗原位點受環(huán)境等因素的影響易發(fā)生突變，出現(xiàn)新的血清型時，以現(xiàn)有的血清檢測就會漏檢。目前，應(yīng)用zui廣泛的免疫學(xué)方法是酶聯(lián)免疫吸附法（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）。該方法從抗體的包被到酶聯(lián)顯色